الكرات المجهرية الفلورية ذات الدقة الزمنية

1. مقدمة عن منتج الكرات الفلورية المجهرية المحلولة زمنيًا

صُممت الكريات المجهرية الفلورية المُحللة زمنيًا لكواشف التحليل المناعي ذات التدفق الجانبي، وهي مصنوعة من أصباغ فلورية مُحللة زمنيًا مُبلمرة مع ستيرين. تتميز الكريات المجهرية الفلورية المُحللة زمنيًا بإزاحة كبيرة للستوكس، وعدم وجود تأثير إخماد داخلي أثناء التجميع، وإشارة كشف قوية، وصبغة فلورية مُغلفة بالكرات المجهرية، وعدم تأثرها بسهولة بالبيئة الخارجية، وفلورة مستقرة. تُعد هذه الكريات مؤشرًا مثاليًا للكروماتوغرافيا الكمية المناعية الفلورية.

2. معلمات المجهرية

1. المكونات: كريات مجهرية من البوليسترين المعدل معدلة بمجمعات الفلورسنت من عنصر اليوروبيوم الأرضي النادر

2. المحتوى الصلب: 1% (1 مل معلق يحتوي على 10 ملغ من الكريات المجهرية)

3. متوسط حجم الجسيمات: 200 نانومتر

4. توحيد حجم الجسيمات: CV<5%

5. المجموعات الوظيفية: مجموعة الكربوكسيل، مجموعة الكبريتات، إلخ.

6. محتوى الكربوكسيل: 200±10μmol/g

7. خصائص الإسفار: الطول الموجي للإثارة: 365 نانومتر، الطول الموجي للانبعاثات: 610 نانومتر

8. عمر الإسفار: 720μs

9. الكثافة: 1.05 جم/سم 3

10. معامل الانكسار: 1.59 (589 نانومتر، 25 درجة مئوية)

11. المظهر: مستحلب أبيض
ثالثاً: الحفاظ على الميكروسفير
شروط التخزين: يحفظ في درجة حرارة 2-8 درجة مئوية، محمي من الضوء، محكم الغلق، ولا يمكن تجميده وإذابته بشكل متكرر. 4. كيفية الاستخدام

(1) خطوات التنشيط:

1. قم بتفريق الكريات الدقيقة بالموجات فوق الصوتية لمدة دقيقتين تقريبًا، ثم رجها يدويًا؛

2. في أنبوب 2 مل EP، أضف 100 ميكرولتر من الكرات المجهرية (المحتوى الصلب 1%)، ثم أضف 900 ميكرولتر من الماء عالي النقاوة (أو محلول MES) واتركه جانبًا؛

3. التحضير:

10 ملغم/مل محلول إيثانول N-هيدروكسي سوسينيميد (NHS) محلول
10 ملغ / مل 1- (3-ثنائي ميثيل أمينوبروبيل) -3-إيثيل كاربوديميد هيدروكلوريد (EDC) محلول الإيثانول B
ملحوظة: كل من NHS وEDC كلاهما سهل امتصاص الرطوبة. يحتاج هذان الكاشفان إلى إعادة التدفئة لأكثر من 30 دقيقة قبل وزنهما.

4. أضف 5 ميكرولتر من المحلول A إلى التعليق الميكروي واخلط جيدًا، ثم أضف 5 ميكرولتر من المحلول B، واخلط مرة أخرى، وتفاعل في درجة حرارة الغرفة لمدة 15 إلى 30 دقيقة؛

5. جهاز طرد مركزي عند 14000 دورة/دقيقة لمدة 15 دقيقة، وإزالة المادة الطافية، وإضافة 1 مل من الماء عالي النقاء (أو عازلة اقتران الجسم المضاد)، ثم تفريقها بالتساوي بواسطة الموجات فوق الصوتية.
ملاحظة: تأكد من التفريق جيدًا، وإلا فإن الكرات المجهرية بعد ربط الجسم المضاد سوف تتكتل بسهولة وسيعمل الشريط بشكل سيئ.

(2) الارتباط المتبادل للأجسام المضادة

انتبه بشكل خاص إلى ما إذا كان الجسم المضاد المستخدم للربط المتبادل يترسب. في حالة حدوث هطول، يحتاج الجسم المضاد إلى الطرد المركزي أو التصفية، وإلا فإن الكرات المجهرية المترابطة سوف تتكتل. الأجسام المضادة التي تم ترشيحها أو طردها تحتاج إلى إعادة تحديد تركيز الأجسام المضادة.
كمية الجسم المضاد المتقاطع على سطح الكرات المجهرية هي: الجسم المضاد/الكرات المجهرية = 10~50 ميكروجرام/مجم، وكمية وضع العلامات المثالية بشكل عام هي 20 ميكروجرام/مجم.

خطوات الارتباط المتبادل للأجسام المضادة:

1. خذ 1 مل من المعلق الكروي المنشط أعلاه، وقم بتوزيعه بالموجات فوق الصوتية، ثم أضف الجسم المضاد قطرة قطرة أثناء التحريك. الجرعة المثلى من الأجسام المضادة هي 20 ميكروغرام.
ملاحظة: الجسم المضاد عبر ربط المخزن المؤقت الموصى به هو المخزن المؤقت لحمض البوريك، 0.02mol/L، ودرجة الحموضة = 8.0. يحتوي كل جسم مضاد على المخزن المؤقت الأمثل للربط المتبادل (النوع، التركيز، الرقم الهيدروجيني)، والذي تحتاج إلى استكشافه بنفسك.

2. امزج في درجة حرارة الغرفة لمدة ساعة واحدة، ثم اختبر أداء الكرات المجهرية بعد اقتران الجسم المضاد؛
ملاحظة: يمكن استخدام شرائط الاختبار المغلفة بـ IgG المضادة للفأر لاختبار السيولة وأداء التعرف على الأجسام المضادة للكريات المجهرية بعد الربط المتبادل للأجسام المضادة.

3. أضف BSA (التركيز النهائي عند 0.5%) للحظر لمدة ساعة واحدة؛

4. جهاز طرد مركزي بسرعة 13000 دورة/دقيقة لمدة 15 دقيقة؛

5. يضاف 1 مل من محلول الحفظ إلى الكريات المجهرية ويخلط جيداً ويحفظ في الثلاجة بعيداً عن الضوء لحين الاستخدام.

ملحوظة: نظرًا لاختلاف الأجسام المضادة لكل مشروع، فأنت بحاجة إلى استكشاف أفضل حل للحفظ بنفسك. صيغة محلول الحفظ الأساسية هي: 10% سكروز (وزن/حجم)، 0.01 مول/لتر PB pHPB pH=7.4.