Microsphères de streptavidine 5um SAPS5UM-10 1 %

Microsphères de streptavidine 5 µm pour la cytométrie en flux

SHBC Les microsphères de streptavidine SAPS5UM-10 sont des microsphères fonctionnalisées en surface de 5 µm développées pour immobiliser les anticorps biotinylés, les antigènes, les protéines, les peptides, les oligonucléotides, les DNA , RNA , les aptamères et autres biomolécules marquées à la biotine.

Le produit est fourni sous forme de suspension à 1 % de solides et est conçu pour les analyses de billes de cytométrie en flux, le développement de tests immunologiques basés sur des particules, la recherche sur la liaison par affinité, la capture d'acide nucléique, l'analyse des interactions biomolécules et la fabrication de réactifs de recherche.

Shanghai SanYu Biotechnology Co., Ltd. prend en charge l'évaluation d'échantillons en laboratoire, le développement à l'échelle pilote, la production répétée, les projets OEM et l'approvisionnement en gros pour les entreprises de biotechnologie, les instituts de recherche, les universités, les laboratoires de cytométrie en flux, les fabricants d'instruments et les organisations de développement de réactifs.

Réponse rapide au produit

SAPS5UM-10 est une suspension de microsphères enrobées de streptavidine de 5 µm et fournie à 1 % de solides. La surface fonctionnelle de la streptavidine capture les biomolécules biotinylées et peut être utilisée pour développer des analyses de billes de cytométrie en flux, des analyses immunologiques sandwich, des systèmes de capture par affinité, des analyses d'hybridation d'acide nucléique, des études d'interactions protéiques et des plateformes de recherche multiplexées basées sur des particules.

Points forts du produit

• Nom du produit : Microsphères de streptavidine de 5 µm

• Numéro de catalogue : SAPS5UM-10

• Marque : SHBC

• Fabricant : Shanghai SanYu Biotechnology Co., Ltd.

• Diamètre nominal des particules : 5 µm

• Modification de surface : streptavidine

• Teneur en matières solides : 1 %

• Principe de liaison : affinité streptavidine-biotine

• Forme physique : Suspension aqueuse de microsphères

• Application principale : recherche sur les tests de cytométrie en flux

• Capacité d’approvisionnement : échantillons, lots pilotes et production en vrac

• Personnalisation : Disponible selon faisabilité technique

• Utilisation prévue : Utilisation pour la recherche uniquement

Que sont les microsphères de streptavidine SAPS5UM-10 ?

SAPS5UM-10 se compose de microsphères de 5 µm avec de la streptavidine immobilisée à la surface des particules.

Les microsphères enrobées de streptavidine constituent une phase solide pratique pour capturer les molécules biotinylées. Les chercheurs peuvent attacher un anticorps, une protéine, un peptide, une sonde d'acide nucléique, un aptamère, un récepteur ou un autre ligand biotinylés sélectionnés sans effectuer d'activation covalente directe de la surface de la microsphère.

Après l'immobilisation du ligand, les microsphères préparées peuvent être utilisées pour capturer les molécules cibles d'un échantillon. La liaison à la cible peut ensuite être détectée avec un anticorps fluorescent, une sonde fluorescente, un réactif secondaire ou un autre rapporteur compatible et analysée par cytométrie en flux.

Les ligands biotinylés potentiels comprennent :

• Anticorps monoclonaux et polyclonaux

• Anticorps recombinants

• Fragments d'anticorps

• Antigènes

• Protéines recombinantes

• Peptides

• Enzymes

• Récepteurs

• Lectines

• Sondes oligonucléotidiques

• DNA sondes

• RNA sondes

• Produits PCR

• Aptamères

• Petites molécules biotinylées

Le diamètre des particules de 5 µm fournit une population de taille micronique qui peut généralement être distinguée du fond de petites particules sur de nombreux cytomètres en flux conventionnels.

Par rapport aux particules plus petites, les microsphères de 5 µm peuvent offrir une détection de diffusion plus facile, un déclenchement plus pratique et une récupération plus pratique des particules pendant le lavage. Cependant, le nombre de particules par unité de masse, le comportement de sédimentation, la capacité de liaison et la cinétique du test diffèrent de ceux des microsphères plus petites et doivent être évalués pour l’application prévue.

SAPS5UM-10 est fourni comme matière première de recherche. Il ne s’agit pas automatiquement d’un réactif de diagnostic fini, d’une perle d’étalonnage certifiée, d’un étalon de comptage absolu, d’une perle de codage fluorescente ou d’un produit de séparation magnétique.

Spécifications techniques SAPS5UM-10

Les paramètres suivants doivent être confirmés à l'aide des spécifications du produit final ou du certificat d'analyse spécifique au lot :

• Matériau particulaire

• Diamètre moyen des particules mesuré

• Plage de granulométrie

• Distribution granulométrique

• Coefficient de variation granulométrique

• Niveau d'enrobage de streptavidine

• Capacité de liaison à la biotine

• Concentration en nombre de particules

• Tampon de suspension

• Tampon pH

• Stabilisant ou tensioactif

• Conservateur

• Taille du paquet

• Durée de conservation

• Conditions de stockage

La capacité de liaison doit être indiquée avec la sonde de test, la méthode de test, la base de calcul et le résultat spécifique au lot.

La concentration de 1 % de solides ne peut à elle seule déterminer la concentration en nombre de particules ou la capacité de liaison à la biotine disponible.

Comment fonctionne la liaison streptavidine-biotine

La streptavidine est une protéine liant la biotine. Lorsqu'un ligand biotinylé est mélangé avec SAPS5UM-10, le groupe biotine se lie aux sites streptavidine disponibles à la surface des microsphères.

La structure de base peut être représentée comme suit :

Surface des microsphères – Streptavidine – Biotine – Ligand de capture

Pour un immunoessai sandwich, la structure peut être :

Microsphère – Streptavidine – Anticorps de capture biotinylé – Antigène cible – Anticorps de détection fluorescent

La fluorescence associée à chaque microsphère peut ensuite être mesurée par cytométrie en flux.

Avantages de l’immobilisation streptavidine-biotine

• Aucune activation EDC/ NHS n'est normalement requise pour le chargement du ligand.

• Une plateforme de microsphères peut être utilisée avec différents ligands biotinylés.

• Des anticorps, des protéines, des peptides et des sondes d'acide nucléique peuvent être immobilisés.

• Le chargement du ligand peut être effectué dans des conditions aqueuses douces.

• Les molécules de capture peuvent être modifiées sans reconcevoir la particule de base.

• Le système prend en charge le développement de tests modulaires.

• La plateforme peut être utilisée dans le cadre de recherches mono-cibles et multiplexes.

• Les ligands immobilisés peuvent être combinés avec différents rapporteurs fluorescents.

La performance finale dépend :

• Activité streptavidine

• Densité d'enrobage de streptavidine

• Niveau de biotinylation

• Accessibilité à la biotine

• Taille moléculaire du ligand

• Longueur de l'entretoise

• Encombrement de la surface

• Composition du tampon

• Conditions d'incubation

• Concentration cible

• Exemple de matrice

La biotine libre dans la solution de ligand, l'échantillon, le tampon ou la formulation de blocage peut occuper les sites de liaison à la streptavidine disponibles et réduire l'immobilisation du ligand.

Pourquoi choisir des microsphères de streptavidine de 5 µm ?

Détection claire sur les cytomètres en flux conventionnels

Le diamètre des particules de 5 µm peut fournir une population distincte de diffusion directe et latérale sur de nombreux cytomètres en flux conventionnels.

Cela peut faciliter :

• Localiser la population de microsphères

• Établir une porte de dispersion stable

• Séparez les microsphères des petits débris

• Confirmer la récupération des particules

• Identifier les agrégats possibles

• Évaluer les doublets

• Mesurer la fluorescence du reporter

• Créez des modèles d'acquisition reproductibles

La détection réelle dépend du matériau des particules, de l'indice de réfraction, de l'optique du cytomètre en flux, des paramètres du détecteur, de la sélection du déclencheur et du tampon d'échantillon.

Taille pratique pour les analyses à base de billes

La gamme de tailles de 5 µm convient à de nombreux flux de travail de recherche en cytométrie en flux basée sur les particules.

Les particules fournissent une surface physique pour l'immobilisation du ligand de capture tout en restant suffisamment petites pour les réactions en suspension et l'analyse de particules individuelles.

Récupération plus facile des particules

Les particules de taille micronique peuvent être plus faciles à récupérer par une méthode validée de centrifugation ou basée sur une membrane que les particules plus petites.

La récupération des particules dépend encore :

• Densité des particules

• Matériau particulaire

• Force centrifuge

• Temps de centrifugation

• Volume de traitement

• Géométrie des tubes

• Surface du tube

• Viscosité du tampon

• Concentration de tensioactif

• Nombre d'étapes de lavage

La méthode de séparation doit être vérifiée expérimentalement.

Convient aux études sur la taille des cellules

Une microsphère de 5 µm peut être évaluée comme une particule synthétique de la taille d’un micron dans le cadre de l’analyse cellulaire et de la recherche sur les interactions entre particules.

Cependant, les microsphères synthétiques ne reproduisent pas toutes les propriétés physiques ou biologiques des cellules, notamment la déformabilité, la densité, la composition membranaire, la mobilité des récepteurs ou l'activité biologique.

Sélection flexible du ligand

La même particule de base SAPS5UM-10 peut être combinée avec différentes molécules de capture biotinylées, permettant de développer plusieurs tests à partir d'une seule plateforme de particules.

Soutient l’intensification de la recherche à la production

Le produit peut prendre en charge :

• Tests de faisabilité initiaux

• Optimisation des tests

• Production en lots pilotes

• Tests de stabilité

• Évaluation des emballages

• Comparaison lot à lot

• OEM développement

• Approvisionnement en vrac à long terme

Principales caractéristiques et avantages

Diamètre nominal des particules de 5 µm

Les particules de taille micrométrique conviennent au déclenchement par cytométrie en flux, aux études de liaison basées sur les particules, au développement de tests immunologiques et à la recherche sur la capture par affinité.

Surface fonctionnelle de la streptavidine

La surface capture les anticorps biotinylés, les protéines, les peptides, les oligonucléotides, DNA , RNA , les aptamères et d'autres molécules contenant de la biotine.

Suspension à 1 % de solides

SAPS5UM-10 est fourni à 1 % de solides et peut être dilué en fonction du nombre de particules requis, du volume de test, de la capacité de liaison et du taux d'événements de cytométrie en flux.

Immobilisation simple du ligand

Les ligands biotinylés peuvent être chargés sans activation directe du carbodiimide par l'utilisateur final.

Plateforme d'analyse modulaire

Les chercheurs peuvent utiliser la même plateforme de particules avec différentes molécules de capture biotinylées.

Convient à la détection de reporters fluorescents

Les particules peuvent être combinées avec des anticorps fluorescents, des sondes, des réactifs secondaires ou d'autres rapporteurs pour l'analyse par cytométrie en flux.

Convient à la recherche Singleplex et Multiplex

SAPS5UM-10 peut être évalué comme une population de particules dans un système de cytométrie en flux multiplex.

Capacité de fabrication en vrac

SHBC prend en charge les échantillons, les lots pilotes, les commandes répétées, la production personnalisée et l'approvisionnement en gros.

Options de développement personnalisées

Le diamètre des particules, la concentration, la charge en streptavidine, la capacité de liaison, le tampon, le conservateur, le codage de fluorescence, l'emballage et les spécifications de libération peuvent être discutés pour les projets qualifiés.

Applications dans la recherche sur la cytométrie en flux

Immunoessais sandwich à base de billes

SAPS5UM-10 peut être utilisé comme phase solide dans un test immunologique sandwich par cytométrie en flux.

Un flux de travail typique comprend :

1. Immobilisation d'un anticorps de capture biotinylé.

2. Bloquer la surface restante des particules.

3. Incuber les particules avec l'échantillon.

4. Capturer l'analyte cible.

5. Ajout d'un anticorps de détection fluorescent.

6. Suppression des réactifs non liés.

7. Mesure de la fluorescence associée aux microsphères par cytométrie en flux.

Les cibles potentielles de recherche comprennent :

• Cytokines

• Hormones

• Facteurs de croissance

• Anticorps

• Antigènes

• Enzymes

• Biomarqueurs

• Protéines associées aux agents pathogènes

• Enviro nm analytes entaux

• Objectifs de sécurité alimentaire

• Composés de recherche

Développement de tests compétitifs

SAPS5UM-10 peut également être évalué dans des formats de liaison compétitifs.

Des tests compétitifs peuvent être envisagés pour :

• Petites molécules

• Haptènes

• Peptides

• Drogues

• Toxines

• Hormones

• Cibles avec des sites de liaison limités

La relation entre la concentration cible et le signal de fluorescence dépend de la conception finale du test.

Immobilisation d'anticorps biotinylés

Des anticorps biotinylés peuvent être attachés à SAPS5UM-10 pour :

• Détection d'antigène

• Dépistage d'anticorps

• Dépistage des hybridomes

• Recherche de biomarqueurs

• Comparaison capture-anticorps

• Etudes de faisabilité des analyses

• Évaluation de la spécificité

• Tests de réactivité croisée

• Comparaison d'affinité

Recherche sur les interactions entre protéines et peptides

Les protéines et peptides biotinylés peuvent être immobilisés pour :

• Études d'interaction anticorps-antigène

• Liaison protéine-protéine

• Recherche récepteur-ligand

• Cartographie des épitopes

• Études d'interactions enzymatiques

• Dépistage des inhibiteurs

• Évaluation des candidats-médicaments

• Comparaison d'affinité de liaison

Capture d'acide nucléique

Les oligonucléotides biotinylés, DNA , RNA , les produits de PCR et les aptamères peuvent être attachés à SAPS5UM-10.

Les applications potentielles en matière de recherche comprennent :

• Capture spécifique à la séquence

• Développement de tests d'hybridation

• Détection des produits PCR

• Recherche sur le génotypage

• Recherche sur la détection des mutations

• Tests basés sur l'aptamère

• DNA –études d'interactions protéiques

• RNA -études contraignantes

• Développement d'essais moléculaires

Recherche sur la liaison cellulaire

Lorsqu'elles sont recouvertes d'un anticorps, d'un récepteur, d'un ligand ou d'une lectine biotinylés appropriés, les particules peuvent être évaluées pour leur liaison aux cellules ou aux cibles de la surface cellulaire.

Les paramètres importants incluent :

• Densité du ligand de capture

• Rapport microsphère/cellule

• Concentration cellulaire

• Température d'incubation

• Temps d'incubation

• Méthode de mélange

• Conditions de lavage

• Viabilité cellulaire

• Attachement de particules non spécifique

Cytométrie en flux multiplex

Différentes populations de microsphères peuvent potentiellement être distinguées en utilisant :

• Diamètre des particules

• Couleur de fluorescence interne

• Intensité de fluorescence interne

• Couleur visible des particules

• Capturer le ligand

• Fluorescence du journaliste

Pour la recherche multiplex, chaque population de particules doit rester identifiable après le chargement du ligand, le blocage, l’incubation de l’échantillon, la coloration du rapporteur, le lavage, le stockage et l’acquisition par cytométrie en flux.

Capture et criblage par affinité

SAPS5UM-10 peut également être évalué dans :

• Tests de liaison par affinité

• Criblage de ligands

• Dépistage d'anticorps

• Recherche à haut débit

• Biocapteurs à base de particules

• Dosages microfluidiques

• Etudes d'enrichissement de biomolécules

• Analyses de particules basées sur l'imagerie

Biomolécules biotinylées compatibles

Anticorps biotinylés

Les formats compatibles peuvent inclure :

• IgG complète

• IgM

• Fragments fabuleux

• Fragments F(ab′)₂

• Anticorps recombinants

• Fragments variables à chaîne unique

• Anticorps à domaine unique

• Autres formats d'anticorps modifiés

L'activité des anticorps après immobilisation dépend de la méthode de biotinylation, du nombre de groupes de biotine, de l'emplacement de la biotine, de la conception des espaceurs et de la stabilité des protéines.

Protéines biotinylées

Les exemples potentiels incluent :

• Antigènes

• Protéines recombinantes

• Enzymes

• Cytokines

• Facteurs de croissance

• Récepteurs

• Lectines

• Protéines de fusion

• Protéines de liaison

Peptides biotinylés

Les utilisations potentielles comprennent :

• Cartographie des épitopes

• Dépistage d'anticorps

• Études de liaison aux récepteurs

• Recherche enzymatique

• Tests de dépistage de drogues

• Études d'interactions protéiques

Un espaceur approprié entre le peptide et la biotine peut améliorer l'accessibilité.

Acides nucléiques biotinylés

Les formats compatibles peuvent inclure :

• Simple brin DNA

• Double brin DNA

• RNA

• Sondes oligonucléotidiques

• amplicons PCR

• Aptamères

• Sondes d'acide nucléique modifiées

• Capturer des séquences

Petites molécules biotinylées

De petits composés biotinylés peuvent être attachés lorsque leur groupe biotine reste accessible à la surface de la streptavidine.

La longueur de l’espaceur et l’orientation moléculaire doivent être prises en compte lors du développement du test.

Protocole de chargement de ligand biotinylé recommandé

La procédure suivante est un point de départ général. Les conditions finales doivent être optimisées pour la biomolécule et l’application réelles.

1. Remettre en suspension SAPS5UM-10

Laisser la suspension atteindre la température de manipulation recommandée.

Mélanger par inversion douce, rotation ou vortex contrôlé jusqu'à homogénéité.

Étant donné que des particules de 5 µm peuvent se déposer pendant le stockage, mélangez la suspension avant chaque étape d'échantillonnage.

Évitez la formation de mousse excessive.

2. Calculez la quantité de microsphères requise

Déterminez le montant requis en fonction :

• Nombre de tests

• Quantité de microsphères par test

• Nombre d'événements de cytométrie en flux requis

• Concentration cible attendue

• Volume d'analyse

• Capacité de liaison spécifique au lot

• Nombre d'étapes de lavage

• Perte de traitement attendue

N'estimez pas la charge de ligand à partir de la seule teneur en solides.

3. Transférez les microsphères

Transférez la quantité requise dans un tube ou un récipient de traitement propre et peu contraignant.

Utilisez des pointes de pipettes propres et évitez de contaminer le récipient d’origine.

4. Lavez les particules

Laver les microsphères avec un tampon compatible avec la streptavidine et le ligand biotinylé sélectionné.

Évitez les tampons contenant de la biotine libre pendant le chargement du ligand.

Les méthodes de récupération potentielles incluent :

• Centrifugation

• Filtration membranaire

• Filtration à flux tangentiel

• Autres méthodes validées de séparation solide-liquide

Des conditions appropriées doivent être établies expérimentalement.

5. préparer le ligand biotinylé

Diluer l’anticorps, la protéine, le peptide ou l’acide nucléique biotinylé dans le tampon de liaison sélectionné.

Revoir:

• Concentration de ligands

• Niveau de biotinylation

• Pureté moléculaire

• Niveau global

• Contenu gratuit en biotine

• Additifs tampons

• Stabilité des protéines

• Stabilité des acides nucléiques

6. Ajouter le ligand

Combiner les microsphères lavées avec le ligand biotinylé.

Maintenir un mélange doux afin que les particules restent uniformément en suspension.

Évitez les conditions de mélange qui provoquent une mousse excessive, une agrégation de particules ou une dénaturation des biomolécules.

7. Optimiser le chargement du ligand

Évaluer:

• Concentration de microsphères

• Concentration de ligands

• Rapport ligand/particule

• Temps d'incubation

• Température d'incubation

• Tampon pH

• Concentration en sel

• Vitesse de mélange

• Volume de réaction

La charge maximale de ligand ne fournit pas toujours les meilleures performances de test.

Une charge superficielle excessive peut augmenter l’encombrement stérique et réduire l’accessibilité de la cible.

8. Supprimer le ligand non lié

Séparez et lavez les particules pour éliminer les molécules biotinylées non liées.

Un lavage insuffisant peut augmenter le bruit de fond, tandis qu'un lavage excessif peut réduire la récupération des microsphères.

9. Bloquez les microsphères

Incuber les particules chargées de ligand avec un réactif de blocage compatible avec l’application.

Les bloqueurs potentiels incluent :

• Albumine sérique bovine

• Caséine

• Gélatine de poisson

• Immunoglobuline non immunitaire

• Polymères bloquants synthétiques

• Tampons commerciaux bloquant les microsphères

Les performances de blocage doivent être évaluées à l’aide d’échantillons positifs et négatifs.

10. Remettre en suspension les microsphères préparées

Remettre en suspension les particules enrobées et bloquées dans un tampon de test ou de stockage approprié.

Évaluer:

• Dispersion des particules

• Rétention de ligand

• Activité de liaison

• Liaison non spécifique

• Récupération de particules

• Stabilité à court terme

• Stabilité à long terme

• Stabilité microbienne

Flux de travail de test de billes de cytométrie en flux

1. Préparer les microsphères de capture

Chargez SAPS5UM-10 avec la molécule de capture biotinylée sélectionnée.

Lavez et bloquez les particules avant de tester des échantillons.

2. Préparer les contrôles

Les contrôles recommandés peuvent inclure :

• Vierge de tampon d'acquisition

• Microsphères de streptavidine sans ligand de capture

• Microsphères chargées de ligand sans échantillon

• Échantillon négatif

• Échantillon positif

• Contrôle réservé aux journalistes

• Contrôle isotypique

• Contrôle du ligand biotinylé non pertinent

• Contrôles monochromes pour des expériences multicolores

3. Ajoutez l'échantillon

Combinez les microsphères préparées avec l’échantillon de test.

Optimiser:

• Volume d'échantillon

• Dilution de l'échantillon

• Concentration de microsphères

• Plage de concentration cible

• Temps d'incubation

• Température d'incubation

• Méthode de mélange

• Exemple de matrice

4. Lavez les microsphères

Supprimez les composants de l’échantillon non liés tout en maintenant une récupération acceptable des microsphères.

Enregistrez le nombre, le volume et la composition des étapes de lavage pendant le développement de la méthode.

5. Ajoutez le journaliste fluorescent

Ajoutez un anticorps de détection fluorescent, un anticorps secondaire, une sonde ou un autre rapporteur.

Le fluorophore sélectionné doit être compatible avec la configuration du laser et du détecteur du cytomètre en flux prévu.

6. Incuber et laver

Optimisez la concentration du journaliste et le temps d’incubation.

Supprimez le journaliste non lié pour réduire la fluorescence de fond.

7. Remettre en suspension pour acquisition

Remettez en suspension les particules finales dans un tampon d’acquisition propre et à faible bruit de fond.

Mélanger immédiatement avant le test de cytométrie en flux.

8. Acquérir des données

Recueillez suffisamment d’événements de microsphères pour prendre en charge l’analyse prévue.

Les résultats analytiques possibles comprennent :

• Intensité médiane de fluorescence

• Intensité moyenne de fluorescence

• Pourcentage de microsphères positives

• Rapport signal/arrière-plan

• Courbe dose-réponse

• Précision du test

• Récupération

• Spécificité

• Réactivité croisée

• Recherche sur les limites de détection

9. Analyser les résultats

Établissez les régions positives et négatives à l’aide de contrôles appropriés.

Ne définissez pas le seuil positif à partir de l’échantillon testé uniquement.

Détection et déclenchement de microsphères de 5 µm

Gating à diffusion directe et à diffusion latérale

La population de microsphères de 5 µm peut être évaluée à l’aide de tracés de diffusion directe et latérale sur de nombreux cytomètres en flux conventionnels.

Une étape préliminaire FSC contre SSC peut aider à exclure :

• Bruit électronique

• Petits débris

• Particules tampons

• Gros agrégats

• Événements irréguliers

La position de diffusion mesurée dépend de la matrice de particules, de l'indice de réfraction, de l'optique de l'instrument, des paramètres du détecteur et de la conception de la Flow Cell.

Détection de fluorescence du journaliste

Lorsque SAPS5UM-10 ne contient pas de colorant fluorescent interne, la population de particules peut toujours être analysée par diffusion et fluorescence d'un rapporteur lié.

Les parcelles utiles peuvent inclure :

• FSC contre SSC

• FSC versus fluorescence rapporteur

• SSC versus fluorescence rapporteur

• Histogramme de fluorescence Reporter

• Zone de dispersion par rapport à la hauteur

• Zone de dispersion par rapport à la largeur

Analyse singulet et globale

Les agrégats peuvent produire une diffusion, une fluorescence ou une largeur de signal plus élevée que les particules individuelles.

Les paramètres de surface, de hauteur et de largeur d’impulsion peuvent aider à distinguer les particules simples des doublets et des agrégats plus grands.

Sélection du déclencheur

Les déclencheurs potentiels d’acquisition comprennent :

• Diffusion vers l'avant

• Dispersion latérale

• Fluorescence du journaliste

• Fluorescence des particules internes lorsque disponible

• Stratégies de gate combinées

Concentration de particules

Testez une série de dilutions lors du développement initial de la méthode.

Des microsphères excessivement concentrées peuvent produire des événements coïncidents dans lesquels plusieurs particules sont mesurées comme un seul événement.

Les indications possibles incluent :

• Décalages de signal dépendants de la concentration

• Fluorescence apparente accrue

• Dispersion accrue

• Larges distributions

• Populations doublets inattendues

• Taux d'événements instables

Enregistrements de méthodes recommandées

Enregistrer:

• Modèle de cytomètre en flux

• Configuration des lasers

• Filtres de détecteur

• Tension ou gain du détecteur

• Paramètres de dispersion

• Canal de déclenchement

• Seuil de déclenchement

• Débit d'échantillon

• Dilution des microsphères

• Composition du tampon

• Temps d'acquisition

• Nombre d'événements collectés

• Portes d'analyse

• Numéro de lot du produit

Contrôle de blocage et de liaison non spécifique

L'adsorption non spécifique peut augmenter la fluorescence des échantillons négatifs et réduire la sensibilité du test.

Les causes potentielles comprennent :

• Blocage insuffisant

• Réactif bloquant incompatible

• Excès de ligand de capture

• Reporteur fluorescent excédentaire

• Lavage inadéquat

• Anticorps agrégés

• Composants d'échantillon hydrophobes

• Concentration élevée en protéines de l'échantillon

• Agrégation de microsphères

• Interférence matricielle

Filtrer plusieurs réactifs bloquants

Comparez plusieurs formulations bloquantes.

Le bloqueur préféré doit réduire la fluorescence de l’échantillon négatif tout en conservant le signal de l’échantillon positif.

Optimiser le chargement des ligands

Plus de ligand de capture n'est pas toujours meilleur.

Une charge excessive de ligand peut :

• Augmenter la consommation de réactifs

• Provoque un encombrement stérique

• Réduire l’accessibilité de la cible

• Augmenter les interactions non spécifiques

• Élargir la variabilité des tests

Titrer le journaliste

Un excès de reporter fluorescent peut augmenter le bruit de fond.

Testez plusieurs concentrations de rapporteur en utilisant des contrôles positifs et négatifs.

Optimiser le lavage

Évaluer:

• Nombre d'étapes de lavage

• Composition du tampon de lavage

• Volume de lavage

• Méthode de mélange

• Méthode de séparation

• Volume surnageant résiduel

• Récupération de microsphères

Évaluez soigneusement les détergents

Une petite quantité de détergent compatible peut améliorer la dispersion et réduire l'adsorption non spécifique.

Un excès de détergent peut interférer avec les interactions des biomolécules ou la liaison du rapporteur.

Évitez la biotine gratuite

La biotine libre présente dans les tampons, les suppléments, les échantillons ou les réactifs bloquants peut occuper les sites de liaison à la streptavidine et réduire la charge de ligand.

Comparaison des microsphères de streptavidine de 5 µm, 3 µm et 1 µm

Choisissez SAPS5UM-10 Quand :

• Une forte visibilité dispersée est importante.

• Un cytomètre en flux conventionnel sera utilisé.

• Un déclenchement clair des particules est requis.

• Une séparation plus facile des petits débris est préférable.

• Une manipulation de billes de la taille d’un micron est souhaitée.

• La récupération centrifuge sera utilisée.

• Une plateforme de particules de taille cellulaire est utile.

• Des tests de flux de routine basés sur des billes sont en cours de développement.

Choisissez SAPS3UM-10 Quand :

• Une particule de taille micrométrique plus petite est préférée.

• Un équilibre entre le nombre de particules et la détection de diffusion est nécessaire.

• Une sédimentation inférieure à 5 µm est souhaitable.

• La détection systématique par cytométrie en flux est toujours nécessaire.

Choisissez SAPS1UM-10 Quand :

• Un nombre de particules plus élevé par unité de masse est préféré.

• Des volumes de réaction plus petits sont utilisés.

• Un comportement de tassement plus faible est important.

• L'instrument peut détecter de manière fiable des particules de 1 µm.

• Une plus grande surface collective par unité de masse peut être bénéfique.

La sélection finale de la taille des particules doit être basée sur les performances du test plutôt que sur le seul diamètre.

Contrôle qualité et cohérence des lots

Les paramètres potentiels de contrôle qualité pour SAPS5UM-10 incluent :

• Diamètre moyen des particules

• Distribution granulométrique

• Coefficient de variation granulométrique

• Apparence des suspensions

• Teneur en solides

• Consistance de l'enrobage de streptavidine

• Capacité de liaison à la biotine

• Dispersion des particules

• Niveau global

• Récupération de particules

• Fluorescence de fond

• Liaison non spécifique

• Contrôle microbien

• Intégrité de l'emballage

• Stabilité de stockage

• Cohérence d'un lot à l'autre

Tests de taille des particules

La caractérisation granulométrique peut rapporter :

• Diamètre moyen

• Diamètre médian

• Gamme de tailles

• Répartition des tailles

• Coefficient de variation

• Microscopie ou caractérisation instrumentale

La méthode de mesure doit être indiquée lors de la communication des résultats.

Capacité de liaison à la biotine

La capacité de liaison doit être déterminée avec une sonde biotinylée définie.

Le résultat mesuré dépend :

• Type de sonde

• Taille moléculaire de la sonde

• Nombre de groupes de biotine

• Pureté de la sonde

• Conditions d'incubation

• Composition du tampon

• Méthode de détection

• Base de calcul

Les valeurs obtenues à l'aide de différentes sondes ou méthodes de test peuvent ne pas être directement comparables.

Contrôle qualité de la cytométrie en flux

Une procédure de CQ par cytométrie en flux peut évaluer :

• Position principale de la population de particules

• Pourcentage de microsphères fermées

• Fluorescence du reporter après chargement d'une sonde standard

• Largeur de distribution de fluorescence

• Séparation d'arrière-plan

• Répétabilité

• Population globale

Utilisez des paramètres d’instrument cohérents lorsque vous comparez les lots de production.

Documentation spécifique au lot

La documentation disponible peut inclure :

• Certificat d'analyse

• Spécification du produit

• Résultats granulométriques

• Résultats sur la teneur en solides

• Résultats de capacité de liaison

• Fiche de données de sécurité

• Instructions de manipulation

• Recommandations de stockage

• Numéro de lot

• Date de fabrication

Les tests requis et les critères d’acceptation doivent être convenus avant la fabrication en vrac.

Fabrication en vrac et personnalisation

Shanghai SanYu Biotechnology Co., Ltd. fournit des microsphères de streptavidine SHBC pour la recherche en laboratoire, le développement pilote, la production répétée et l'achat en gros.

Évaluation des échantillons de recherche

Les échantillons peuvent être évalués pour :

• Détection par cytométrie en flux

• Dispersion des particules

• Activité streptavidine

• Chargement de ligand biotinylé

• Liaison non spécifique

• Récupération de particules

• Faisabilité du test

• Compatibilité des instruments

Développement à l’échelle pilote

Les lots pilotes peuvent prendre en charge :

• Optimisation des tests

• Vérification de la capacité de liaison

• Etudes de stabilité

• Sélection du tampon

• Évaluation des emballages

• Développement du contrôle qualité

• Vérification du client

• Transfert de processus

Production en vrac

La fabrication en vrac peut être organisée une fois que les exigences techniques et les spécifications de sortie ont été confirmées.

Veuillez fournir :

• Quantité requise

• Demande annuelle attendue

• Taille de paquet préférée

• Application prévue

• Diamètre de particule requis

• Teneur en solides requise

• Capacité de liaison requise

• Type de ligand biotinylé

• Exigences en matière de tampon

• Restrictions relatives aux conservateurs

• Exigences de contrôle de qualité

• Exigences en matière de documentation

• Calendrier de livraison

• Lieu de livraison

Diamètre de particule personnalisé

D’autres tailles de particules peuvent être discutées en fonction de l’application et de la faisabilité technique.

Chargement personnalisé de streptavidine

Les niveaux d'enrobage de streptavidine ou les objectifs de capacité de liaison spécifiques au projet peuvent être évalués.

Codage de fluorescence personnalisé

Les microsphères de streptavidine fluorescentes ou codées en interne peuvent être discutées pour des projets de cytométrie en flux multiplex.

Les options potentielles peuvent inclure :

• Longueurs d'onde d'excitation alternatives

• Longueurs d'onde d'émission alternatives

• Différentes couleurs de fluorescence

• Plusieurs niveaux d'intensité de fluorescence

• Codes de particules spécifiques au client

Tampon et concentration personnalisés

Des concentrations alternatives de solides, des formulations tampons, des systèmes de conservation et des formats d'emballage peuvent être évalués.

OEM et fourniture de marques privées

Les formats de coopération peuvent inclure :

• OEM emballage

• Étiquettes spécifiques au client

• Approvisionnement en marque privée

• Numéros de catalogue spécifiques au client

• Approvisionnement en matières premières en vrac

• Personnalisation des documents techniques

Recommandations de manipulation et de stockage

Suivez l'étiquette du produit final, la fiche technique et le certificat d'analyse spécifique au lot.

Les recommandations générales comprennent :

• Conserver dans les conditions réfrigérées spécifiées.

• Ne pas congeler à moins que la stabilité gel-dégel ait été validée.

• Gardez le récipient bien fermé.

• Conservez le flacon à la verticale.

• Bien mélanger avant de prélever.

• Utilisez des pointes de pipettes propres et des tubes à faible liaison.

• Eviter la contamination de la suspension d'origine.

• Ne laissez pas sécher les microsphères.

• Évitez les changements de température inutiles et répétés.

• Ne remettez pas le matériau dilué dans le récipient d'origine.

• Enregistrez le numéro de lot du produit et la date d’ouverture.

Remise en suspension

Parce que des particules de 5 µm peuvent se déposer pendant le stockage :

1. Laisser le flacon atteindre la température de manipulation recommandée.

2. Retournez ou faites pivoter doucement le flacon.

3. Appliquer un vortex contrôlé si nécessaire.

4. Confirmez que la suspension est homogène.

5. Inspectez les agrégats irréversibles.

Évitez le gel

Le gel peut provoquer :

• Agrégation de particules

• Activité réduite de la streptavidine

• Modifications de la stabilité de la suspension

• Récupération réduite des particules

• Augmentation du fond de test

Évitez de sécher

Ne laissez pas sécher la pastille de microsphères pendant le lavage.

Le séchage peut provoquer une agrégation irréversible et une performance fonctionnelle réduite.

Protéger contre la biotine libre

Évitez la biotine libre pendant l’immobilisation du ligand biotinylé.

Évaluer la stabilité du réactif préparé

Les microsphères chargées de ligand et bloquées peuvent avoir une stabilité différente de celle de la suspension SAPS5UM-10 d'origine.

Évaluez le réactif préparé dans les conditions de stockage, de transport et de fonctionnement prévues.

Foire aux questions

Qu'est-ce que SAPS5UM-10 ?

SAPS5UM-10 est une suspension de microsphères enrobées de streptavidine de 5 µm fournie à 1 % de solides pour capturer des biomolécules biotinylées dans la recherche en cytométrie en flux et en analyses à base de billes.

Quelle est la marque SHBC ?

SHBC est la marque de microsphères et de matériaux biotechnologiques de Shanghai SanYu Biotechnology Co., Ltd.

Quel est le diamètre nominal des particules ?

Le diamètre nominal des particules est de 5 µm.

Le diamètre réellement mesuré et la distribution granulométrique doivent être confirmés à l'aide de la documentation spécifique au lot.

Quelle est la teneur en solides ?

SAPS5UM-10 est fourni à 1 % de solides.

Les microsphères SAPS5UM-10 sont-elles magnétiques ?

Le produit ne doit pas être considéré comme magnétique à moins que les propriétés magnétiques ne soient spécifiquement indiquées dans les spécifications techniques.

Pour la séparation magnétique, sélectionnez un produit spécifiquement décrit sous le nom de billes magnétiques de streptavidine.

Les microsphères sont-elles fluorescentes ?

Le produit standard ne doit pas être supposé contenir un colorant fluorescent interne à moins que la fluorescence ne soit spécifiquement répertoriée dans les spécifications du produit.

La détection par cytométrie en flux peut utiliser la diffusion ou la fluorescence d’un reporter lié.

Quelles molécules peuvent se lier à SAPS5UM-10 ?

La surface de la streptavidine peut capturer des anticorps biotinylés, des antigènes, des protéines, des peptides, des oligonucléotides, DNA , RNA , des aptamères et d'autres molécules contenant de la biotine.

Un anticorps odifié u nm peut-il se lier directement ?

Un anticorps u nm odifié ne se fixera pas spécifiquement via l'interaction streptavidine-biotine à moins qu'il ne soit biotinylé ou lié via un autre réactif compatible.

L'activation EDC/ NHS est-elle requise ?

L'activation EDC/ NHS n'est normalement pas nécessaire lors du chargement d'une molécule biotinylée sur des microsphères recouvertes de streptavidine.

Quelle est la capacité de liaison à la biotine ?

La capacité de liaison doit être confirmée à l’aide des spécifications du produit ou du certificat d’analyse spécifique au lot.

Il ne doit pas être calculé uniquement à partir de la teneur en matières solides.

SAPS5UM-10 peut-il être utilisé en cytométrie en flux ?

Oui. Le diamètre des particules de 5 µm convient à l’évaluation dans les analyses de billes de cytométrie en flux et à la recherche basée sur les particules.

Un cytomètre en flux conventionnel peut-il détecter des microsphères de 5 µm ?

De nombreux cytomètres en flux conventionnels peuvent détecter des microsphères de 5 µm en utilisant des paramètres de diffusion appropriés.

Les performances réelles dépendent de l’optique de l’instrument, des lasers, des détecteurs, des paramètres de déclenchement et du tampon d’échantillon.

Le SAPS5UM-10 peut-il être utilisé pour les immunoessais sandwich ?

Oui. Un anticorps de capture biotinylé peut être immobilisé sur la particule, suivi d'une capture cible et d'une détection avec un anticorps rapporteur fluorescent.

Peut-il être utilisé pour la détection des acides nucléiques ?

Oui. Les oligonucléotides biotinylés, DNA , RNA , les produits de PCR et les aptamères peuvent être évalués pour l'immobilisation et la capture de cibles.

SAPS5UM-10 peut-il être utilisé dans les tests multiplex ?

Oui, à condition que la population SAPS5UM-10 puisse être distinguée des autres populations de microsphères.

Un codage de fluorescence personnalisé peut être nécessaire.

Comment laver les microsphères ?

La méthode de lavage dépend de la composition des particules, de la densité, du tampon, du volume et de la récupération requise.

Les méthodes de centrifugation ou basées sur membrane peuvent être évaluées.

Pourquoi la récupération des microsphères est-elle faible ?

Les causes possibles incluent :

• Force centrifuge insuffisante

• Temps de centrifugation court

• Perte lors de l'élimination du surnageant

• Adhérence à la surface du tube

• Méthode de séparation incompatible

• Agrégation de particules

• Lavage excessif

Comment réduire les liaisons non spécifiques ?

Optimisez le réactif de blocage, la concentration du ligand, la concentration du rapporteur, les conditions de lavage, le niveau de détergent, la dilution de l’échantillon et le temps d’incubation.

Peut-on utiliser des tampons contenant de la biotine libre ?

La biotine libre peut occuper des sites de liaison à la streptavidine et doit généralement être évitée lors du chargement du ligand.

Pourquoi les particules se déposent-elles ?

Les particules de taille micronique peuvent se déposer en raison de leur taille et de leur densité.

Mélangez soigneusement la suspension avant chaque étape d’échantillonnage.

Le SAPS5UM-10 doit-il être dilué avant la cytométrie en flux ?

Oui. Préparer une dilution de travail en fonction du nombre de particules et du taux d'événements requis.

Une série de dilutions est recommandée lors du développement de la méthode.

Les microsphères peuvent-elles être congelées ?

La congélation n’est généralement pas recommandée à moins que la stabilité gel-dégel n’ait été spécifiquement validée.

La concentration peut-elle être personnalisée ?

Des concentrations alternatives de solides peuvent être discutées en fonction des exigences du projet et de la faisabilité de la fabrication.

La capacité de reliure peut-elle être personnalisée ?

Les objectifs de charge ou de capacité de liaison de streptavidine spécifiques au projet peuvent être évalués.

Peut-on produire des microsphères fluorescentes de streptavidine ?

Les microsphères de streptavidine fluorescentes ou codées peuvent être discutées pour des projets qualifiés de cytométrie en flux multiplex.

La production en vrac est-elle disponible ?

Oui. Shanghai SanYu Biotechnology Co., Ltd. prend en charge les échantillons, les lots pilotes, les commandes répétées, les projets OEM et la fabrication en vrac.

Quelles informations sont nécessaires pour un devis ?

Veuillez fournir :

• Numéro de catalogue SAPS5UM-10

• Quantité requise

• Volume d’achat annuel prévu

• Taille de paquet préférée

• Application prévue

• Modèle de cytomètre en flux

• Type de ligand biotinylé

• Capacité de liaison requise

• Quantité de microsphères requise par test

• Restrictions de tampon

• Restrictions relatives aux conservateurs

• Exigences de contrôle de qualité

• Exigences en matière de documentation

• Destination de livraison

Demander un échantillon ou un devis groupé

SHBC Les microsphères de streptavidine SAPS5UM-10 de 5 µm fournissent une plate-forme de particules flexible pour immobiliser les anticorps biotinylés, les protéines, les peptides, les oligonucléotides, les DNA , les RNA , les aptamères et d'autres biomolécules marquées à la biotine.

Le produit convient pour :

• Dosages sur billes par cytométrie en flux

• Tests immunologiques sandwich à base de billes

• Tests de liaison compétitifs

• Immobilisation d'anticorps biotinylés

• Recherche sur les interactions protéiques

• Capture d'acide nucléique

• Tests d'hybridation

• Études de liaison par affinité

• Développement de cytométrie en flux multiplex

• Fabrication de réactifs de recherche

SAPS5UM-10 fournit :

• Diamètre nominal des particules de 5 µm

• Surface fonctionnelle streptavidine

• 1% de suspension solide

• Compatibilité avec les biomolécules biotinylées

• Fourniture d'échantillons et de lots pilotes

• Capacité de fabrication en vrac

• OEM et prise en charge du développement personnalisé

Pour l’évaluation d’échantillons ou l’achat en gros, indiquez l’application prévue, la quantité requise, le ligand biotinylé, la capacité de liaison souhaitée, la configuration du cytomètre en flux, les exigences d’emballage et les spécifications de contrôle qualité.

Nom du produit : Microsphères de streptavidine de 5 µm
Numéro de catalogue : SAPS5UM-10
Marque : SHBC
Fabricant : Shanghai SanYu Biotechnology Co., Ltd.
Diamètre nominal des particules : 5 µm
Modification de surface : de streptavidine :
Teneur en solides 1 %
Application principale : Recherche par cytométrie en flux et test de billes
Capacité d'approvisionnement : Échantillons, lots pilotes et production en vrac
Utilisation prévue : Utilisation pour la recherche uniquement. Pas pour un usage diagnostique ou thérapeutique.