5um ストレプトアビジンマイクロスフェア SA PS 5UM-10 1%

5 µm ストレプトアビジンマイクロスフェアフローサイトメトリー用

SHBC SA PS 5UM-10 ストレプトアビジンマイクロスフェアは、ビオチン化抗体、抗原、タンパク質、ペプチド、オリゴヌクレオチド、 DNA 、 RNA 、アプタマー、およびその他のビオチン標識生体分子を固定化するために開発された 5 つのµm表面官能化ミクロスフェアです。

この製品は固形分 1% の懸濁液として提供され、フローサイトメトリービーズアッセイ、粒子ベースのイムノアッセイ開発、アフィニティー結合研究、核酸捕捉、生体分子相互作用分析、および研究試薬製造用に設計されています。

Shanghai SanYu Biotechnology Co., L td.バイオテクノロジー企業、研究機関、大学、フローサイトメトリー研究所、機器メーカー、試薬開発組織向けに、実験室サンプルの評価、パイロット規模の開発、反復生産、 OEMプロジェクト、および大量供給をサポートします。

製品に関するクイックアンサー

SA PS 5UM-10 は、固形分 1% で供給される 5 µmストレプトアビジンでコーティングされたマイクロスフェア懸濁液です。ストレプトアビジン機能性表面はビオチン化生体分子を捕捉し、フローサイトメトリービーズアッセイ、サンドイッチイムノアッセイ、アフィニティー捕捉システム、核酸ハイブリダイゼーションアッセイ、タンパク質相互作用研究、および多重粒子ベースの研究プラットフォームの開発に使用できます。

製品のハイライト

• 商品名: 5 µm ストレプトアビジンマイクロスフェア

• カタログ番号: SA PS 5UM-10

• ブランド: SHBC

• メーカー: Shanghai SanYu Biotechnology Co.、 L td.

• 公称粒径：5 µm

• 表面修飾: ストレプトアビジン

• 固形分含有量: 1%

• 結合原理: ストレプトアビジン – ビオチンの親和性

• 物理的形状: 水性マイクロスフェア懸濁液

• 主な用途: フローサイトメトリーアッセイ研究

• 供給能力：サンプル、パイロットバッチ、バルク生産

• カスタマイズ: 技術的な実現可能性に応じて利用可能

• 使用目的: 研究用途のみ

SA PS 5UM-10 ストレプトアビジンマイクロスフェアとは何ですか?

SA PS 5UM-10 は、粒子表面にストレプトアビジンが固定化された 5 つのµmミクロスフェアで構成されています。

ストレプトアビジンでコーティングされたマイクロスフェアは、ビオチン化分子を捕捉するための便利な固相を提供します。研究者は、ミクロスフェア表面を直接共有結合的に活性化することなく、選択したビオチン化抗体、タンパク質、ペプチド、核酸プローブ、アプタマー、受容体、またはその他のリガンドを結合させることができます。

リガンドの固定化後、調製したマイクロスフェアを使用してサンプルから標的分子を捕捉できます。その後、蛍光抗体、蛍光プローブ、二次試薬、またはその他の互換性のあるレポーターを使用してターゲットの結合を検出し、フローサイトメトリーで分析できます。

潜在的なビオチン化リガンドには次のものがあります。

• モノクローナル抗体とポリクローナル抗体

• 組換え抗体

• 抗体断片

• 抗原

• 組換えタンパク質

• ペプチド

• 酵素

• 受容体

• Lエクチン

• オリゴヌクレオチドプローブ

• DNAプローブ

• RNAプローブ

• PCR製品

• アプタマー

• ビオチン化された小分子

5 µm粒子直径により、一般に多くの従来のフローサイトメーター上の小さな粒子バックグラウンドと区別できるミクロンサイズの集団が得られます。

より小さい粒子と比較して、5 µmマイクロスフェアは、散乱検出が容易で、ゲート処理がより便利で、洗浄中の粒子回収がより実用的である可能性があります。ただし、単位質量あたりの粒子数、沈降挙動、結合能力、およびアッセイ反応速度は、より小さなマイクロスフェアとは異なるため、意図した用途に合わせて評価する必要があります。

SA PS 5UM-10 は研究用原料として供給されます。それは自動的に完成した診断試薬、認定されたキャリブレーション ビーズ、絶対計数標準、蛍光コーディング ビーズ、または磁気分離製品になるわけではありません。

SA PS 5UM-10 技術仕様

次のパラメータは、最終製品仕様またはロット固有の分析証明書を使用して確認する必要があります。

• 粒子素材

• 測定平均粒径

• 粒子 - サイズ範囲

• 粒子 - サイズ分布

• 粒子 - サイズの変動係数

• ストレプトアビジンコーティングレベル

• ビオチン結合能

• 粒子数の集中

• サスペンションバッファー

• 緩衝液のpH

• 安定剤または界面活性剤

• 防腐剤

• パッケージサイズ

• 貯蔵寿命

• 保管条件

結合能力は、テストプローブ、テスト方法、計算根拠、およびロット固有の結果とともに報告する必要があります。

1% 固形分濃度だけでは、粒子数濃度や利用可能なビオチン結合能を決定することはできません。

ストレプトアビジンとビオチンの結合の仕組み

ストレプトアビジンはビオチン結合タンパク質です。ビオチン化リガンドが SA PS 5UM-10 と混合されると、ビオチン基はミクロスフェア表面上の利用可能なストレプトアビジン部位に結合します。

基本的な構造は次のように表すことができます。

ミクロスフェア表面 - ストレプトアビジン - ビオチン - Lリガンドを捕捉

サンドイッチイムノアッセイの場合、構造は次のようになります。

マイクロスフェア – ストレプトアビジン – ビオチン化捕捉抗体 – 標的抗原 – 蛍光検出抗体

各マイクロスフェアに関連する蛍光は、フローサイトメトリーによって測定できます。

ストレプトアビジン – ビオチン固定化の利点

• 通常、リガンドのローディングにはEDC/NHS活性化は必要ありません。

• 1 つのマイクロスフェア プラットフォームをさまざまなビオチン化リガンドとともに使用できます。

• 抗体、タンパク質、ペプチド、核酸プローブを固定化できます。

• Lリガンドのローディングは、穏やかな水性条件下で実行できます。

• ベース粒子を再設計することなく、捕捉分子を変更できます。

• このシステムはモジュール式アッセイ開発をサポートします。

• このプラットフォームは、単一ターゲットおよび多重研究に使用できます。

• 固定化リガンドは、さまざまな蛍光レポーターと組み合わせることができます。

最終的なパフォーマンスは以下によって決まります。

• ストレプトアビジン活性

• ストレプトアビジンコーティング密度

• ビオチン化レベル

• ビオチンのアクセシビリティ

• Lリガンドの分子サイズ

• スペーサーの長さ

• 表面の混雑

• バッファー組成

• 培養条件

• 目標濃度

• サンプルマトリックス

リガンド溶液、サンプル、緩衝液、またはブロッキング製剤中の遊離ビオチンは、利用可能なストレプトアビジン結合部位を占有し、リガンドの固定化を低下させる可能性があります。

5 µm ストレプトアビジンマイクロスフェアを選択する理由

従来のフローサイトメーターでの明確な検出

5 µm粒子直径は、多くの従来のフローサイトメーターで明確な前方散乱および側方散乱集団を提供できます。

これにより、次のことが簡単になります。

• Lマイクロスフィア集団を特定する

• 安定したスキャッタゲートを確立する

• マイクロスフィアを小さな破片から分離する

• 粒子回収の確認

• 可能な集約を特定する

• ダブレットの評価

• レポーターの蛍光を測定する

• 反復可能な取得テンプレートを構築する

実際の検出は、粒子の材質、屈折率、フローサイトメーターの光学系、検出器の設定、トリガーの選択、およびサンプルバッファーによって異なります。

ビーズベースのアッセイに実用的なサイズ

5 µmサイズ範囲は、多くの粒子ベースのフローサイトメトリー研究ワークフローに適しています。

この粒子は、懸濁液ベースの反応や個々の粒子の分析に十分な大きさを保ちながら、捕捉リガンドを固定化するための物理的表面を提供します。

粒子の回復が容易になる

ミクロンサイズの粒子は、より小さい粒子よりも、検証済みの遠心分離または膜ベースの方法によって回収する方が簡単である可能性があります。

粒子の回復は依然として以下に依存します。

• 粒子密度

• 粒子素材

• 遠心力

• 遠心分離時間

• 処理量

• チューブの形状

• チューブ表面

• 緩衝液の粘度

• 界面活性剤濃度

• 洗浄ステップ数

分離方法は実験的に検証する必要があります。

細胞サイズ範囲の研究に最適

5 µm微小球は、細胞分析や粒子相互作用の研究において合成ミクロンサイズの粒子として評価される可能性があります。

ただし、合成ミクロスフェアは、変形能、密度、膜組成、受容体の移動性、生物学的活性などの細胞の物理的または生物学的特性を完全には再現しません。

柔軟なLリガンドの選択

同じ SA PS 5UM-10 ベース粒子を異なるビオチン化捕捉分子と組み合わせることができるため、1 つの粒子プラットフォームから複数のアッセイを開発できます。

研究から生産へのスケールアップをサポート

この製品は以下をサポートできます。

• 初期の実現可能性テスト

• アッセイの最適化

• パイロットロット生産

• 安定性試験

• 包装評価

• バッチ間の比較

• OEMの開発

• Lの長期大量供給

主な機能と利点

5 µm呼び径粒子

ミクロンサイズの粒子は、フローサイトメトリーゲーティング、粒子ベースの結合研究、イムノアッセイ開発、およびアフィニティーキャプチャ研究に適しています。

ストレプトアビジン機能性表面

表面は、ビオチン化抗体、タンパク質、ペプチド、オリゴヌクレオチド、 DNA 、 RNA 、アプタマー、およびその他のビオチン含有分子を捕捉します。

固形分1%の懸濁液

SA PS 5UM-10 は固形分 1% で供給され、必要な粒子数、アッセイ容量、結合容量、フローサイトメトリー イベント レートに従って希釈できます。

単純なLリガンドの固定化

エンドユーザーが直接カルボジイミドを活性化することなく、ビオチン化リガンドをロードできます。

モジュラーアッセイプラットフォーム

研究者は、異なるビオチン化捕捉分子と同じ粒子プラットフォームを使用できます。

蛍光レポーターの検出に適しています

粒子は、フローサイトメトリー分析用の蛍光抗体、プローブ、二次試薬、またはその他のレポーターと組み合わせることができます。

シングルプレックスおよびマルチプレックス研究に最適

SA PS 5UM-10 は、マルチプレックス フローサイトメトリー システムにおける 1 つの粒子集団として評価できます。

大量生産能力

SHBCは、サンプル、パイロット バッチ、リピート注文、カスタム生産、大量供給をサポートしています。

カスタム開発オプション

粒子直径、濃度、ストレプトアビジン充填量、結合容量、緩衝液、保存料、蛍光コーディング、パッケージング、および放出仕様については、適格なプロジェクトについて議論することができます。

フローサイトメトリー研究におけるアプリケーション

ビーズベースのサンドイッチイムノアッセイ

SA PS 5UM-10 は、フローサイトメトリーサンドイッチイムノアッセイの固相として使用できます。

一般的なワークフローには次のものが含まれます。

1. ビオチン化捕捉抗体の固定化。

2. 残った粒子表面をブロックします。

3. 粒子をサンプルとインキュベートします。

4. ターゲット分析物を捕捉します。

5. 蛍光検出抗体を追加します。

6. 未結合試薬の除去。

7. フローサイトメトリーによるマイクロスフェア関連蛍光の測定。

潜在的な研究対象には次のようなものがあります。

• サイトカイン

• ホルモン

• 成長因子

• 抗体

• 抗原

• 酵素

• バイオマーカー

• 病原体関連タンパク質

• Enviro nmの腸内分析物

• 食品安全目標

• 研究化合物

競合アッセイの開発

SA PS 5UM-10 は競合結合フォーマットでも評価できます。

競合アッセイは次の目的で検討できます。

• 低分子

• ハプテン

• ペプチド

• 薬物

• 毒素

• ホルモン

• 結合部位が限られたターゲット

標的濃度と蛍光シグナルの関係は、最終的なアッセイ設計によって異なります。

ビオチン化抗体の固定化

ビオチン化抗体は、以下の目的で SA PS 5UM-10 に結合できます。

• 抗原の検出

• 抗体スクリーニング

• ハイブリドーマのスクリーニング

• バイオマーカー研究

• 捕捉抗体の比較

• アッセイの実現可能性研究

• 特異性評価

• 交差反応性試験

• アフィニティの比較

タンパク質とペプチドの相互作用研究

ビオチン化タンパク質およびペプチドは、次の目的で固定化できます。

• 抗体抗原相互作用の研究

• タンパク質間の結合

• 受容体リガンドの研究

• エピトープマッピング

• 酵素相互作用の研究

• 阻害剤スクリーニング

• 薬剤候補の評価

• 結合親和性の比較

核酸捕捉

ビオチン化オリゴヌクレオチド、 DNA 、 RNA 、 PCR生成物、およびアプタマーは SA PS 5UM-10 に結合する可能性があります。

潜在的な研究用途には次のようなものがあります。

• シーケンス固有のキャプチャ

• ハイブリダイゼーションアッセイの開発

• PCR製品の検出

• ジェノタイピング研究

• 変異検出研究

• アプタマーベースのアッセイ

• DNA – タンパク質相互作用の研究

• RNA結合研究

• 分子アッセイの開発

細胞結合研究

適切なビオチン化抗体、受容体、リガンド、またはレクチンでコーティングすると、粒子は細胞または細胞表面標的への結合について評価されます。

重要なパラメータには次のものがあります。

• 捕捉リガンド密度

• マイクロスフェア対細胞の比率

• 細胞濃度

• インキュベーション温度

• インキュベーション時間

• 混合方法

• 洗浄条件

• 細胞生存率

• 非特異的な粒子の付着

マルチプレックスフローサイトメトリー

以下を使用して、さまざまなマイクロスフィア集団を区別できる可能性があります。

• 粒子直径

• 内部蛍光色

• 内部蛍光強度

• 目に見える粒子の色

• リガンドを捕捉する

• レポーター蛍光

マルチプレックス研究の場合、各粒子集団は、リガンドのローディング、ブロッキング、サンプルのインキュベーション、レポーター染色、洗浄、保存、およびフローサイトメトリー取得後も識別可能な状態を維持する必要があります。

アフィニティーキャプチャーとスクリーニング

SA PS 5UM-10 は以下でも評価できます。

• アフィニティー結合アッセイ

• Lリガンドスクリーニング

• 抗体スクリーニング

• ハイスループットな研究

• 粒子ベースのバイオセンサー

• マイクロ流体アッセイ

• 生体分子濃縮研究

• イメージングベースの粒子アッセイ

適合するビオチン化生体分子

ビオチン化抗体

互換性のある形式には次のものが含まれます。

• 全長 IgG

• IgM

• ファブフラグメント

• F(ab')₂ フラグメント

• 組換え抗体

• 単鎖可変フラグメント

• 単一ドメイン抗体

• その他の人工抗体フォーマット

固定化後の抗体活性は、ビオチン化方法、ビオチン基の数、ビオチンの位置、スペーサーの設計、およびタンパク質の安定性に依存します。

ビオチン化タンパク質

考えられる例は次のとおりです。

• 抗原

• 組換えタンパク質

• 酵素

• サイトカイン

• 成長因子

• 受容体

• Lエクチン

• 融合タンパク質

• 結合タンパク質

ビオチン化ペプチド

潜在的な用途には次のようなものがあります。

• エピトープマッピング

• 抗体スクリーニング

• 受容体結合研究

• 酵素の研究

• 薬物スクリーニングアッセイ

• タンパク質相互作用の研究

ペプチドとビオチンの間に適切なスペーサーがあると、アクセシビリティが向上する可能性があります。

ビオチン化核酸

互換性のある形式には次のものが含まれます。

• 一本鎖DNA

• 二本鎖DNA

• RNA

• オリゴヌクレオチドプローブ

• PCRアンプリコン

• アプタマー

• 修飾核酸プローブ

• キャプチャシーケンス

ビオチン化小分子

小さなビオチン化化合物は、そのビオチン基がストレプトアビジン表面にアクセス可能なままである場合、結合する可能性があります。

スペーサーの長さと分子の配向は、アッセイ開発中に考慮する必要があります。

推奨されるビオチン化LリガンドLのコーディング プロトコル

次の手順は一般的な開始点です。最終条件は、実際の生体分子とアプリケーションに合わせて最適化する必要があります。

1. SA PS 5UM-10 を再停止します

懸濁液が推奨取り扱い温度に達するまで待ちます。

均質になるまで穏やかに反転、回転、または制御されたボルテックスによって混合します。

5 µm粒子が保管中に沈降する可能性があるため、各サンプリング手順の前に懸濁液を混合してください。

過度の泡立ちは避けてください。

2. 必要なマイクロスフィアの量を計算する

以下に従って必要な量を決定します。

• アッセイ数

• テストごとのマイクロスフェアの量

• 必要なフローサイトメトリーイベント数

• 予想される目標濃度

• アッセイ量

• L α特異的結合能

• 洗浄ステップ数

• 予想される処理損失

固形分のみからリガンド負荷量を推定しないでください。

3. マイクロスフェアを転送します

必要な量を清潔な低結合チューブまたは処理容器に移します。

清潔なピペットチップを使用し、元の容器を汚染しないようにしてください。

4. 粒子を洗います

ミクロスフェアをストレプトアビジンおよび選択したビオチン化リガンドと適合する緩衝液で洗浄します。

リガンドのローディング中は遊離ビオチンを含むバッファーを避けてください。

考えられる回復方法には次のものがあります。

• 遠心分離

• 膜ろ過

• タンジェンシャルフロー濾過

• その他の検証済みの固液分離方法

適切な条件は実験的に確立する必要があります。

5. ビオチン化されたLリガンドを準備します

選択した結合バッファーでビオチン化抗体、タンパク質、ペプチド、または核酸を希釈します。

レビュー：

• Lリガンド濃度

• ビオチン化レベル

• 分子純度

• 集計レベル

• 無料のビオチン含有量

• 緩衝剤添加剤

• タンパク質の安定性

• 核酸の安定性

6. Lリガンドを追加します

洗浄したマイクロスフェアをビオチン化リガンドと組み合わせます。

粒子が均一に懸濁したままになるように、穏やかな混合を維持します。

過度の泡、粒子の凝集、または生体分子の変性を引き起こす混合条件は避けてください。

7. L igand Lロードを最適化する

評価する：

• ミクロスフェア濃度

• Lリガンド濃度

• Lリガンド対粒子の比率

• インキュベーション時間

• インキュベーション温度

• 緩衝液のpH

• 塩分濃度

• 混合速度

• 反応量

リガンドを最大限にロードしても、常に最高のアッセイ性能が得られるわけではありません。

過度の表面荷重は立体混雑を増加させ、ターゲットへのアクセス性を低下させる可能性があります。

8. 未結合のLリガンドを削除します

粒子を分離して洗浄し、結合していないビオチン化分子を除去します。

洗浄が不十分だとバックグラウンドが増加する可能性があり、洗浄が過剰だとマイクロスフェアの回収が低下する可能性があります。

9. マイクロスフェアをブロックする

リガンドをロードした粒子をアプリケーション互換のブロッキング試薬とともにインキュベートします。

潜在的な阻害要因には次のようなものがあります。

• ウシ血清アルブミン

• カゼイン

• 魚ゼラチン

• 非免疫免疫グロブリン

• 合成ブロッキングポリマー

• 市販のミクロスフェアブロッキングバッファー

ブロッキング性能は、ポジティブサンプルとネガティブサンプルを使用して評価する必要があります。

10. 調製したマイクロスフェアを再懸濁します。

コーティングされブロックされた粒子を適切なアッセイまたは保存バッファーに再懸濁します。

評価する：

• 粒子分散

• Lリガンド保持

• 結合活性

• 非特異的結合

• 粒子回復

• 短期的な安定性

• L長期安定性

• 微生物の安定性

フローサイトメトリービーズアッセイのワークフロー

1. キャプチャの準備マイクロスフェア

L oad SA PS 5UM-10 と選択されたビオチン化捕捉分子。

サンプルをテストする前に、粒子を洗浄してブロックしてください。

2. コントロールの準備

推奨されるコントロールには次のものが含まれます。

• 取得バッファのブランク

• 捕捉リガンドを含まないストレプトアビジンマイクロスフェア

• Lリガンドをロードしたミクロスフェア（サンプルなし）

• ネガティブサンプル

• 陽性サンプル

• レポーターのみの制御

• アイソタイプ制御

• 関連しないビオチン化リガンドのコントロール

• 多色実験のための単色コントロール

3. サンプルを追加する

調製したマイクロスフェアを試験サンプルと混合します。

最適化する：

• サンプル量

• サンプルの希釈

• ミクロスフェア濃度

• 目標濃度範囲

• インキュベーション時間

• インキュベーション温度

• 混合方法

• サンプルマトリックス

4. マイクロスフェアを洗います

許容可能なマイクロスフェア回収率を維持しながら、結合していないサンプル成分を除去します。

メソッド開発中の洗浄ステップの数、量、および組成を記録します。

5. 蛍光レポーターを追加します。

蛍光検出抗体、二次抗体、プローブ、またはその他のレポーターを追加します。

選択した蛍光色素は、目的のフローサイトメーターのレーザーおよび検出器構成と互換性がある必要があります。

6. インキュベートと洗浄

レポーター濃度とインキュベーション時間を最適化します。

未結合のレポーターを除去してバックグラウンド蛍光を低減します。

7. 取得のための再停止

最終粒子を清潔な低バックグラウンド取得バッファーに再懸濁します。

フローサイトメトリー検査の直前に混合します。

8. データの取得

目的の分析をサポートするのに十分なマイクロスフィア イベントを収集します。

考えられる分析出力は次のとおりです。

• 蛍光強度の中央値

• 平均蛍光強度

• 陽性微小球の割合

• シグナル対バックグラウンド比

• 用量反応曲線

• アッセイ精度

• 回復

• 特異性

• 交差反応性

• 検出限界研究

9. 結果を分析する

適切なコントロールを使用して、ポジティブ領域とネガティブ領域を確立します。

検査サンプルのみから陽性閾値を定義しないでください。

5 µm マイクロスフェアの検出とゲート

前方散乱ゲートと側方散乱ゲート

5 µmミクロスフェア集団は、多くの従来のフローサイトメーターの前方散乱プロットと側方散乱プロットを使用して評価できます。

予備的な FSC 対 SSC ゲートは、以下を排除するのに役立ちます。

• 電子ノイズ

• 小さな破片

• 緩衝粒子

• L個の集計

• 不定期イベント

測定された散乱位置は、粒子マトリックス、屈折率、機器の光学系、検出器の設定、およびフローセルの設計によって異なります。

レポーター蛍光検出

SA PS 5UM-10 に内部蛍光色素が含まれていない場合でも、結合したレポーターの散乱および蛍光を通じて粒子集団を分析できます。

有用なプロットには次のものが含まれます。

• FSC と SSC

• FSC 対レポーター蛍光

• SSC 対レポーター蛍光

• レポーター蛍光ヒストグラム

• 散乱面積と高さの関係

• 散乱領域と幅

一重項および凝集体の分析

凝集体は、個々の粒子よりも高い散乱、蛍光、または信号幅を生成する可能性があります。

パルス面積、高さ、および幅のパラメーターは、単一粒子をダブレットやより大きな凝集体から区別するのに役立ちます。

トリガーの選択

潜在的な買収トリガーには次のようなものがあります。

• 前方散乱

• 側方散乱光

• レポーター蛍光

• 内部粒子蛍光（利用可能な場合）

• 組み合わせたゲート戦略

粒子集中力

最初のメソッド開発中に一連の希釈をテストします。

過度に濃縮された微小球は、複数の粒子が 1 つのイベントとして測定される同時イベントを生成する可能性があります。

考えられる兆候は次のとおりです。

• 濃度依存の信号シフト

• 見かけの蛍光の増加

• 散乱の増加

• 幅広い分布

• 予期しないダブレット集団

• 不安定なイベントレート

推奨メソッドレコード

記録：

• フローサイトメーターモデル

• Lの aser 構成

• 検出器フィルター

• 検出器の電圧またはゲイン

• スキャッター設定

• トリガーチャンネル

• トリガー閾値

• サンプル流量

• マイクロスフェアの希釈

• バッファー組成

• 取得時間

• 収集されたイベントの数

• 解析ゲート

• 製品ロット番号

ブロッキングおよび非特異的結合の制御

非特異的吸着により、ネガティブサンプルの蛍光が増加し、アッセイ感度が低下する可能性があります。

考えられる原因は次のとおりです。

• ブロッキングが不十分

• 互換性のないブロッキング試薬

• 過剰な捕捉リガンド

• 過剰な蛍光レポーター

• 不十分な洗浄

• 凝集した抗体

• 疎水性サンプル成分

• 高いサンプルタンパク質濃度

• ミクロスフェアの凝集

• マトリックス干渉

複数のブロッキング試薬をスクリーニングする

いくつかのブロッキング処方を比較します。

好ましいブロッカーは、陽性サンプルのシグナルを維持しながら、陰性サンプルの蛍光を低減するものでなければなりません。

LガンドLのロードを最適化します

捕捉リガンドが多ければ多いほど良いとは限りません。

リガンドを過剰にロードすると、次のような可能性があります。

• 試薬消費量の増加

• 立体的な混雑を引き起こす

• ターゲットのアクセシビリティを低下させる

• 非特異的な相互作用の増加

• アッセイのばらつきを広げる

レポーターを評価する

過剰な蛍光レポーターはバックグラウンドを増加させる可能性があります。

ポジティブコントロールとネガティブコントロールを使用して、いくつかのレポーター濃度をテストします。

洗浄を最適化する

評価する：

• 洗浄ステップの数

• 洗浄緩衝液組成物

• 洗浄量

• 混合方法

• 分離方法

• 残留上清量

• マイクロスフィアの回収

洗剤を慎重に評価する

少量の互換性のある洗剤を使用すると、分散が改善され、非特異的吸着が減少する可能性があります。

過剰な界面活性剤は、生体分子の相互作用やレポーターの結合を妨げる可能性があります。

遊離ビオチンを避ける

緩衝液、サプリメント、サンプル、またはブロッキング試薬中の遊離ビオチンはストレプトアビジン結合部位を占有し、リガンドの負荷を減少させる可能性があります。

5 µm 、3 µmおよび 1 µm ストレプトアビジンマイクロスフェアの比較

次の場合に SA PS 5UM-10 を選択します。

• 散乱の視認性が高いことが重要です。

• 従来のフローサイトメーターが使用されます。

• 明確なパーティクル ゲートが必要です。

• 小さな破片からの分離がより容易であることが好ましい。

• ミクロンサイズのビーズの取り扱いが望まれます。

• 遠心回収が使用されます。

• 細胞サイズ範囲の粒子プラットフォームが役立ちます。

• 日常的なビーズベースのフローアッセイが開発されています。

次の場合に SA PS 3UM-10 を選択します。

• より小さいミクロンサイズの粒子が好ましい。

• 粒子数と散乱検出のバランスが必要です。

• 5 {[ L µmの沈降が低いことが望ましい。

• 定期的なフローサイトメトリー検出は依然として必要です。

次の場合に SA PS 1UM-10 を選択します。

• 単位質量あたりの粒子数が多いほど好ましい。

• より少ない反応体積が使用されます。

• Lより低い整定動作は重要です。

• この機器は 1 µm粒子を確実に検出できます。

• 単位質量当たりの集合表面積が大きいほど有益である可能性があります。

最終的な粒子サイズの選択は、直径だけではなく、アッセイのパフォーマンスに基づいて行う必要があります。

品質管理とバッチの一貫性

SA PS 5UM-10 の潜在的な品質管理パラメーターには次のものがあります。

• 平均粒子径

• 粒子 - サイズ分布

• 粒子 - サイズの変動係数

• サスペンション外観

• 固形分含有量

• ストレプトアビジンコーティングの一貫性

• ビオチン結合能

• 粒子分散

• 集計レベル

• 粒子回復

• バックグラウンド蛍光

• 非特異的結合

• 微生物制御

• 梱包の完全性

• 保存安定性

• Lロット間の一貫性

粒子 - サイズテスト

粒子 -size の特性評価により、次のことが報告される場合があります。

• 平均直径

• 中央直径

• サイズ範囲

• サイズ分布

• 変動係数

• 顕微鏡または機器の特性評価

結果報告の際には測定方法を明記する必要があります。

ビオチン結合能

結合能力は、定義されたビオチン化プローブを使用して決定する必要があります。

測定結果は以下によって異なります。

• プローブの種類

• プローブの分子サイズ

• ビオチン基の数

• プローブの純度

• 培養条件

• バッファー組成

• 検出方法

• 算出根拠

異なるテストプローブまたは方法を使用して得られた値は、直接比較できない場合があります。

フローサイトメトリーの品質管理

フローサイトメトリー QC 手順では、以下を評価できます。

• 主な粒子集団の位置

• ゲート付きマイクロスフェアの割合

• 標準プローブをロードした後のレポーター蛍光

• 蛍光分布幅

• 背景の分離

• 再現性

• 総人口

生産ロットを比較する場合は、一貫した機器設定を使用してください。

L ot 固有のドキュメント

利用可能なドキュメントには次のものが含まれます。

• 分析証明書

• 製品仕様

• 粒子 -サイズの結果

• 固形分含有量の結果

• 結合能力の結果

• 安全データシート

• 取り扱い上の注意

• ストレージに関する推奨事項

• Lの番号

• 製造日

大量生産の前に、必要なテストと合格基準について合意する必要があります。

大量生産とカスタマイズ

Shanghai SanYu Biotechnology Co., L td.は、実験室研究、パイロット開発、反復生産、および大量購入のためにSHBCストレプトアビジン ミクロスフェアを供給しています。

研究サンプルの評価

サンプルは次の点で評価できます。

• フローサイトメトリー検出

• 粒子分散

• ストレプトアビジン活性

• ビオチン化リガンドのローディング

• 非特異的結合

• 粒子回復

• アッセイの実現可能性

• 機器の互換性

パイロットスケールの開発

パイロット バッチは以下をサポートする場合があります。

• アッセイの最適化

• 結合能力の検証

• 安定性の研究

• バッファの選択

• 包装評価

• 品質管理開発

• 顧客確認

• プロセス転送

大量生産

技術要件とリリース仕様を確認した上で、バルク生産を手配することができます。

以下を提供してください:

• 必要数量

• 予想される年間需要

• 希望のパッケージサイズ

• 対象用途

• 必要な粒子径

• 必要な固形分含有量

• 必要な結合容量

• ビオチン化リガンドの種類

• バッファ要件

• 防腐剤の制限

• 品質管理要件

• 必要書類

• 配送スケジュール

• 配送先

カスタム粒子直径

用途および技術的な実現可能性に応じて、代替の粒子サイズを検討する場合があります。

カスタム ストレプトアビジンLロード

プロジェクト固有のストレプトアビジン コーティング レベルまたは結合能力の目標を評価できます。

カスタム蛍光コーディング

内部蛍光またはコード化されたストレプトアビジン ミクロスフェアは、マルチプレックス フローサイトメトリー プロジェクトで議論される可能性があります。

考えられるオプションには次のようなものがあります。

• 代替励起波長

• 代替発光波長

• さまざまな蛍光色

• 複数の蛍光強度レベル

• 顧客固有の粒子コード

カスタムバッファーと濃度

代替の固形分濃度、緩衝剤配合、保存剤システム、および包装形式を評価することができます。

OEMと民間のLの供給

協力フォーマットには次のものが含まれます。

• OEM梱包

• 顧客固有のラベル

• プライベートブランドの供給

• 顧客固有のカタログ番号

• 原料のバルク供給

• 技術文書のカスタマイズ

取り扱いと保管に関する推奨事項

最終製品ラベル、技術データシート、およびロット固有の分析証明書に従ってください。

一般的な推奨事項は次のとおりです。

• 指定された冷蔵条件下で保管してください。

• 凍結融解の安定性が検証されていない限り、凍結しないでください。

• 容器をしっかり閉めて保管してください。

• バイアルを立てて保管してください。

• サンプリングする前に十分に混合してください。

• 清潔なピペットチップと低結合チューブを使用してください。

• 元のサス​​ペンションの汚染を避けてください。

• マイクロスフィアを乾燥させないでください。

• 不必要な温度変化を繰り返さないようにしてください。

• 希釈した材料を元の容器に戻さないでください。

• 製品のロット番号と開封日を記録します。

再懸濁

保管中に 5 個のµm粒子が沈降する可能性があるため:

1. バイアルが推奨取り扱い温度に達するまで待ちます。

2. バイアルを静かに反転または回転させます。

3. 必要に応じて、制御されたボルテックスを適用します。

4. 懸濁液が均一であることを確認します。

5. 不可逆的な凝集体がないか検査します。

凍結を避ける

凍結すると次のような原因が考えられます。

• 粒子集約

• ストレプトアビジン活性の低下

• サスペンションの安定性の変化

• 粒子回収率の低下

• アッセイバックグラウンドの増加

乾燥を避ける

洗浄中にマイクロスフィアペレットを乾燥させないでください。

乾燥すると不可逆的な凝集が生じ、機能性能が低下する可能性があります。

遊離ビオチンから守る

ビオチン化リガンドの固定化中は遊離ビオチンを避けてください。

調製した試薬の安定性を評価する

Lリガンドがロードされブロックされたミクロスフェアは、元の SA PS 5UM-10 懸濁液とは異なる安定性を有する可能性があります。

調製した試薬を、意図された保管、輸送、および操作条件下で評価します。

よくある質問

SA PS 5UM-10 とは何ですか?

SA PS 5UM-10 は、フローサイトメトリーおよびビーズベースのアッセイ研究においてビオチン化生体分子を捕捉するために、固形分 1% で供給される 5 µmストレプトアビジンでコーティングされたマイクロスフェア懸濁液です。

SHBCブランドとは何ですか?

SHBCは、Shanghai SanYu Biotechnology Co.、 L td のマイクロスフェアおよびバイオテクノロジー材料のブランドです。

公称粒径はどれくらいですか?

公称粒径は 5 µmです。

実際に測定された直径と粒度分布は、ロット固有の文書を使用して確認する必要があります。

固形物含有量は何ですか?

SA PS 5UM-10 は固形分 1% で供給されます。

SA PS 5UM-10 ミクロスフェアは磁性を持っていますか?

磁気特性が技術仕様に具体的に記載されていない限り、製品は磁気を帯びているとみなすべきではありません。

磁気分離の場合は、特にストレプトアビジン磁気ビーズと記載されている製品を選択してください。

マイクロスフィアは蛍光性ですか?

製品仕様に蛍光が特に記載されていない限り、標準製品には内部蛍光色素が含まれているとみなすべきではありません。

フローサイトメトリー検出では、結合したレポーターからの散乱または蛍光を使用できます。

SA PS 5UM-10 に結合できる分子は何ですか?

ストレプトアビジン表面は、ビオチン化抗体、抗原、タンパク質、ペプチド、オリゴヌクレオチド、 DNA 、 RNA 、アプタマー、およびその他のビオチン含有分子を捕捉できます。

u nmで修飾された抗体は直接結合できますか?

u nmで修飾された抗体は、ビオチン化されるか、別の適合する試薬を介して結合されない限り、ストレプトアビジンとビオチンの相互作用を通じて特異的に結合しません。

EDC/NHSアクティベーションは必要ですか?

ストレプトアビジンでコーティングされたマイクロスフェアにビオチン化分子をロードする場合、通常EDC/NHS活性化は必要ありません。

ビオチン結合能力とは何ですか?

結合能力は、製品仕様書またはロット固有の分析証明書を使用して確認する必要があります。

固形分のみから計算すべきではありません。

SA PS 5UM-10 はフローサイトメトリーで使用できますか?

はい。 5 µmの粒子直径は、フローサイトメトリービーズアッセイおよび粒子ベースの研究での評価に適しています。

従来のフローサイトメーターは 5 つのµmマイクロスフェアを検出できますか?

従来のフローサイトメーターの多くは、適切な散乱設定を使用して 5 µmマイクロスフェアを検出できます。

実際のパフォーマンスは、機器の光学系、レーザー、検出器、トリガー設定、およびサンプル バッファーによって異なります。

SA PS 5UM-10 はサンドイッチイムノアッセイに使用できますか?

はい。ビオチン化捕捉抗体を粒子上に固定化し、続いて蛍光レポーター抗体を使用して標的を捕捉および検出することができます。

核酸検出に使用できますか?

はい。ビオチン化オリゴヌクレオチド、 DNA 、 RNA 、 PCR生成物、およびアプタマーは、固定化とターゲット捕捉に関して評価できます。

SA PS 5UM-10 はマルチプレックス アッセイで使用できますか?

はい、ただし、SA PS 5UM-10 集団が他のマイクロスフェア集団と区別できる場合に限ります。

カスタマイズされた蛍光コーディングが必要な場合があります。

マイクロスフィアはどのように洗浄すればよいですか?

洗浄方法は、粒子の組成、密度、緩衝液、容量、および必要な回収率によって異なります。

遠心分離または膜ベースの方法を評価できます。

マイクロスフィアの回収率が低いのはなぜですか?

考えられる原因は次のとおりです。

• 遠心力不足

• 短い遠心時間

• L上清除去中の損失

• チューブ表面への付着性

• 互換性のない分離方法

• 粒子集約

• 過度の洗濯

どうすれば非特異的結合を減らすことができるのでしょうか?

ブロッキング試薬、リガンド濃度、レポーター濃度、洗浄条件、界面活性剤レベル、サンプル希釈、インキュベーション時間を最適化します。

遊離ビオチンを含むバッファーは使用できますか?

遊離ビオチンはストレプトアビジン結合部位を占有する可能性があるため、リガンドのローディング中は一般に避けるべきです。

なぜ粒子は沈降するのでしょうか？

ミクロンサイズの粒子は、そのサイズと密度により沈降する可能性があります。

各サンプリングステップの前に懸濁液を完全に混合します。

SA PS 5UM-10 はフローサイトメトリーの前に希釈する必要がありますか?

はい。必要な粒子数とイベント率に応じて実用的な希釈液を調製します。

メソッド開発中は、連続希釈が推奨されます。

マイクロスフィアは凍結できますか?

凍結融解の安定性が特に検証されていない限り、凍結は一般的に推奨されません。

濃度はカスタマイズできますか?

プロジェクトの要件と製造の実現可能性に応じて、代替の固形分濃度について議論する場合があります。

結合容量はカスタマイズできますか?

プロジェクト固有のストレプトアビジン負荷または結合能力ターゲットを評価できます。

蛍光ストレプトアビジンマイクロスフェアは製造できますか?

蛍光またはコード化されたストレプトアビジン ミクロスフェアは、適格なマルチプレックス フローサイトメトリー プロジェクトについて議論される可能性があります。

大量生産は可能ですか?

はい。 Shanghai SanYu Biotechnology Co., L td.サンプル、パイロット バッチ、繰り返し注文、 OEMプロジェクト、および大量生産をサポートします。

見積もりにはどのような情報が必要ですか?

以下を提供してください:

• カタログ番号 SA PS 5UM-10

• 必要数量

• 年間予想購入量

• 希望のパッケージサイズ

• 対象用途

• フローサイトメーターモデル

• ビオチン化リガンドの種類

• 必要な結合容量

• テストごとに必要なマイクロスフィアの量

• バッファ制限

• 防腐剤の制限

• 品質管理要件

• 必要書類

• 配送先

サンプルまたは一括見積もりをリクエストする

SHBC SA PS 5UM-10 5 µm ストレプトアビジンマイクロスフェアは、ビオチン化抗体、タンパク質、ペプチド、オリゴヌクレオチド、 DNA 、 RNA 、アプタマー、およびその他のビオチン標識生体分子を固定化するための柔軟な粒子プラットフォームを提供します。

この製品は次のような用途に適しています。

• フローサイトメトリービーズアッセイ

• ビーズベースのサンドイッチイムノアッセイ

• 競合結合アッセイ

• ビオチン化抗体の固定化

• タンパク質相互作用研究

• 核酸捕捉

• ハイブリダイゼーションアッセイ

• 親和性結合の研究

• マルチプレックスフローサイトメトリーの開発

• 研究用試薬の製造

SA PS 5UM-10 は以下を提供します:

• 5 µm公称粒径

• ストレプトアビジン機能性表面

• 固形分1%の懸濁液

• ビオチン化生体分子との適合性

• サンプルとパイロットバッチの供給

• 大量生産能力

• OEMおよびカスタム開発サポート

サンプルの評価または一括購入の場合は、使用目的、必要な量、ビオチン化リガンド、必要な結合容量、フローサイトメーターの構成、梱包要件、および品質管理仕様を提供します。

製品名: 5 µm ストレプトアビジンマイクロスフェア
カタログ番号: SA PS 5UM-10
ブランド: SHBC
メーカー: Shanghai SanYu Biotechnology Co., L td.
公称粒子直径: 5 µm
表面修飾: ストレプトアビジン
固形分含有量: 1%
主な用途: フローサイトメトリーおよびビーズアッセイ 研究
供給能力: サンプル、パイロットバッチ、およびバルク生産
使用目的: 研究用途のみ。診断または治療用ではありません。