Microesferas de estreptavidina 5um SAPS5UM-10 1%

Microesferas de estreptavidina 5µm para citometria de fluxo

As microesferas de estreptavidina SHBC SAPS5UM-10 são microesferas funcionalizadas na superfície de 5 µm desenvolvidas para imobilizar anticorpos biotinilados, antígenos, proteínas, peptídeos, oligonucleotídeos, DNA, RNA, aptâmeros e outras biomoléculas marcadas com biotina.

O produto é fornecido como uma suspensão de 1% de sólidos e foi projetado para ensaios de citometria de fluxo, desenvolvimento de imunoensaios baseados em partículas, pesquisa de ligação por afinidade, captura de ácido nucleico, análise de interação de biomoléculas e fabricação de reagentes de pesquisa.

apoia avaliação de amostras laboratoriais, desenvolvimento em escala piloto, produção repetida, projetos OEM e fornecimento em massa para empresas de biotecnologia, institutos de pesquisa, universidades, laboratórios de citometria de fluxo, fabricantes de instrumentos e organizações de desenvolvimento de reagentes.

Resposta rápida do produto

SAPS5UM-10 é uma suspensão de microesferas revestidas com estreptavidina de 5 µm fornecida com 1% de sólidos. A superfície funcional da estreptavidina captura biomoléculas biotiniladas e pode ser usada para desenvolver ensaios de citometria de fluxo, imunoensaios sanduíche, sistemas de captura de afinidade, ensaios de hibridização de ácidos nucleicos, estudos de interação de proteínas e plataformas de pesquisa multiplex baseadas em partículas.

Destaques do produto

• Nome do produto: Microesferas de Estreptavidina de 5µm

• Número de catálogo: SAPS5UM-10

• Marca: SHBC

• Fabricante: Shanghai SanYu Biotecnologia Co., Ltd.

• Diâmetro nominal da partícula: 5µm

• Modificação de superfície: Estreptavidina

• Conteúdo de sólidos: 1%

• Princípio de ligação: afinidade estreptavidina-biotina

• Forma física: Suspensão aquosa de microesferas

• Aplicação primária: pesquisa de ensaio de citometria de fluxo

• Capacidade de fornecimento: Amostras, lotes piloto e produção em massa

• Personalização: Disponível conforme viabilidade técnica

• Uso pretendido: Somente para uso em pesquisa

O que são microesferas de estreptavidina SAPS5UM-10?

SAPS5UM-10 consiste em microesferas de 5 µm com estreptavidina imobilizada na superfície da partícula.

As microesferas revestidas com estreptavidina fornecem uma fase sólida conveniente para capturar moléculas biotiniladas. Os pesquisadores podem anexar um anticorpo biotinilado selecionado, proteína, peptídeo, sonda de ácido nucleico, aptâmero, receptor ou outro ligante sem realizar ativação covalente direta da superfície da microesfera.

Após a imobilização do ligante, as microesferas preparadas podem ser usadas para capturar moléculas alvo de uma amostra. A ligação ao alvo pode então ser detectada com um anticorpo fluorescente, sonda fluorescente, reagente secundário ou outro repórter compatível e analisada por citometria de fluxo.

Potenciais ligantes biotinilados incluem:

• Anticorpos monoclonais e policlonais

• Anticorpos recombinantes

• Fragmentos de anticorpos

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• Proteínas recombinantes

• Peptídeos

• Enzimas

• Receptores

• Lectinas

• Sondas oligonucleotídicas

• Sondas de DNA

• Sondas de RNA

• Produtos PCR

• Aptâmeros

• Pequenas moléculas biotiniladas

O diâmetro de partícula de 5 µm fornece uma população de tamanho micrométrico que geralmente pode ser distinguida do fundo de partículas pequenas em muitos citômetros de fluxo convencionais.

Em comparação com partículas menores, as microesferas de 5 µm podem oferecer detecção de dispersão mais fácil, controle mais conveniente e recuperação de partículas mais prática durante a lavagem. No entanto, o número de partículas por unidade de massa, o comportamento de sedimentação, a capacidade de ligação e a cinética do ensaio diferem daqueles das microesferas menores e devem ser avaliados para a aplicação pretendida.

SAPS5UM-10 é fornecido como matéria-prima para pesquisa. Não é automaticamente um reagente de diagnóstico acabado, uma esfera de calibração certificada, um padrão de contagem absoluta, uma esfera de codificação fluorescente ou um produto de separação magnética.

Especificações Técnicas SAPS5UM-10

Os seguintes parâmetros devem ser confirmados usando a especificação do produto final ou o Certificado de Análise específico do lote:

• Material particulado

• Diâmetro médio medido das partículas

• Faixa de tamanho de partícula

• Distribuição de tamanho de partícula

• Coeficiente de variação do tamanho das partículas

• Nível de revestimento de estreptavidina

• Capacidade de ligação à biotina

• Concentração do número de partículas

• Tampão de suspensão

• PH tampão

• Estabilizador ou surfactante

• Conservante

• Tamanho do pacote

• Prazo de validade

• Condições de armazenamento

A capacidade de ligação deve ser informada com a sonda de teste, o método de teste, a base de cálculo e o resultado específico do lote.

A concentração de 1% de sólidos por si só não pode determinar a concentração do número de partículas ou a capacidade disponível de ligação à biotina.

Como funciona a ligação estreptavidina-biotina

A estreptavidina é uma proteína de ligação à biotina. Quando um ligante biotinilado é misturado com SAPS5UM-10, o grupo biotina se liga aos locais de estreptavidina disponíveis na superfície da microesfera.

A estrutura básica pode ser representada como:

Superfície da Microesfera – Estreptavidina – Biotina – Ligante de Captura

Para um imunoensaio em sanduíche, a estrutura pode ser:

Microesfera – Estreptavidina – Anticorpo de Captura Biotinilado – Antígeno Alvo – Anticorpo de Detecção Fluorescente

A fluorescência associada a cada microesfera pode então ser medida por citometria de fluxo.

Vantagens da imobilização com estreptavidina-biotina

• Normalmente, nenhuma ativação de EDC/NHS é necessária para o carregamento do ligante.

• Uma plataforma de microesferas pode ser usada com diferentes ligantes biotinilados.

• Anticorpos, proteínas, peptídeos e sondas de ácidos nucleicos podem ser imobilizados.

• O carregamento do ligante pode ser realizado sob condições aquosas suaves.

• As moléculas de captura podem ser alteradas sem redesenhar a partícula base.

• O sistema suporta o desenvolvimento de ensaios modulares.

• A plataforma pode ser usada em pesquisas de alvo único e multiplex.

• Ligantes imobilizados podem ser combinados com diferentes repórteres fluorescentes.

O desempenho final depende de:

• Atividade de estreptavidina

• Densidade de revestimento de estreptavidina

• Nível de biotinilação

• Acessibilidade à biotina

• Tamanho molecular do ligante

• Comprimento do espaçador

• Aglomeração de superfície

• Composição do buffer

• Condições de incubação

• Concentração alvo

• Matriz de amostra

A biotina livre na solução de ligante, amostra, tampão ou formulação de bloqueio pode ocupar locais de ligação de estreptavidina disponíveis e reduzir a imobilização do ligante.

Por que escolher microesferas de estreptavidina de 5µm?

Detecção clara em citômetros de fluxo convencionais

O diâmetro de partícula de 5 µm pode fornecer uma população distinta de dispersão direta e lateral em muitos citômetros de fluxo convencionais.

Isso pode tornar mais fácil:

• Localize a população de microesferas

• Estabeleça um portão de dispersão estável

• Separe microesferas de pequenos detritos

• Confirme a recuperação de partículas

• Identifique possíveis agregados

• Avaliar dupletos

• Medir a fluorescência do repórter

• Crie modelos de aquisição repetíveis

A detecção real depende do material da partícula, do índice de refração, da óptica do citômetro de fluxo, das configurações do detector, da seleção do disparador e do buffer de amostra.

Tamanho prático para ensaios baseados em esferas

A faixa de tamanho de 5 µm é adequada para muitos fluxos de trabalho de pesquisa de citometria de fluxo baseada em partículas.

As partículas fornecem uma superfície física para imobilização do ligante de captura, permanecendo pequenas o suficiente para reações baseadas em suspensão e análise de partículas individuais.

Recuperação mais fácil de partículas

Partículas de tamanho micrométrico podem ser mais fáceis de recuperar por uma centrifugação validada ou por um método baseado em membrana do que partículas menores.

A recuperação de partículas ainda depende de:

• Densidade de partículas

• Material particulado

• Força centrífuga

• Tempo de centrifugação

• Volume de processamento

• Geometria do tubo

• Superfície do tubo

• Viscosidade do tampão

• Concentração de surfactante

• Número de etapas de lavagem

O método de separação deve ser verificado experimentalmente.

Adequado para estudos de faixa de tamanho de célula

Uma microesfera de 5 µm pode ser avaliada como uma partícula sintética do tamanho de um mícron em análise celular e pesquisa de interação de partículas.

No entanto, as microesferas sintéticas não reproduzem as propriedades físicas ou biológicas completas das células, incluindo deformabilidade, densidade, composição da membrana, mobilidade do receptor ou actividade biológica.

Seleção flexível de ligantes

A mesma partícula base SAPS5UM-10 pode ser combinada com diferentes moléculas de captura biotiniladas, permitindo o desenvolvimento de múltiplos ensaios a partir de uma plataforma de partículas.

Apoia o aumento da pesquisa até a produção

O produto pode suportar:

• Teste inicial de viabilidade

• Otimização de ensaio

• Produção em lote piloto

• Teste de estabilidade

• Avaliação de embalagens

• Comparação lote a lote

• Desenvolvimento OEM

• Fornecimento a granel de longo prazo

Principais recursos e benefícios

Diâmetro nominal da partícula de 5µm

As partículas de tamanho micrométrico são adequadas para controle de citometria de fluxo, estudos de ligação baseados em partículas, desenvolvimento de imunoensaios e pesquisa de captura de afinidade.

Superfície Funcional de Estreptavidina

A superfície captura anticorpos biotinilados, proteínas, peptídeos, oligonucleotídeos, DNA, RNA, aptâmeros e outras moléculas contendo biotina.

Suspensão de Sólidos a 1%

SAPS5UM-10 é fornecido com 1% de sólidos e pode ser diluído de acordo com o número de partículas necessário, volume de ensaio, capacidade de ligação e taxa de eventos de citometria de fluxo.

Imobilização Simples de Ligante

Os ligantes biotinilados podem ser carregados sem ativação direta da carbodiimida pelo usuário final.

Plataforma modular de ensaio

Os pesquisadores podem usar a mesma plataforma de partículas com diferentes moléculas de captura biotiniladas.

Adequado para detecção de repórter fluorescente

As partículas podem ser combinadas com anticorpos fluorescentes, sondas, reagentes secundários ou outros repórteres para análise de citometria de fluxo.

Adequado para pesquisas Singleplex e Multiplex

SAPS5UM-10 pode ser avaliado como uma população de partículas em um sistema de citometria de fluxo multiplex.

Capacidade de fabricação em massa

SHBC oferece suporte a amostras, lotes piloto, pedidos repetidos, produção personalizada e fornecimento em massa.

Opções de desenvolvimento personalizado

Diâmetro de partícula, concentração, carga de estreptavidina, capacidade de ligação, tampão, conservante, codificação de fluorescência, embalagem e especificações de liberação podem ser discutidos para projetos qualificados.

Aplicações em pesquisa por citometria de fluxo

Imunoensaios Sanduíche Baseados em Esferas

SAPS5UM-10 pode ser usado como fase sólida em um imunoensaio sanduíche de citometria de fluxo.

Um fluxo de trabalho típico inclui:

1. Imobilizando um anticorpo de captura biotinilado.

2. Bloqueando a superfície restante da partícula.

3. Incubar as partículas com a amostra.

4. Capturando o analito alvo.

5. Adicionando um anticorpo de detecção fluorescente.

6. Remoção de reagentes não ligados.

7. Medição da fluorescência associada a microesferas por citometria de fluxo.

Os possíveis alvos de pesquisa incluem:

• Citocinas

• Hormônios

• Fatores de crescimento

• Anticorpos

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• Enzimas

• Biomarcadores

• Proteínas associadas a patógenos

• Analitos ambientais

• Metas de segurança alimentar

• Compostos de pesquisa

Desenvolvimento de ensaios competitivos

SAPS5UM-10 também pode ser avaliado em formatos de ligação competitivos.

Ensaios competitivos podem ser considerados para:

• Moléculas pequenas

• Acontece

• Peptídeos

• Drogas

• Toxinas

• Hormônios

• Alvos com sites de ligação limitados

A relação entre a concentração alvo e o sinal de fluorescência depende do desenho final do ensaio.

Imobilização de Anticorpos Biotinilados

Anticorpos biotinilados podem ser anexados ao SAPS5UM-10 para:

• Detecção de antígeno

• Triagem de anticorpos

• Triagem de hibridoma

• Pesquisa de biomarcadores

• Comparação de captura-anticorpo

• Estudos de viabilidade de ensaio

• Avaliação de especificidade

• Teste de reatividade cruzada

• Comparação de afinidade

Pesquisa de interação entre proteínas e peptídeos

Proteínas e peptídeos biotinilados podem ser imobilizados para:

• Estudos de interação anticorpo-antígeno

• Ligação proteína-proteína

• Pesquisa receptor-ligante

• Mapeamento de epítopos

• Estudos de interação enzimática

• Triagem de inibidor

• Avaliação de candidato a medicamento

• Comparação de afinidade de ligação

Captura de Ácido Nucleico

Oligonucleotídeos biotinilados, DNA, RNA, produtos de PCR e aptâmeros podem ser ligados ao SAPS5UM-10.

As possíveis aplicações de pesquisa incluem:

• Captura específica de sequência

• Desenvolvimento de ensaio de hibridização

• Detecção de produtos PCR

• Pesquisa de genotipagem

• Pesquisa de detecção de mutação

• Ensaios baseados em aptâmeros

• Estudos de interação DNA-proteína

• Estudos de ligação de RNA

• Desenvolvimento de ensaio molecular

Pesquisa de ligação celular

Quando revestidas com um anticorpo, receptor, ligante ou lectina biotinilado apropriado, as partículas podem ser avaliadas quanto à ligação a células ou alvos de superfície celular.

Parâmetros importantes incluem:

• Densidade do ligante de captura

• Proporção microesfera para célula

• Concentração celular

• Temperatura de incubação

• Tempo de incubação

• Método de mistura

• Condições de lavagem

• Viabilidade celular

• Fixação de partículas não específicas

Citometria de Fluxo Multiplex

Diferentes populações de microesferas podem ser potencialmente distinguidas usando:

• Diâmetro da partícula

• Cor de fluorescência interna

• Intensidade de fluorescência interna

• Cor de partícula visível

• Ligante de captura

• Fluorescência do repórter

Para pesquisa multiplex, cada população de partículas deve permanecer distinguível após carregamento de ligante, bloqueio, incubação de amostra, coloração de repórter, lavagem, armazenamento e aquisição de citometria de fluxo.

Captura e triagem de afinidade

SAPS5UM-10 também pode ser avaliado em:

• Ensaios de ligação por afinidade

• Triagem de ligante

• Triagem de anticorpos

• Pesquisa de alto rendimento

• Biossensores baseados em partículas

• Ensaios microfluídicos

• Estudos de enriquecimento de biomoléculas

• Ensaios de partículas baseados em imagens

Biomoléculas Biotiniladas Compatíveis

Anticorpos Biotinilados

Os formatos compatíveis podem incluir:

• IgG completo

• IgM

• Fragmentos fabulosos

• Fragmentos F(ab′)₂

• Anticorpos recombinantes

• Fragmentos variáveis ​​de cadeia única

• Anticorpos de domínio único

• Outros formatos de anticorpos projetados

A atividade do anticorpo após a imobilização depende do método de biotinilação, do número de grupos de biotina, da localização da biotina, do desenho do espaçador e da estabilidade da proteína.

Proteínas Biotiniladas

Exemplos potenciais incluem:

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• Proteínas recombinantes

• Enzimas

• Citocinas

• Fatores de crescimento

• Receptores

• Lectinas

• Proteínas de fusão

• Proteínas de ligação

Peptídeos Biotinilados

Os usos potenciais incluem:

• Mapeamento de epítopos

• Triagem de anticorpos

• Estudos de ligação ao receptor

• Pesquisa enzimática

• Ensaios de triagem de drogas

• Estudos de interação proteica

Um espaçador adequado entre o peptídeo e a biotina pode melhorar a acessibilidade.

Ácidos Nucleicos Biotinilados

Os formatos compatíveis podem incluir:

• DNA de fita simples

• DNA de fita dupla

• ARN

• Sondas oligonucleotídicas

• Amplicons de PCR

• Aptâmeros

• Sondas de ácido nucleico modificadas

• Sequências de captura

Moléculas Pequenas Biotiniladas

Pequenos compostos biotinilados podem ser ligados quando o seu grupo biotina permanece acessível à superfície da estreptavidina.

O comprimento do espaçador e a orientação molecular devem ser considerados durante o desenvolvimento do ensaio.

Protocolo recomendado de carregamento de ligante biotinilado

O procedimento a seguir é um ponto de partida geral. As condições finais devem ser otimizadas para a biomolécula e aplicação reais.

1. Ressuspender SAPS5UM-10

Deixe a suspensão atingir a temperatura de manuseio recomendada.

Misture por inversão suave, rotação ou vórtice controlado até ficar homogêneo.

Dado que partículas de 5 µm podem assentar durante o armazenamento, misture a suspensão antes de cada etapa de amostragem.

Evite espuma excessiva.

2. Calcule a quantidade necessária de microesferas

Determine a quantidade necessária de acordo com:

• Número de ensaios

• Quantidade de microesferas por teste

• Contagem necessária de eventos de citometria de fluxo

• Concentração alvo esperada

• Volume de ensaio

• Capacidade de ligação específica do lote

• Número de etapas de lavagem

• Perda de processamento esperada

Não estime a carga do ligante apenas a partir do conteúdo de sólidos.

3. Transfira as microesferas

Transfira a quantidade necessária para um tubo ou recipiente de processamento limpo e de baixa ligação.

Use pontas de pipeta limpas e evite contaminar o recipiente original.

4. Lave as partículas

Lave as microesferas com um tampão compatível com estreptavidina e o ligante biotinilado selecionado.

Evite tampões contendo biotina livre durante o carregamento do ligante.

Os métodos de recuperação potenciais incluem:

• Centrifugação

• Filtração por membrana

• Filtração de fluxo tangencial

• Outros métodos validados de separação sólido-líquido

Condições adequadas devem ser estabelecidas experimentalmente.

5. Prepare o ligante biotinilado

Diluir o anticorpo biotinilado, proteína, peptídeo ou ácido nucleico no tampão de ligação selecionado.

Análise:

• Concentração de ligante

• Nível de biotinilação

• Pureza molecular

• Nível agregado

• Conteúdo gratuito de biotina

• Aditivos tampão

• Estabilidade proteica

• Estabilidade de ácido nucleico

6. Adicione o ligante

Combine as microesferas lavadas com o ligante biotinilado.

Mantenha uma mistura suave para que as partículas permaneçam uniformemente suspensas.

Evite condições de mistura que causem espuma excessiva, agregação de partículas ou desnaturação de biomoléculas.

7. Otimize o carregamento do ligante

Avaliar:

• Concentração de microesferas

• Concentração de ligante

• Razão ligante-partícula

• Tempo de incubação

• Temperatura de incubação

• PH tampão

• Concentração de sal

• Velocidade de mistura

• Volume de reação

A carga máxima do ligante nem sempre proporciona o melhor desempenho do ensaio.

A carga superficial excessiva pode aumentar o apinhamento estérico e reduzir a acessibilidade do alvo.

8. Remover ligante não ligado

Separe e lave as partículas para remover moléculas biotiniladas não ligadas.

A lavagem insuficiente pode aumentar o fundo, enquanto a lavagem excessiva pode reduzir a recuperação das microesferas.

9. Bloqueie as microesferas

Incubar as partículas carregadas com ligante com um reagente de bloqueio compatível com a aplicação.

Os bloqueadores potenciais incluem:

• Albumina sérica bovina

• Caseína

• Gelatina de peixe

• Imunoglobulina não imune

• Polímeros bloqueadores sintéticos

• Tampões comerciais de bloqueio de microesferas

O desempenho do bloqueio deve ser avaliado utilizando amostras positivas e negativas.

10. Ressuspender as microesferas preparadas

Ressuspender as partículas revestidas e bloqueadas num ensaio adequado ou tampão de armazenamento.

Avaliar:

• Dispersão de partículas

• Retenção de ligante

• Atividade de vinculação

• Ligação não específica

• Recuperação de partículas

• Estabilidade a curto prazo

• Estabilidade a longo prazo

• Estabilidade microbiana

Fluxo de trabalho do ensaio de grânulos de citometria de fluxo

1. Preparar Microesferas de Captura

Carregue SAPS5UM-10 com a molécula de captura biotinilada selecionada.

Lave e bloqueie as partículas antes de testar as amostras.

2. Prepare os controles

Os controles recomendados podem incluir:

• Buffer de aquisição em branco

• Microesferas de estreptavidina sem ligante de captura

• Microesferas carregadas com ligante sem amostra

• Amostra negativa

• Amostra positiva

• Controle apenas para repórteres

• Controle de isótipo

• Controle de ligante biotinilado não relevante

• Controles de cor única para experimentos multicoloridos

3. Adicione a amostra

Combine as microesferas preparadas com a amostra de teste.

Otimizar:

• Volume de amostra

• Diluição da amostra

• Concentração de microesferas

• Faixa de concentração alvo

• Tempo de incubação

• Temperatura de incubação

• Método de mistura

• Matriz de amostra

4. Lave as microesferas

Remova os componentes da amostra não ligados enquanto mantém a recuperação aceitável das microesferas.

Registre o número, o volume e a composição das etapas de lavagem durante o desenvolvimento do método.

5. Adicione o repórter fluorescente

Adicione um anticorpo de detecção fluorescente, anticorpo secundário, sonda ou outro repórter.

O fluoróforo selecionado deve ser compatível com a configuração do laser e do detector do citômetro de fluxo pretendido.

6. Incubar e lavar

Otimize a concentração do repórter e o tempo de incubação.

Remova o repórter não ligado para reduzir a fluorescência de fundo.

7. Ressuspender para aquisição

Ressuspender as partículas finais em um buffer de aquisição limpo e de baixo fundo.

Misture imediatamente antes do teste de citometria de fluxo.

8. Adquirir dados

Colete eventos de microesferas suficientes para apoiar a análise pretendida.

Os possíveis resultados analíticos incluem:

• Intensidade mediana de fluorescência

• Intensidade média de fluorescência

• Porcentagem de microesferas positivas

• Relação sinal-fundo

• Curva dose-resposta

• Precisão do ensaio

• Recuperação

• Especificidade

• Reatividade cruzada

• Pesquisa de limite de detecção

9. Analise os resultados

Estabeleça regiões positivas e negativas usando controles apropriados.

Não defina o limite positivo apenas com base na amostra de teste.

Detecção e controle de microesferas de 5µm

Controle de dispersão frontal e dispersão lateral

A população de microesferas de 5 µm pode ser avaliada usando gráficos de dispersão direta e de dispersão lateral em muitos citômetros de fluxo convencionais.

Uma porta preliminar FSC versus SSC pode ajudar a excluir:

• Ruído eletrônico

• Pequenos detritos

• Partículas tampão

• Grandes agregados

• Eventos irregulares

A posição de dispersão medida depende da matriz da partícula, do índice de refração, da óptica do instrumento, das configurações do detector e do design da célula de fluxo.

Detecção de fluorescência do repórter

Quando o SAPS5UM-10 não contém um corante fluorescente interno, a população de partículas ainda pode ser analisada através da dispersão e da fluorescência de um repórter ligado.

Parcelas úteis podem incluir:

• FSC versus SSC

• FSC versus fluorescência repórter

• SSC versus fluorescência repórter

• Histograma de fluorescência do repórter

• Área de dispersão versus altura

• Área de dispersão versus largura

Análise Singlete e Agregada

Os agregados podem produzir maior dispersão, fluorescência ou largura de sinal do que as partículas individuais.

Os parâmetros de área de pulso, altura e largura podem ajudar a distinguir partículas únicas de dupletos e agregados maiores.

Seleção de gatilho

Os possíveis gatilhos de aquisição incluem:

• Dispersão para frente

• Dispersão lateral

• Fluorescência do repórter

• Fluorescência de partículas internas quando disponível

• Estratégias de gate combinadas

Concentração de Partículas

Teste uma série de diluições durante o desenvolvimento inicial do método.

Microesferas excessivamente concentradas podem produzir eventos coincidentes nos quais múltiplas partículas são medidas como um evento.

As possíveis indicações incluem:

• Mudanças de sinal dependentes da concentração

• Aumento da fluorescência aparente

• Maior dispersão

• Distribuições amplas

• Populações duplas inesperadas

• Taxas de eventos instáveis

Registros de métodos recomendados

Registro:

• Modelo de citômetro de fluxo

• Configuração do laser

• Filtros detectores

• Tensão ou ganho do detector

• Configurações de dispersão

• Canal de gatilho

• Limite de disparo

• Taxa de fluxo de amostra

• Diluição de microesferas

• Composição do buffer

• Tempo de aquisição

• Número de eventos coletados

• Portões de análise

• Número de lote do produto

Bloqueio e controle de vinculação não específica

A adsorção não específica pode aumentar a fluorescência da amostra negativa e reduzir a sensibilidade do ensaio.

As possíveis causas incluem:

• Bloqueio insuficiente

• Reagente de bloqueio incompatível

• Excesso de ligante de captura

• Excesso de repórter fluorescente

• Lavagem inadequada

• Anticorpos agregados

• Componentes de amostra hidrofóbicos

• Alta concentração de proteína na amostra

• Agregação de microesferas

• Interferência matricial

Tela de múltiplos reagentes de bloqueio

Compare várias formulações de bloqueio.

O bloqueador preferido deve reduzir a fluorescência da amostra negativa enquanto mantém o sinal da amostra positiva.

Otimize o carregamento do ligante

Mais ligante de captura nem sempre é melhor.

Carga excessiva de ligante pode:

• Aumentar o consumo de reagentes

• Causa apinhamento estérico

• Reduzir a acessibilidade do alvo

• Aumentar interações não específicas

• Ampliar a variabilidade do ensaio

Titule o Repórter

O excesso de repórter fluorescente pode aumentar o fundo.

Teste várias concentrações de repórteres usando controles positivos e negativos.

Otimize a lavagem

Avaliar:

• Número de etapas de lavagem

• Composição do tampão de lavagem

• Volume de lavagem

• Método de mistura

• Método de separação

• Volume residual de sobrenadante

• Recuperação de microesferas

Avalie os detergentes com cuidado

Uma pequena quantidade de detergente compatível pode melhorar a dispersão e reduzir a adsorção inespecífica.

O excesso de detergente pode interferir nas interações das biomoléculas ou na ligação do repórter.

Evite biotina grátis

A biotina livre em tampões, suplementos, amostras ou reagentes de bloqueio pode ocupar locais de ligação à estreptavidina e reduzir a carga do ligante.

Comparação de microesferas de estreptavidina de 5 µm, 3 µm e 1 µm

Escolha SAPS5UM-10 quando:

• Uma forte visibilidade de dispersão é importante.

• Um citômetro de fluxo convencional será usado.

• É necessária uma passagem clara de partículas.

• É preferível uma separação mais fácil de pequenos detritos.

• O manuseio de esferas de tamanho micrométrico é desejado.

• A recuperação centrífuga será usada.

• Uma plataforma de partículas com tamanho de célula é útil.

• Ensaios de fluxo baseados em esferas de rotina estão sendo desenvolvidos.

Escolha SAPS3UM-10 quando:

• É preferida uma partícula de tamanho menor em mícron.

• É necessário um equilíbrio entre o número de partículas e a detecção de dispersão.

• É desejável uma sedimentação inferior a partículas de 5 µm.

• A detecção rotineira de citometria de fluxo ainda é necessária.

Escolha SAPS1UM-10 quando:

• É preferido um número de partículas mais elevado por unidade de massa.

• Volumes de reação menores são usados.

• Um comportamento de acomodação mais baixo é importante.

• O instrumento pode detectar com segurança partículas de 1 µm.

• Uma área de superfície coletiva maior por unidade de massa pode ser benéfica.

A seleção final do tamanho das partículas deve ser baseada no desempenho do ensaio e não apenas no diâmetro.

Controle de qualidade e consistência de lote

Os possíveis parâmetros de controle de qualidade para SAPS5UM-10 incluem:

• Diâmetro médio das partículas

• Distribuição de tamanho de partícula

• Coeficiente de variação do tamanho das partículas

• Aparência de suspensão

• Conteúdo de sólidos

• Consistência do revestimento de estreptavidina

• Capacidade de ligação à biotina

• Dispersão de partículas

• Nível agregado

• Recuperação de partículas

• Fluorescência de fundo

• Ligação não específica

• Controle microbiano

• Integridade da embalagem

• Estabilidade de armazenamento

• Consistência lote a lote

Teste de tamanho de partícula

A caracterização granulométrica pode relatar:

• Diâmetro médio

• Diâmetro médio

• Faixa de tamanho

• Distribuição de tamanho

• Coeficiente de variação

• Microscopia ou caracterização instrumental

O método de medição deve ser indicado ao relatar os resultados.

Capacidade de ligação à biotina

A capacidade de ligação deve ser determinada com uma sonda biotinilada definida.

O resultado medido depende de:

• Tipo de sonda

• Tamanho molecular da sonda

• Número de grupos de biotina

• Pureza da sonda

• Condições de incubação

• Composição do buffer

• Método de detecção

• Base de cálculo

Os valores obtidos utilizando diferentes sondas ou métodos de teste podem não ser diretamente comparáveis.

Controle de qualidade por citometria de fluxo

Um procedimento de CQ de citometria de fluxo pode avaliar:

• Posição principal da população de partículas

• Porcentagem de microesferas fechadas

• Fluorescência do repórter após carregar uma sonda padrão

• Largura de distribuição de fluorescência

• Separação de fundo

• Repetibilidade

• População agregada

Use configurações de instrumento consistentes ao comparar lotes de produção.

Documentação Específica do Lote

A documentação disponível pode incluir:

• Certificado de Análise

• Especificação do produto

• Resultados de tamanho de partícula

• Resultados de conteúdo de sólidos

• Resultados de capacidade de ligação

• Ficha de dados de segurança

• Instruções de manuseio

• Recomendações de armazenamento

• Número do lote

• Data de produção

Os testes necessários e os critérios de aceitação devem ser acordados antes da fabricação em massa.

Fabricação em massa e personalização

fornece microesferas de estreptavidina SHBC para pesquisas laboratoriais, desenvolvimento piloto, produção repetida e compras em massa.

Avaliação de amostra de pesquisa

As amostras podem ser avaliadas para:

• Detecção de citometria de fluxo

• Dispersão de partículas

• Atividade de estreptavidina

• Carregamento de ligante biotinilado

• Ligação não específica

• Recuperação de partículas

• Viabilidade do ensaio

• Compatibilidade do instrumento

Desenvolvimento em escala piloto

Os lotes piloto podem suportar:

• Otimização de ensaio

• Verificação de capacidade de ligação

• Estudos de estabilidade

• Seleção de buffer

• Avaliação de embalagens

• Desenvolvimento de controle de qualidade

• Verificação do cliente

• Transferência de processo

Produção em massa

A fabricação em massa pode ser organizada após a confirmação dos requisitos técnicos e das especificações de liberação.

Forneça:

• Quantidade necessária

• Demanda anual esperada

• Tamanho de pacote preferido

• Aplicação pretendida

• Diâmetro de partícula necessário

• Conteúdo de sólidos necessário

• Capacidade de ligação necessária

• Tipo de ligante biotinilado

• Requisitos de buffer

• Restrições preservativas

• Requisitos de controle de qualidade

• Requisitos de documentação

• Cronograma de entrega

• Destino de entrega

Diâmetro de partícula personalizado

Tamanhos alternativos de partículas podem ser discutidos de acordo com aplicação e viabilidade técnica.

Carregamento personalizado de estreptavidina

Os níveis de revestimento de estreptavidina específicos do projeto ou as metas de capacidade de ligação podem ser avaliados.

Codificação de fluorescência personalizada

Microesferas de estreptavidina internamente fluorescentes ou codificadas podem ser discutidas para projetos de citometria de fluxo multiplex.

As opções potenciais podem incluir:

• Comprimentos de onda de excitação alternativos

• Comprimentos de onda de emissão alternativos

• Diferentes cores de fluorescência

• Vários níveis de intensidade de fluorescência

• Códigos de partículas específicos do cliente

Buffer e concentração personalizados

Concentrações alternativas de sólidos, formulações tampão, sistemas conservantes e formatos de embalagem podem ser avaliados.

Fornecimento OEM e de marca própria

Os formatos de cooperação podem incluir:

• Embalagem OEM

• Etiquetas específicas do cliente

• Fornecimento de marca própria

• Números de catálogo específicos do cliente

• Fornecimento de matéria-prima a granel

• Personalização de documentos técnicos

Recomendações de manuseio e armazenamento

Siga o rótulo do produto final, a ficha técnica e o Certificado de Análise específico do lote.

As recomendações gerais incluem:

• Armazenar nas condições refrigeradas especificadas.

• Não congele a menos que a estabilidade de congelamento-descongelamento tenha sido validada.

• Mantenha o recipiente bem fechado.

• Armazene o frasco na vertical.

• Misture bem antes da amostragem.

• Use pontas de pipeta limpas e tubos de baixa ligação.

• Evite a contaminação da suspensão original.

• Não deixe as microesferas secarem.

• Evite mudanças repetidas e desnecessárias de temperatura.

• Não devolva o material diluído ao recipiente original.

• Registre o número do lote do produto e a data de abertura.

Resuspensão

Como partículas de 5 µm podem assentar durante o armazenamento:

1. Deixe o frasco atingir a temperatura de manuseio recomendada.

2. Inverta ou gire suavemente o frasco.

3. Aplique vórtice controlado quando necessário.

4. Confirme se a suspensão é homogênea.

5. Inspecione quanto a agregados irreversíveis.

Evite congelar

O congelamento pode causar:

• Agregação de partículas

• Atividade reduzida de estreptavidina

• Mudanças na estabilidade da suspensão

• Recuperação reduzida de partículas

• Aumento do histórico do ensaio

Evite secar

Não deixe o pellet de microesferas secar durante a lavagem.

A secagem pode causar agregação irreversível e redução do desempenho funcional.

Proteja contra a biotina livre

Evite biotina livre durante a imobilização do ligante biotinilado.

Avalie a estabilidade do reagente preparado

Microesferas carregadas com ligante e bloqueadas podem ter estabilidade diferente da suspensão SAPS5UM-10 original.

Avalie o reagente preparado nas condições pretendidas de armazenamento, transporte e operação.

Perguntas frequentes

O que é SAPS5UM-10?

SAPS5UM-10 é uma suspensão de microesferas revestidas com estreptavidina de 5 µm fornecida com 1% de sólidos para capturar biomoléculas biotiniladas em citometria de fluxo e pesquisa de ensaios baseados em esferas.

Qual é a marca SHBC?

SHBC é a marca de microesferas e materiais de biotecnologia da Shanghai SanYu Biotechnology Co., Ltd.

Qual é o diâmetro nominal da partícula?

O diâmetro nominal da partícula é de 5 µm.

O diâmetro real medido e a distribuição do tamanho das partículas devem ser confirmados utilizando documentação específica do lote.

Qual é o conteúdo de sólidos?

SAPS5UM-10 é fornecido com 1% de sólidos.

As microesferas SAPS5UM-10 são magnéticas?

O produto não deve ser considerado magnético, a menos que as propriedades magnéticas sejam especificamente indicadas nas especificações técnicas.

Para separação magnética, selecione um produto descrito especificamente como esferas magnéticas de estreptavidina.

As microesferas são fluorescentes?

Não se deve presumir que o produto padrão contém um corante fluorescente interno, a menos que a fluorescência esteja especificamente listada nas especificações do produto.

A detecção por citometria de fluxo pode usar dispersão ou fluorescência de um repórter ligado.

Quais moléculas podem se ligar ao SAPS5UM-10?

A superfície da estreptavidina pode capturar anticorpos biotinilados, antígenos, proteínas, peptídeos, oligonucleotídeos, DNA, RNA, aptâmeros e outras moléculas contendo biotina.

Um anticorpo não modificado pode ligar-se diretamente?

Um anticorpo não modificado não se ligará especificamente através da interação estreptavidina-biotina, a menos que seja biotinilado ou ligado através de outro reagente compatível.

A ativação do EDC/NHS é necessária?

A ativação de EDC/NHS normalmente não é necessária ao carregar uma molécula biotinilada em microesferas revestidas com estreptavidina.

Qual é a capacidade de ligação da biotina?

A capacidade de encadernação deve ser confirmada usando a especificação do produto ou o Certificado de Análise específico do lote.

Não deve ser calculado apenas com base no conteúdo de sólidos.

O SAPS5UM-10 pode ser usado em citometria de fluxo?

Sim. O diâmetro de partícula de 5 µm é adequado para avaliação em ensaios de citometria de fluxo e pesquisas baseadas em partículas.

Um citômetro de fluxo convencional pode detectar microesferas de 5 µm?

Muitos citômetros de fluxo convencionais podem detectar microesferas de 5 µm usando configurações de dispersão adequadas.

O desempenho real depende da óptica do instrumento, lasers, detectores, configurações de disparo e buffer de amostra.

O SAPS5UM-10 pode ser usado para imunoensaios sanduíche?

Sim. Um anticorpo de captura biotinilado pode ser imobilizado na partícula, seguido pela captura do alvo e detecção com um anticorpo repórter fluorescente.

Pode ser usado para detecção de ácido nucleico?

Sim. Oligonucleotídeos biotinilados, DNA, RNA, produtos de PCR e aptâmeros podem ser avaliados quanto à imobilização e captura do alvo.

O SAPS5UM-10 pode ser usado em ensaios multiplex?

Sim, desde que a população SAPS5UM-10 possa ser distinguida das outras populações de microesferas.

Pode ser necessária codificação de fluorescência personalizada.

Como as microesferas devem ser lavadas?

O método de lavagem depende da composição das partículas, densidade, tampão, volume e recuperação necessária.

Centrifugação ou métodos baseados em membrana podem ser avaliados.

Por que a recuperação de microesferas é baixa?

As possíveis causas incluem:

• Força centrífuga insuficiente

• Tempo de centrifugação curto

• Perda durante a remoção do sobrenadante

• Adesão à superfície do tubo

• Método de separação incompatível

• Agregação de partículas

• Lavagem excessiva

Como a ligação não específica pode ser reduzida?

Otimize o reagente de bloqueio, concentração de ligante, concentração de repórter, condições de lavagem, nível de detergente, diluição da amostra e tempo de incubação.

Podem ser usados ​​tampões contendo biotina livre?

A biotina livre pode ocupar locais de ligação à estreptavidina e geralmente deve ser evitada durante a carga do ligante.

Por que as partículas assentam?

Partículas de tamanho micrométrico podem assentar devido ao seu tamanho e densidade.

Misture bem a suspensão antes de cada etapa de amostragem.

O SAPS5UM-10 deve ser diluído antes da citometria de fluxo?

Sim. Prepare uma diluição de trabalho de acordo com o número de partículas e a taxa de eventos necessários.

Uma série de diluições é recomendada durante o desenvolvimento do método.

As microesferas podem ser congeladas?

O congelamento geralmente não é recomendado, a menos que a estabilidade do congelamento-descongelamento tenha sido especificamente validada.

A concentração pode ser personalizada?

Concentrações alternativas de sólidos podem ser discutidas de acordo com os requisitos do projeto e viabilidade de fabricação.

A capacidade de ligação pode ser personalizada?

As metas de carga ou capacidade de ligação de estreptavidina específicas do projeto podem ser avaliadas.

Podem ser produzidas microesferas fluorescentes de estreptavidina?

Microesferas de estreptavidina fluorescentes ou codificadas podem ser discutidas para projetos qualificados de citometria de fluxo multiplex.

A produção em massa está disponível?

Sim. Shanghai SanYu Biotechnology Co., Ltd. oferece suporte a amostras, lotes piloto, pedidos repetidos, projetos OEM e fabricação em massa.

Quais informações são necessárias para uma cotação?

Forneça:

• Número de catálogo SAPS5UM-10

• Quantidade necessária

• Volume de compras anual esperado

• Tamanho de pacote preferido

• Aplicação pretendida

• Modelo de citômetro de fluxo

• Tipo de ligante biotinilado

• Capacidade de ligação necessária

• Quantidade necessária de microesferas por teste

• Restrições de buffer

• Restrições preservativas

• Requisitos de controle de qualidade

• Requisitos de documentação

• Destino de entrega

Solicite uma amostra ou cotação em massa

As microesferas de estreptavidina SHBC SAPS5UM-10 5µm fornecem uma plataforma de partículas flexível para imobilizar anticorpos biotinilados, proteínas, peptídeos, oligonucleotídeos, DNA, RNA, aptâmeros e outras biomoléculas marcadas com biotina.

O produto é adequado para:

• Ensaios de citometria de fluxo

• Imunoensaios sanduíche baseados em contas

• Ensaios de ligação competitiva

• Imobilização de anticorpos biotinilados

• Pesquisa de interação de proteínas

• Captura de ácido nucleico

• Ensaios de hibridização

• Estudos de ligação por afinidade

• Desenvolvimento de citometria de fluxo multiplex

• Fabricação de reagentes de pesquisa

SAPS5UM-10 fornece:

• Diâmetro nominal de partícula de 5 µm

• Superfície funcional com estreptavidina

• Suspensão de sólidos a 1%

• Compatibilidade com biomoléculas biotiniladas

• Fornecimento de amostra e lote piloto

• Capacidade de fabricação em massa

• Suporte OEM e desenvolvimento personalizado

Para avaliação de amostras ou compra a granel, forneça a aplicação pretendida, a quantidade necessária, o ligante biotinilado, a capacidade de ligação desejada, a configuração do citômetro de fluxo, os requisitos de embalagem e as especificações de controle de qualidade.

Nome do produto: Microesferas de estreptavidina de 5 µm
Número de catálogo: SAPS5UM-10
Marca: SHBC
Fabricante: Shanghai SanYu Biotechnology Co., Ltd.
Diâmetro nominal da partícula: 5 µm
Modificação de superfície: de estreptavidina :
Conteúdo de sólidos 1%
Aplicação primária: Citometria de fluxo e ensaio de grânulos
Capacidade de fornecimento de pesquisa: Amostras, lotes piloto e produção em massa
Uso pretendido: somente para uso em pesquisa. Não para uso diagnóstico ou terapêutico.