Microesferas de poliestireno de ponto quântico

I. Descrição das microesferas de poliestireno de ponto quântico

Microesferas de poliestireno de ponto quântico (HQD) são preparadas por polimerização em microemulsão de pontos quânticos de CdSe/ZnS de alto brilho e poliestireno. A superfície das microesferas é modificada com grupos funcionais carboxila para facilitar o acoplamento de anticorpos. A amplificação do sinal de fluorescência de pontos quânticos por meio do revestimento de nanoesferas pode melhorar significativamente a sensibilidade da detecção imunológica.

A sonda fluorescente tem as características de sinal de fluorescência estável, excelente estabilidade coloidal e alta biocompatibilidade, e é especialmente adequada para o desenvolvimento de reagentes de diagnóstico in vitro fluorescentes. Este produto também pode ser usado para medição de fluxo sanguíneo, biomarcadores, imagens in vivo e calibração de citômetros de fluxo.

As microesferas modificadas por carboxilação têm uma alta densidade de ácidos carboxílicos livres em sua superfície, tornando-as adequadas para acoplamento covalente de proteínas e outras biomoléculas contendo amina por meio de reagentes à base de imina solúveis em água, como a carbodiimida (EDAC).

II. Dados físicos

1. Material: Pontos quânticos revestidos com microesferas de poliestireno
2. Índice de refração: 1,59 @ 589 nm, 25 ℃
3. Densidade: 1,05g/cm3
4. Características: Cor fluorescente

III. Instruções de análise

1. Conteúdo sólido: 1% (10mg/ml)
2. Tamanho de partícula: 100nm
3. Uniformidade: CV<5%
4. Comprimento de onda de emissão: 610nm+10nm
5. Comprimento de onda de excitação: <580nm, 365nm-450nm é recomendado
6. Meio de dispersão: água desionizada e vestígios de surfactante
7. Estabilidade: 2 anos a partir da data de fábrica

IV. Uso de microesferas de poliestireno de ponto quântico

A superfície das nanoesferas de pontos quânticos da nossa empresa (HQD610-10) é rica em grupos funcionais carboxila, que podem ser acoplados covalentemente a biomoléculas contendo aminoácidos, como anticorpos, peptídeos, ácidos nucléicos, etc. as microesferas estão no ativador 1- (sob a ação do cloridrato de 3-dimetilaminopropil) -3-etilcarbodiimida (EDC), ele reage com grupos amino para formar ligações amida estáveis, fixando assim covalentemente biomoléculas na superfície das nanoesferas.

Precauções para uso:

○1 Agite no vórtex e misture os QDNBs antes de usar. Uma pequena quantidade de precipitação causada por repouso prolongado é normal e não afeta o uso do produto.

○2 Para obter um melhor efeito de acoplamento, a concentração de proteína deve ser de 0,5-4mg/mL, a concentração de ácido nucleico deve ser de 20-100 μM e não deve haver grupos amino livres no tampão. Em particular, tampões Tris, glicina, ácido acético e ácido cítrico não podem ser usados.

materiais necessários:

○1 nanoesfera de ponto quântico (10mg/mL).

○2 Tampão de reação (para ativação): pH 4-6

○3 Ativador: EDC·HCl.

○4 Solução de bloqueio: 1-2% BSA ou caseína.

○5 Solução de preservação (pH 7,0-7,5): ácido bórico 20-100 mM ou Tris, 0,9% NaCl, 0,5-1% BSA, 0,09% NaN3.

Esquema de acoplamento de referência

○1 Pegue cerca de 50 μl de suspensão de QDNBs, disperse-a em 450 μl de tampão de reação, centrifugue a 12.000-15.000 rpm por 10-30 min, remova o sobrenadante e disperse QDNBs em 500 μl de tampão de reação.

○2 Adicione 100-50 μl de agente de acoplamento EDC (10mM), misture à temperatura ambiente (25-37 graus) e incube por 0,5-1 h.

○3 Centrifugue a 2000-15000 rpm por 10-30 min para remover o excesso de agente de acoplamento, etc., depois disperse em 500 μl de tampão de reação e disperse com ultrassom;

○4 Em seguida, adicione cerca de 100 μg de anticorpo (a proporção de anticorpo para microesferas precisa ser otimizada), misture à temperatura ambiente (25-37 graus) e incube por 0,5-1 h.

○51 Centrifugar a 2.000-15.000 rpm por 10-30 minutos para remover anticorpos livres, etc.;

○6 Adicione 500 μl de solução de bloqueio, disperse com ultrassom (potência 10-20%) por cerca de 10 segundos, misture à temperatura ambiente (25-37 graus) e incube por 0,5-1 hora.

○7 Centrifugar, remover a solução de bloqueio e dispersar em 200 μl de solução de preservação para uso posterior.
Este protocolo é para referência apenas nos estágios iniciais da pesquisa. Os pesquisadores são solicitados a otimizar as condições experimentais específicas de acordo com seus próprios projetos.