Contas magnéticas de níquel

1. Visão geral das esferas magnéticas de níquel

As esferas magnéticas de níquel SHBC combinam microesferas magnéticas tradicionais e meios de cromatografia de níquel. As esferas magnéticas de níquel são uma nova geração de esferas magnéticas funcionais projetadas e desenvolvidas para a rápida separação de proteínas com marcadores de histidina. As esferas magnéticas são à base de agarose, que é eletricamente neutra, hidrofílica e possui boa biocompatibilidade, evitando adsorção inespecífica de proteínas devido à carga ou hidrofobicidade.

Em comparação com os meios tradicionais de cromatografia de níquel, as esferas magnéticas de níquel são usadas para separar e purificar proteínas com marcadores de histidina. Não há necessidade de realizar quaisquer operações na proteína bruta (os corpos de inclusão precisam ser desnaturados) e nenhum equipamento de cromatografia em coluna é necessário. É fácil de operar e tem melhor desempenho de custo.

2. Características do produto

Baixa adsorção não específica
Bom efeito de purificação para amostras de pequeno volume
Fácil de realizar experimentos de triagem e altamente reprodutível
Fácil de aumentar ou diminuir a escala de purificação de proteínas
Alta capacidade de carga de proteína e alta pureza de proteína após purificação

3. Âmbito de aplicação

Isolar ou purificar proteínas com marcadores de histidina

4.parâmetros do produto

5. Como usar (pode ser ajustado de acordo com a situação real)

Grânulos magnéticos ligam-se a proteínas

Coloque uma quantidade apropriada de esferas magnéticas em um tubo de centrífuga, lave-as três vezes com Binding Buffer e redisperse-as com Binding Buffer. Misture o líquido bacteriano quebrado e lisado com as esferas magnéticas e misture na batedeira por 30 minutos.

Lave contas magnéticas
Após 30 minutos, coloque o tubo de centrífuga num separador magnético para separar as esferas magnéticas e remover o sobrenadante para detecção. Adicione o tampão de lavagem às esferas magnéticas, vire-as várias vezes para ressuspender as esferas magnéticas, separe-as magneticamente e retire o tampão de lavagem para detecção.
Adicione tampão de lavagem para ressuspender as esferas magnéticas e transfira as esferas magnéticas para um novo tubo de centrífuga (para evitar contaminação por proteínas). Separação magnética, retire e mescle o tampão de lavagem.

Eluição da proteína alvo

Os usuários podem alterar o volume de eluição para ajustar a concentração da proteína alvo conforme necessário. Adicione o tampão de eluição, vire suavemente o tubo de centrífuga para suspender as esferas magnéticas e colete o eluato em um novo tubo de centrífuga, que é a proteína alvo purificada. Repita várias vezes para garantir a eluição completa da proteína alvo.

Regeneração de esferas magnéticas

Depois de usar esferas magnéticas três vezes, a capacidade pode ser significativamente reduzida e é recomendável regenerá-las. Se precisar regenerar esferas magnéticas, você pode fazer o seguinte:

a) Dispersar as esferas magnéticas em tampão fosfato (20 mM, pH 7,4) contendo EDTA 0,1 M, agitar à temperatura ambiente durante 10 minutos, descartar o sobrenadante por sucção magnética e repetir uma vez.

b) Lave várias vezes as esferas magnéticas com água de alta pureza para garantir que não haja EDTA na solução.

c) Lave as esferas magnéticas com solução de NaOH 0,5 M e NaCl 2 M, agite em temperatura ambiente por 5 minutos, absorva magneticamente, descarte o sobrenadante e lave as esferas magnéticas com água de alta pureza até que a solução de lavagem se torne neutra.

d) Use solução de NiSO4 0,1 M para dispersar as esferas magnéticas e agite em temperatura ambiente por 10 minutos. Descarte o sobrenadante por sucção magnética e lave as esferas magnéticas várias vezes com água de alta pureza até que não haja íons Ni na solução. Armazene esferas magnéticas em etanol 20%.

6. Coisas a serem observadas

As contas magnéticas têm alta densidade e afundarão facilmente se deixadas em pé por muito tempo. Portanto, agite bem antes de usar para obter uma suspensão uniforme de esferas magnéticas.
Apêndice (Tabela de tolerância a solventes)