Microesferas de fluorescência resolvidas no tempo

1. Introdução do produto
As microesferas de fluorescência resolvidas no tempo são projetadas para reagentes de imunoensaio de fluxo lateral e são feitas de corantes fluorescentes resolvidos no tempo copolimerizados com estireno. As microesferas de fluorescência resolvidas no tempo têm as características de grande deslocamento de stokes, nenhum efeito de extinção interno durante a agregação, forte sinal de detecção, corante fluorescente envolto em microesferas, não facilmente afetado pelo ambiente externo e fluorescência estável. É um marcador ideal para cromatografia quantitativa de imunofluorescência.

Espectroscopia de microesferas de fluorescência resolvida no tempo

2. Parâmetros da microesfera
1. Ingredientes: Microesferas de poliestireno modificadas modificadas com complexos fluorescentes de elemento de terras raras európio
2. Conteúdo sólido: 1% (1ml de suspensão contém 10mg de microesferas)
3. Tamanho médio de partícula: 200 nm
4. Uniformidade de tamanho de partícula: CV<5%
5. Grupos funcionais: grupo carboxila, grupo sulfato, etc.
6. Conteúdo de carboxila: 200±10μmol/g
7. Propriedades de fluorescência: comprimento de onda de excitação: 365 nm, comprimento de onda de emissão: 610 nm
8. Vida útil da fluorescência: 720μs
9. Densidade: 1,05g/cm3
10. Índice de refração: 1,59 (589 nm, 25 ℃)
11. Aparência: emulsão branca
Três: preservação da microesfera
Condições de armazenamento: Armazenar entre 2-8°C, protegido da luz, lacrado e não pode ser congelado e descongelado repetidamente. 4. Como usar
(1) Etapas de ativação: 1. Dispersar as microesferas ultrassonicamente por cerca de 2 minutos e depois agitá-las manualmente;
2. Em um tubo EP de 2mL, adicione 100μL de microesferas (conteúdo sólido 1%), em seguida adicione 900μL de água ultrapura (ou tampão MES) e reserve;
3. Preparação:
Solução de etanol N-hidroxisuccinimida (NHS) 10mg/ml Uma solução
10mg/ml solução de etanol B de cloridrato de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida (EDC)
Nota: NHS e EDC são fáceis de absorver umidade. Estes dois reagentes precisam ser reaquecidos por mais de 30 minutos antes da pesagem.
4. Adicionar 5 μl de solução A à suspensão de microesferas e misturar bem, em seguida adicionar 5 μl de solução B, misturar novamente e reagir em temperatura ambiente por 15 a 30 minutos;
5. Centrifugar a 14.000r/min por 15min, remover o sobrenadante, adicionar 1ml de água ultrapura (ou tampão de acoplamento de anticorpos) e depois dispersar uniformemente por ultrassom.
Nota: Certifique-se de dispersar completamente, caso contrário as microesferas após a reticulação do anticorpo aglomerarão-se facilmente e a tira funcionará mal.
(2) Reticulação de anticorpos
Preste atenção especial se o anticorpo usado para reticulação precipita. Se ocorrer precipitação, o anticorpo necessita de ser centrifugado ou filtrado, caso contrário as microesferas reticuladas irão aglomerar-se. Os anticorpos que foram filtrados ou centrifugados precisam ser redeterminados quanto à concentração de anticorpos.
A quantidade de anticorpo reticulado na superfície das microesferas é: anticorpo/microesfera = 10 ~ 50 μg/mg, e a quantidade ideal de marcação é geralmente 20 μg/mg.
Etapas de reticulação de anticorpos:
1. Pegue 1ml da suspensão de microesferas ativadas acima, disperse-a por ultrassom e adicione o anticorpo gota a gota enquanto agita. A dosagem ideal de anticorpos é 20ug;
Nota: O tampão de reticulação de anticorpos recomendado é o tampão de ácido bórico, 0,02 mol/L, pH=8,0. Cada anticorpo tem seu tampão de reticulação ideal (tipo, concentração, pH), que você precisa explorar sozinho.
2. Misture à temperatura ambiente por 1 hora e depois teste o desempenho das microesferas após acoplar o anticorpo;
Nota: As tiras de teste revestidas com IgG anti-camundongo de cabra podem ser usadas para testar a fluidez e o desempenho de reconhecimento de anticorpos das microesferas após a reticulação do anticorpo.
3. Adicionar BSA (concentração final de 0,5%) para bloqueio por 1 hora;
4. Centrifugar a 13.000r/min por 15min;
5. Adicione 1ml de solução de preservação às microesferas centrifugadas, misture bem e guarde na geladeira, ao abrigo da luz, até o uso.
Nota: Como os anticorpos de cada projeto são diferentes, você mesmo precisa explorar a melhor solução de preservação. A fórmula básica da solução de preservação é: sacarose 10% (p/v), 0,01mol/L PB pHPB pH=7,4.