As esferas magn\u00e9ticas de n\u00edquel SHBC combinam microesferas magn\u00e9ticas tradicionais e meios de cromatografia de n\u00edquel. As esferas magn\u00e9ticas de n\u00edquel s\u00e3o uma nova gera\u00e7\u00e3o de esferas magn\u00e9ticas funcionais projetadas e desenvolvidas para a r\u00e1pida separa\u00e7\u00e3o de prote\u00ednas com marcadores de histidina. As esferas magn\u00e9ticas s\u00e3o \u00e0 base de agarose, que \u00e9 eletricamente neutra, hidrof\u00edlica e possui boa biocompatibilidade, evitando adsor\u00e7\u00e3o inespec\u00edfica de prote\u00ednas devido \u00e0 carga ou hidrofobicidade.<\/p>\n
Em compara\u00e7\u00e3o com os meios tradicionais de cromatografia de n\u00edquel, as esferas magn\u00e9ticas de n\u00edquel s\u00e3o usadas para separar e purificar prote\u00ednas com marcadores de histidina. N\u00e3o h\u00e1 necessidade de realizar quaisquer opera\u00e7\u00f5es na prote\u00edna bruta (os corpos de inclus\u00e3o precisam ser desnaturados) e nenhum equipamento de cromatografia em coluna \u00e9 necess\u00e1rio. \u00c9 f\u00e1cil de operar e tem melhor desempenho de custo.<\/p>\n
\uf06cBaixa adsor\u00e7\u00e3o n\u00e3o espec\u00edfica
\n\uf06cBom efeito de purifica\u00e7\u00e3o para amostras de pequeno volume
\n\uf06cF\u00e1cil de realizar experimentos de triagem e altamente reprodut\u00edvel
\n\uf06cF\u00e1cil de aumentar ou diminuir a escala de purifica\u00e7\u00e3o de prote\u00ednas
\n\uf06cAlta capacidade de carga de prote\u00edna e alta pureza de prote\u00edna ap\u00f3s purifica\u00e7\u00e3o<\/p>\n
\uf06cIsolar ou purificar prote\u00ednas com marcadores de histidina<\/p>\n
| Tamanho da part\u00edcula<\/td>\n | 1um, 3um, 5um, 10um, 20um, 30um, 40um, 50um<\/td>\n<\/tr>\n | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Matriz<\/td>\n | Gr\u00e2nulos magn\u00e9ticos de pol\u00edmero de matriz<\/td>\n<\/tr>\n | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Ligando<\/td>\n | IDA-Ni<\/td>\n<\/tr>\n | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Capacidade de carregamento<\/td>\n | \u226540 mg de prote\u00edna marcada com His\/mL (volume de sedimenta\u00e7\u00e3o de esfera magn\u00e9tica)<\/td>\n<\/tr>\n | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Usar temperatura<\/td>\n | Usar temperatura temperatura ambiente<\/td>\n<\/tr>\n | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Condi\u00e7\u00f5es de armazenamento<\/td>\n | 2-8\u00b0C, armazenado em etanol 20%<\/td>\n<\/tr>\n | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Validade<\/td>\n | 5 anos<\/td>\n<\/tr>\n<\/tbody>\n<\/table>\n5. Como usar (pode ser ajustado de acordo com a situa\u00e7\u00e3o real)<\/h2>\n\uf06cGr\u00e2nulos magn\u00e9ticos ligam-se a prote\u00ednas<\/p>\n Coloque uma quantidade apropriada de esferas magn\u00e9ticas em um tubo de centr\u00edfuga, lave-as tr\u00eas vezes com Binding Buffer e redisperse-as com Binding Buffer. Misture o l\u00edquido bacteriano quebrado e lisado com as esferas magn\u00e9ticas e misture na batedeira por 30 minutos.<\/p>\n \uf06cLave contas magn\u00e9ticas \uf06cElui\u00e7\u00e3o da prote\u00edna alvo<\/p>\n Os usu\u00e1rios podem alterar o volume de elui\u00e7\u00e3o para ajustar a concentra\u00e7\u00e3o da prote\u00edna alvo conforme necess\u00e1rio. Adicione o tamp\u00e3o de elui\u00e7\u00e3o, vire suavemente o tubo de centr\u00edfuga para suspender as esferas magn\u00e9ticas e colete o eluato em um novo tubo de centr\u00edfuga, que \u00e9 a prote\u00edna alvo purificada. Repita v\u00e1rias vezes para garantir a elui\u00e7\u00e3o completa da prote\u00edna alvo.<\/p>\n \uf06cRegenera\u00e7\u00e3o de esferas magn\u00e9ticas<\/p>\n Depois de usar esferas magn\u00e9ticas tr\u00eas vezes, a capacidade pode ser significativamente reduzida e \u00e9 recomend\u00e1vel regener\u00e1-las. Se precisar regenerar esferas magn\u00e9ticas, voc\u00ea pode fazer o seguinte:<\/p>\n a) Dispersar as esferas magn\u00e9ticas em tamp\u00e3o fosfato (20 mM, pH 7,4) contendo EDTA 0,1 M, agitar \u00e0 temperatura ambiente durante 10 minutos, descartar o sobrenadante por suc\u00e7\u00e3o magn\u00e9tica e repetir uma vez.<\/p>\n b) Lave v\u00e1rias vezes as esferas magn\u00e9ticas com \u00e1gua de alta pureza para garantir que n\u00e3o haja EDTA na solu\u00e7\u00e3o.<\/p>\n c) Lave as esferas magn\u00e9ticas com solu\u00e7\u00e3o de NaOH 0,5 M e NaCl 2 M, agite em temperatura ambiente por 5 minutos, absorva magneticamente, descarte o sobrenadante e lave as esferas magn\u00e9ticas com \u00e1gua de alta pureza at\u00e9 que a solu\u00e7\u00e3o de lavagem se torne neutra.<\/p>\n d) Use solu\u00e7\u00e3o de NiSO4 0,1 M para dispersar as esferas magn\u00e9ticas e agite em temperatura ambiente por 10 minutos. Descarte o sobrenadante por suc\u00e7\u00e3o magn\u00e9tica e lave as esferas magn\u00e9ticas v\u00e1rias vezes com \u00e1gua de alta pureza at\u00e9 que n\u00e3o haja \u00edons Ni na solu\u00e7\u00e3o. Armazene esferas magn\u00e9ticas em etanol 20%.<\/p>\n 6. Coisas a serem observadas<\/h2>\n\uf06cAs contas magn\u00e9ticas t\u00eam alta densidade e afundar\u00e3o facilmente se deixadas em p\u00e9 por muito tempo. Portanto, agite bem antes de usar para obter uma suspens\u00e3o uniforme de esferas magn\u00e9ticas.
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