5um Стрептавидиновые микросферы SA PS 5UM-10 1%

5 µm Стрептавидиновые микросферы для проточной цитометрии

SHBC SA PS 5UM-10 Стрептавидиновые микросферы представляют собой 5 µm поверхностно-функционализированных микросфер, разработанных для иммобилизации биотинилированных антител, антигенов, белков, пептидов, олигонуклеотидов, DNA , RNA , аптамеров и других меченных биотином биомолекул.

Продукт поставляется в виде 1%-ной суспензии твердых веществ и предназначен для анализа методом проточной цитометрии, разработки иммуноанализа на основе частиц, исследования аффинного связывания, захвата нуклеиновых кислот, анализа взаимодействия биомолекул и производства исследовательских реагентов.

Шанхайская биотехнологическая компания SanYu, L td. поддерживает оценку лабораторных образцов, пилотные разработки, повторное производство, проекты OEM и оптовые поставки для биотехнологических компаний, научно-исследовательских институтов, университетов, лабораторий проточной цитометрии, производителей приборов и организаций, занимающихся разработкой реагентов.

Быстрый ответ о продукте

SA PS 5UM-10 представляет собой суспензию микросфер, покрытых 5 µm стрептавидином, с содержанием твердых веществ 1%. Функциональная стрептавидин поверхность захватывает биотинилированные биомолекулы и может использоваться для разработки анализов проточной цитометрии, сэндвич-иммуноанализов, систем аффинного захвата, анализов гибридизации нуклеиновых кислот, исследований взаимодействия белков и исследовательских платформ на основе мультиплексных частиц.

Основные характеристики продукта

• Название продукта: 5 µm Стрептавидиновые микросферы

• Каталожный номер: СА PS 5УМ-10

• Бренд: SHBC

• Производитель: Шанхайская биотехнологическая компания SanYu, L td.

• Номинальный диаметр частиц: 5 µm

• Модификация поверхности: Стрептавидин

• Содержание твердых веществ: 1%

• Принцип связывания: сродство стрептавидина к биотину.

• Физическая форма: Водная суспензия микросфер.

• Основное применение: исследование методом проточной цитометрии.

• Возможности поставок: образцы, пилотные партии и массовое производство.

• Кастомизация: Доступна в зависимости от технической возможности.

• Использование по назначению: только для исследовательских целей.

Что такое SA PS 5UM-10 Стрептавидиновые микросферы ?

SA PS 5UM-10 состоит из 5 микросфер µm с иммобилизованным на поверхности частиц стрептавидином.

Микросферы, покрытые стрептавидином, представляют собой удобную твердую фазу для захвата биотинилированных молекул. Исследователи могут присоединить выбранное биотинилированное антитело, белок, пептид, зонд нуклеиновой кислоты, аптамер, рецептор или другой лиганд, не выполняя прямую ковалентную активацию поверхности микросферы.

После иммобилизации лиганда подготовленные микросферы можно использовать для захвата целевых молекул из образца. Затем связывание с мишенью можно обнаружить с помощью флуоресцентного антитела, флуоресцентного зонда, вторичного реагента или другого совместимого репортера и проанализировать с помощью проточной цитометрии.

Потенциальные биотинилированные лиганды включают:

• Моноклональные и поликлональные антитела

• Рекомбинантные антитела

• Фрагменты антител

• Антигены

• Рекомбинантные белки

• Пептиды

• Ферменты

• Рецепторы

• L эктины

• Олигонуклеотидные зонды

• DNA зондов

• RNA зондов

• PCR товаров

• Аптамеры

• Биотинилированные малые молекулы

Диаметр частиц 5 µm обеспечивает популяцию микронного размера, которую обычно можно отличить от фона мелких частиц на многих обычных проточных цитометрах.

По сравнению с более мелкими частицами, 5-микросферы µm могут обеспечить более легкое обнаружение рассеяния, более удобное гейтирование и более практичное извлечение частиц во время стирки. Однако количество частиц на единицу массы, поведение осаждения, связывающая способность и кинетика анализа отличаются от таковых для микросфер меньшего размера, и их следует оценивать для предполагаемого применения.

СА PS 5УМ-10 поставляется в качестве исследовательского сырья. Он не является автоматически готовым диагностическим реагентом, сертифицированным калибровочным шариком, эталоном абсолютного счета, флуоресцентным кодирующим шариком или продуктом магнитной сепарации.

СА PS 5УМ-10 Технические характеристики

Следующие параметры должны быть подтверждены с использованием окончательной спецификации продукта или сертификата анализа для конкретной партии:

• Частица материал

• Измеренный средний диаметр частиц

• Частица -диапазон размеров

• Частица -распределение по размеру

• Частица -размерный коэффициент вариации

• Уровень покрытия стрептавидина

• Биотинсвязывающая способность

• Частица числовая концентрация

• Подвесной буфер

• Буфер pH

• Стабилизатор или поверхностно-активное вещество

• консервант

• Размер упаковки

• Срок годности

• Условия хранения

Связывающая способность должна быть указана с указанием испытательного зонда, метода тестирования, основы расчета и результата для конкретной партии.

Концентрация твердых веществ в 1% сама по себе не может определить концентрацию частиц или доступную биотинсвязывающую способность.

Как работает связывание стрептавидина и биотина

Стрептавидин – биотинсвязывающий белок. При смешивании биотинилированного лиганда с SA PS 5UM-10 биотиновая группа связывается с доступными участками стрептавидина на поверхности микросфер.

Базовую структуру можно представить как:

Поверхность микросферы – Стрептавидин – Биотин – Захват L иганда

Для сэндвич-иммуноанализа структура может быть:

Микросфера – Стрептавидин – Биотинилированное захватывающее антитело – Целевой антиген – Флуоресцентное детектирующее антитело

Затем флуоресценцию, связанную с каждой микросферой, можно измерить с помощью проточной цитометрии.

Преимущества иммобилизации стрептавидин-биотин

• Для загрузки лиганда активация EDC/NHS обычно не требуется.

• Одну микросферную платформу можно использовать с разными биотинилированными лигандами.

• Антитела, белки, пептиды и зонды нуклеиновых кислот могут быть иммобилизованы.

• Загрузку иганда L можно осуществлять в мягких водных условиях.

• Молекулы захвата можно изменить без изменения конструкции базовой частицы.

• Система поддерживает разработку модульных анализов.

• Платформу можно использовать в одноцелевых и множественных исследованиях.

• Иммобилизованные лиганды можно комбинировать с различными флуоресцентными репортерами.

Конечная производительность зависит от:

• Стрептавидиновая активность

• Плотность стрептавидинового покрытия

• Уровень биотинилирования

• Доступность биотина

• Размер молекулы L иганда

• Длина проставки

• Поверхностная скученность

• Буферный состав

• Условия инкубации

• Целевая концентрация

• Пример матрицы

Свободный биотин в растворе лиганда, образце, буфере или блокирующем составе может занимать доступные сайты связывания стрептавидина и уменьшать иммобилизацию лиганда.

Почему стоит выбрать 5 µm Стрептавидиновые микросферы ?

Четкое обнаружение на обычных проточных цитометрах

Диаметр частиц 5 µm может обеспечить четкую популяцию прямого и бокового рассеяния на многих обычных проточных цитометрах.

Это может облегчить выполнение следующих действий:

• L определите популяцию микросфер

• Установите стабильные ворота рассеяния

• Отделение микросфер от мелкого мусора

• Подтвердить восстановление частиц

• Определите возможные агрегаты

• Оценка дублетов

• Измерьте репортерную флуоресценцию

• Создавайте повторяемые шаблоны сбора данных

Фактическое обнаружение зависит от материала частиц, показателя преломления, оптики проточного цитометра, настроек детектора, выбора триггера и буфера для образца.

Практичный размер для анализов на основе шариков

Диапазон размеров 5 µm подходит для многих рабочих процессов исследований в области проточной цитометрии на основе частиц.

Частицы обеспечивают физическую поверхность для иммобилизации захватывающего лиганда, оставаясь при этом достаточно маленькими для реакций на основе суспензии и анализа отдельных частиц.

Более простое восстановление Частица

Частицы микронного размера может быть легче извлечь с помощью проверенного центрифугирования или мембранного метода, чем частицы меньшего размера.

Восстановление Частица по-прежнему зависит от:

• Частица плотность

• Частица материал

• Центробежная сила

• Время центрифугирования

• Объем обработки

• Геометрия трубы

• Поверхность трубки

• Буферная вязкость

• Концентрация ПАВ

• Количество этапов стирки

Метод разделения должен быть проверен экспериментально.

Подходит для исследований диапазона размеров клеток

Микросферу 5 µm можно оценить как синтетическую частицу микронного размера при клеточном анализе и исследовании взаимодействия частиц.

Однако синтетические микросферы не воспроизводят полные физические или биологические свойства клеток, включая деформируемость, плотность, состав мембран, подвижность рецепторов или биологическую активность.

Гибкий выбор L иганда

Одну и ту же базовую частицу SA PS 5UM-10 можно комбинировать с различными биотинилированными захватывающими молекулами, что позволяет проводить несколько анализов на одной платформе частиц.

Поддерживает масштабирование исследований и производства

Продукт может поддерживать:

• Первоначальное технико-экономическое обоснование

• Оптимизация анализа

• Опытно-серийное производство

• Тестирование стабильности

• Оценка упаковки

• Сравнение партий с партиями

• OEM разработка

• L долгосрочная оптовая поставка

Ключевые особенности и преимущества

5 µm Номинальный Частица диаметр

Частицы микронного размера подходят для гейтирования проточной цитометрии, исследований связывания на основе частиц, разработки иммуноанализа и исследований аффинного захвата.

Стрептавидин-функциональная поверхность

Поверхность захватывает биотинилированные антитела, белки, пептиды, олигонуклеотиды, DNA , RNA , аптамеры и другие биотинсодержащие молекулы.

1% суспензия твердых веществ

SA PS 5UM-10 поставляется с содержанием твердых веществ 1% и может быть разбавлен в соответствии с необходимым количеством частиц, объемом анализа, связывающей способностью и частотой событий проточной цитометрии.

Простая иммобилизация иганда L

Биотинилированные лиганды могут быть загружены конечным пользователем без прямой активации карбодиимида.

Модульная аналитическая платформа

Исследователи могут использовать одну и ту же платформу частиц с разными биотинилированными молекулами захвата.

Подходит для обнаружения флуоресцентных репортеров

Частицы можно комбинировать с флуоресцентными антителами, зондами, вторичными реагентами или другими репортерами для анализа проточной цитометрии.

Подходит для одиночных и мультиплексных исследований.

SA PS 5UM-10 можно оценить как одну популяцию частиц в системе мультиплексной проточной цитометрии.

Возможность массового производства

SHBC поддерживает образцы, пилотные партии, повторные заказы, индивидуальное производство и оптовые поставки.

Индивидуальные варианты разработки

Диаметр Частица , концентрация, загрузка стрептавидина, связывающая способность, буфер, консервант, флуоресцентное кодирование, упаковка и характеристики выпуска могут обсуждаться для соответствующих проектов.

Применение в исследованиях проточной цитометрии

Сэндвич-иммуноанализы на основе шариков

SA PS 5UM-10 можно использовать в качестве твердой фазы в сэндвич-иммуноанализе с помощью проточной цитометрии.

Типичный рабочий процесс включает в себя:

1. Иммобилизация биотинилированного захватывающего антитела.

2. Блокировка оставшейся поверхности частиц.

3. Инкубация частиц с образцом.

4. Захват целевого аналита.

5. Добавление антитела для флуоресцентной детекции.

6. Удаление несвязавшихся реагентов.

7. Измерение флуоресценции, связанной с микросферами, методом проточной цитометрии.

Потенциальные цели исследования включают в себя:

• Цитокины

• Гормоны

• Факторы роста

• Антитела

• Антигены

• Ферменты

• Биомаркеры

• Белки, ассоциированные с патогеном

• Энвиро nm энтальные аналиты

• Целевые показатели безопасности пищевых продуктов

• Исследовательские соединения

Разработка конкурентных методов анализа

SA PS 5UM-10 также может быть оценен в форматах конкурентного связывания.

Конкурентные анализы могут рассматриваться для:

• Малые молекулы

• Гаптены

• Пептиды

• Наркотики

• Токсины

• Гормоны

• Мишени с ограниченными сайтами связывания

Взаимосвязь между целевой концентрацией и сигналом флуоресценции зависит от окончательного дизайна анализа.

Иммобилизация биотинилированных антител

Биотинилированные антитела могут быть присоединены к SA PS 5UM-10 для:

• Обнаружение антигена

• Скрининг антител

• Скрининг гибридом

• Биомаркерное исследование

• Сравнение захватывающих антител

• Технико-экономическое обоснование анализа

• Оценка специфичности

• Тестирование перекрестной реактивности

• Сравнение сходства

Исследование взаимодействия белков и пептидов

Биотинилированные белки и пептиды могут быть иммобилизованы для:

• Исследования взаимодействия антитело-антиген

• Связывание белок-белок

• Рецепторно-лигандные исследования

• Картирование эпитопов

• Исследования взаимодействия ферментов

• Скрининг ингибиторов

• Оценка кандидатов на лекарственные средства

• Сравнение аффинности связывания

Захват нуклеиновой кислоты

Биотинилированные олигонуклеотиды, продукты DNA , RNA , PCR и аптамеры могут быть присоединены к SA PS 5UM-10.

Потенциальные исследовательские приложения включают в себя:

• Захват последовательности

• Разработка анализа гибридизации

• PCR -обнаружение продукта

• Генотипирование исследований

• Исследования по обнаружению мутаций

• Анализы на основе аптамеров

• DNA – исследования взаимодействия белков

• RNA -связывающие исследования

• Разработка молекулярного анализа

Исследование клеточного связывания

При покрытии подходящим биотинилированным антителом, рецептором, лигандом или лектином частицы можно оценить на предмет связывания с клетками или мишенями на клеточной поверхности.

Важные параметры включают в себя:

• Плотность захватывающего лиганда

• Соотношение микросфер и клеток

• Концентрация клеток

• Температура инкубации

• Время инкубации

• Метод смешивания

• Условия стирки

• Жизнеспособность клеток

• Неспецифическое прикрепление частиц

Мультиплексная проточная цитометрия

Различные популяции микросфер потенциально можно различить, используя:

• Частица диаметр

• Цвет внутренней флуоресценции

• Интенсивность внутренней флуоресценции

• Видимый цвет частиц

• Захват лиганда

• Репортерная флуоресценция

Для мультиплексных исследований каждая популяция частиц должна оставаться различимой после загрузки лиганда, блокирования, инкубации образца, репортерного окрашивания, промывки, хранения и получения данных проточной цитометрии.

Захват и скрининг сходства

SA PS 5UM-10 также может быть оценен в:

• Анализы аффинного связывания

• L скрининг игандов

• Скрининг антител

• Высокопроизводительные исследования

• Биосенсоры на основе Частица

• Микрофлюидные анализы

• Исследования по обогащению биомолекул

• Анализ частиц на основе визуализации

Совместимые биотинилированные биомолекулы

Биотинилированные антитела

Совместимые форматы могут включать:

• Полноразмерный IgG

• IgM

• Потрясающие фрагменты

• F(ab')₂ фрагменты

• Рекомбинантные антитела

• Одноцепочечные вариабельные фрагменты

• Однодоменные антитела

• Другие форматы инженерных антител

Активность антител после иммобилизации зависит от метода биотинилирования, количества групп биотина, местоположения биотина, конструкции спейсера и стабильности белка.

Биотинилированные белки

Возможные примеры включают в себя:

• Антигены

• Рекомбинантные белки

• Ферменты

• Цитокины

• Факторы роста

• Рецепторы

• L эктины

• Слитые белки

• Связывающие белки

Биотинилированные пептиды

Потенциальное использование включает в себя:

• Картирование эпитопов

• Скрининг антител

• Исследования связывания рецепторов

• Исследование ферментов

• Анализы на наркотики

• Исследования взаимодействия белков

Подходящий спейсер между пептидом и биотином может улучшить доступность.

Биотинилированные нуклеиновые кислоты

Совместимые форматы могут включать:

• Одноцепочечный DNA

• Двухцепочечный DNA

• RNA

• Олигонуклеотидные зонды

• PCR ампликонов

• Аптамеры

• Модифицированные зонды нуклеиновой кислоты

• Захват последовательностей

Биотинилированные малые молекулы

Небольшие биотинилированные соединения могут присоединяться, если их биотиновая группа остается доступной для поверхности стрептавидина.

При разработке анализа следует учитывать длину спейсера и ориентацию молекул.

Рекомендуемый протокол загрузки биотинилированного L иганда L

Следующая процедура является общей отправной точкой. Конечные условия должны быть оптимизированы для конкретной биомолекулы и применения.

1. Ресуспендировать SA PS 5UM-10.

Дайте суспензии достичь рекомендуемой температуры обращения.

Смешайте осторожным переворачиванием, вращением или контролируемым встряхиванием до получения однородной массы.

Поскольку 5 частиц µm могут оседать во время хранения, перемешивайте суспензию перед каждым этапом отбора проб.

Избегайте чрезмерного пенообразования.

2. Рассчитайте необходимое количество микросфер.

Определите необходимую сумму согласно:

• Количество анализов

• Количество микросфер на тест

• Требуемое количество событий проточной цитометрии

• Ожидаемая целевая концентрация

• Объем анализа

• L специфическая связывающая способность

• Количество этапов стирки

• Ожидаемые потери при обработке

Не оценивайте лигандную нагрузку только по содержанию твердых веществ.

3. Перенесите Микросферы

Перенесите необходимое количество в чистую пробирку с низким содержанием связующих или в технологический сосуд.

Используйте чистые наконечники для пипеток и избегайте загрязнения оригинального контейнера.

4. Промойте Частицы

Промойте микросферы буфером, совместимым со стрептавидином и выбранным биотинилированным лигандом.

Избегайте буферов, содержащих свободный биотин, во время загрузки лиганда.

Возможные методы восстановления включают в себя:

• Центрифугирование

• Мембранная фильтрация

• Тангенциальная фильтрация

• Другие проверенные методы разделения твердой и жидкой фаз.

Подходящие условия следует устанавливать экспериментально.

5. Подготовьте биотинилированный иганд L

Разбавьте биотинилированное антитело, белок, пептид или нуклеиновую кислоту в выбранном буфере для связывания.

Обзор:

• L концентрация иганда

• Уровень биотинилирования

• Молекулярная чистота

• Совокупный уровень

• Бесплатное содержание биотина

• Буферные добавки

• Стабильность белка

• Стабильность нуклеиновой кислоты

6. Добавьте иганд L

Объедините промытые микросферы с биотинилированным лигандом.

Поддерживайте осторожное перемешивание, чтобы частицы оставались равномерно взвешенными.

Избегайте условий смешивания, которые вызывают чрезмерное пенообразование, агрегацию частиц или денатурацию биомолекул.

7. Оптимизируйте загрузку L и L .

Оценивать:

• Концентрация микросфер

• L концентрация иганда

• L соотношение иганда и частицы

• Время инкубации

• Температура инкубации

• Буфер pH

• Концентрация соли

• Скорость смешивания

• Объем реакции

Максимальная загрузка лиганда не всегда обеспечивает наилучшие результаты анализа.

Чрезмерная поверхностная нагрузка может увеличить стерическую скученность и снизить доступность мишени.

8. Удалите несвязанный иганд L .

Отделите и промойте частицы, чтобы удалить несвязанные биотинилированные молекулы.

Недостаточная промывка может увеличить фон, а чрезмерная промывка может снизить восстановление микросфер.

9. Заблокируйте Микросферы

Инкубируйте частицы, нагруженные лигандами, с совместимым блокирующим реагентом.

К потенциальным блокаторам относятся:

• бычий сывороточный альбумин

• Казеин

• Рыбный желатин

• Неиммунный иммуноглобулин

• Синтетические блокирующие полимеры

• Коммерческие буферы для блокировки микросфер

Эффективность блокировки следует оценивать с использованием положительных и отрицательных образцов.

10. Ресуспендируйте подготовленный Микросферы

Ресуспендируйте покрытые и заблокированные частицы в подходящем буфере для анализа или хранения.

Оценивать:

• Частица дисперсия

• L задержка иганда

• Связующая деятельность

• Неспецифическое связывание

• Частица восстановление

• Краткосрочная стабильность

• L долгосрочная стабильность

• Микробная стабильность

Рабочий процесс анализа шариками для проточной цитометрии

1. Подготовьте захват Микросферы

L oad SA PS 5UM-10 с выбранной биотинилированной захватывающей молекулой.

Перед тестированием образцов промойте и заблокируйте частицы.

2. Подготовьте элементы управления

Рекомендуемые меры контроля могут включать:

• Бланк буфера для сбора данных

• Стрептавидиновые микросферы без лиганда захвата

• L микросферы, нагруженные игандом, без образца

• Отрицательный образец

• Положительный образец

• Контроль только для репортеров

• Изотипический контроль

• Нерелевантный контроль биотинилированных лигандов

• Одноцветные элементы управления для многоцветных экспериментов

3. Добавьте образец

Объедините подготовленные микросферы с исследуемым образцом.

Оптимизировать:

• Объем образца

• Разбавление образца

• Концентрация микросфер

• Целевой диапазон концентрации

• Время инкубации

• Температура инкубации

• Метод смешивания

• Пример матрицы

4. Промойте Микросферы

Удалите несвязанные компоненты образца, сохраняя при этом приемлемое восстановление микросфер.

Во время разработки метода записывайте количество, объем и состав стадий промывки.

5. Добавьте флуоресцентный репортер

Добавьте антитело для флуоресцентного обнаружения, вторичное антитело, зонд или другой репортер.

Выбранный флуорофор должен быть совместим с конфигурацией лазера и детектора предполагаемого проточного цитометра.

6. Инкубируйте и промойте

Оптимизируйте концентрацию репортера и время инкубации.

Удалите несвязанный репортер, чтобы уменьшить фоновую флуоресценцию.

7. Ресуспендировать для сбора

Ресуспендируйте конечные частицы в чистом буфере для сбора данных с низким фоном.

Смешайте непосредственно перед тестированием проточной цитометрии.

8. Сбор данных

Соберите достаточно событий микросферы для поддержки предполагаемого анализа.

Возможные аналитические результаты включают в себя:

• Средняя интенсивность флуоресценции

• Средняя интенсивность флуоресценции

• Процент положительных микросфер

• Отношение сигнал/фон

• Кривая доза-реакция

• Точность анализа

• Восстановление

• Специфика

• Перекрестная реактивность

• Исследование предела обнаружения

9. Анализируйте результаты

Установите положительные и отрицательные регионы, используя соответствующие элементы управления.

Не определяйте положительный порог только на основе тестового образца.

Обнаружение и блокирование 5 µm Микросферы

Стробирование прямого и бокового рассеяния

Популяцию микросфер 5 µm можно оценить с помощью графиков прямого и бокового рассеяния на многих обычных проточных цитометрах.

Предварительный анализ «FSC против SSC» может помочь исключить:

• Электронный шум

• Мелкий мусор

• Буферные частицы

• L большие агрегаты

• Нерегулярные события

Измеренное положение рассеяния зависит от матрицы частиц, показателя преломления, оптики прибора, настроек детектора и конструкции проточной кюветы.

Обнаружение репортерной флуоресценции

Когда SA PS 5UM-10 не содержит внутреннего флуоресцентного красителя, популяцию частиц все равно можно анализировать по рассеянию и флуоресценции связанного репортера.

Полезными сюжетами могут быть:

• FSC против SSC

• FSC против репортерной флуоресценции

• SSC против репортерной флуоресценции

• Гистограмма репортерной флуоресценции

• Площадь рассеяния в зависимости от высоты

• Площадь рассеяния в зависимости от ширины

Синглетный и агрегатный анализ

Агрегаты могут давать более высокий разброс, флуоресценцию или ширину сигнала, чем отдельные частицы.

Параметры площади, высоты и ширины импульса могут помочь отличить отдельные частицы от дублетов и более крупных агрегатов.

Выбор триггера

Потенциальные триггеры приобретения включают в себя:

• Прямой разброс

• Боковой разброс

• Репортерная флуоресценция

• Внутренняя флуоресценция частиц (при наличии)

• Комбинированные стратегии ворот

Частица Концентрация

Протестируйте серию разведений во время первоначальной разработки метода.

Чрезмерно концентрированные микросферы могут вызывать совпадающие события, при которых несколько частиц измеряются как одно событие.

Возможные показания включают в себя:

• Сдвиги сигнала в зависимости от концентрации

• Повышенная кажущаяся флуоресценция

• Увеличенный разброс

• Широкое распространение

• Неожиданные популяции дублетов

• Нестабильная частота событий

Рекомендуемые записи метода

Записывать:

• Модель проточного цитометра

• L конфигурация aser

• Детекторные фильтры

• Напряжение детектора или коэффициент усиления

• Настройки разброса

• Триггерный канал

• Порог срабатывания

• Скорость потока пробы

• Разбавление микросфер

• Буферный состав

• Время приобретения

• Количество собранных событий

• Ворота анализа

• Номер партии продукта

Блокирование и контроль неспецифического связывания

Неспецифическая адсорбция может увеличить флуоресценцию отрицательного образца и снизить чувствительность анализа.

Возможные причины включают в себя:

• Недостаточная блокировка

• Несовместимый блокирующий реагент

• Избыток лиганда захвата

• Избыточный флуоресцентный репортер

• Неправильная стирка

• Агрегированные антитела

• Гидрофобные компоненты образца

• Высокая концентрация белка в образце

• Агрегация микросфер

• Матричная интерференция

Скрининг нескольких блокирующих реагентов

Сравните несколько блокирующих формулировок.

Предпочтительный блокатор должен уменьшать флуоресценцию отрицательного образца, сохраняя при этом сигнал положительного образца.

Оптимизировать загрузку L и L

Больше лиганда захвата не всегда означает лучше.

Чрезмерная нагрузка лигандами может:

• Увеличение расхода реагентов

• Вызывают стерическую скученность

• Уменьшите доступность цели

• Увеличение неспецифических взаимодействий

• Расширение вариативности анализа

Титровать репортера

Избыток флуоресцентного репортера может увеличить фон.

Проверьте несколько концентраций репортера, используя положительные и отрицательные контроли.

Оптимизация стирки

Оценивать:

• Количество этапов стирки

• Композиция промывочного буфера

• Объем стирки

• Метод смешивания

• Метод разделения

• Остаточный объем надосадочной жидкости

• Восстановление микросфер

Тщательно оценивайте моющие средства

Небольшое количество совместимого моющего средства может улучшить дисперсию и снизить неспецифическую адсорбцию.

Избыток детергента может мешать взаимодействию биомолекул или связыванию репортера.

Избегайте свободного биотина

Свободный биотин в буферах, добавках, образцах или блокирующих реагентах может занимать сайты связывания стрептавидина и снижать лигандную нагрузку.

Сравнение 5 µm , 3 µm и 1 µm Стрептавидиновые микросферы

Выбирайте SA PS 5UM-10, когда:

• Важна сильная видимость рассеяния.

• Будет использоваться обычный проточный цитометр.

• Требуется прозрачный фильтр для частиц.

• Предпочтительно более легкое отделение от мелкого мусора.

• Желательна обработка шариков микронного размера.

• Будет использовано центробежное восстановление.

• Платформа частиц с диапазоном размеров ячеек может оказаться полезной.

• В настоящее время разрабатываются рутинные методы анализа потока на основе шариков.

Выбирайте SA PS 3UM-10 Когда:

• Предпочтительны частицы меньшего микронного размера.

• Требуется баланс между количеством частиц и обнаружением рассеяния.

• Желательно осаждение L более чем 5 частиц µm .

• По-прежнему требуется рутинное обнаружение методом проточной цитометрии.

Выбирайте SA PS 1UM-10, когда:

• Предпочтительно более высокое количество частиц на единицу массы.

• Используются меньшие объемы реакции.

• L поведение при расчете результатов важно.

• Прибор может надежно обнаружить 1 частицу µm .

• Большая общая площадь поверхности на единицу массы может быть выгодной.

Окончательный выбор размера частиц должен основываться на результатах анализа, а не только на диаметре.

Контроль качества и постоянство партии

Потенциальные параметры контроля качества SA PS 5UM-10 включают:

• Средний диаметр частиц

• Частица -распределение по размеру

• Частица -размерный коэффициент вариации

• Внешний вид подвески

• Содержание твердых веществ

• Консистенция стрептавидинового покрытия

• Биотинсвязывающая способность

• Частица дисперсия

• Совокупный уровень

• Частица восстановление

• Фоновая флуоресценция

• Неспецифическое связывание

• Микробный контроль

• Целостность упаковки

• Стабильность хранения

• L согласованность от партии к партии

Частица -Тестирование размера

Частица -размерная характеристика может сообщать:

• Средний диаметр

• Средний диаметр

• Диапазон размеров

• Распределение размеров

• Коэффициент вариации

• Микроскопия или инструментальная характеристика

Метод измерения должен быть указан при сообщении о результатах.

Биотин-связывающая способность

Связывающую способность следует определять с помощью определенного биотинилированного зонда.

Результат измерения зависит от:

• Тип зонда

• Размер молекулы зонда

• Количество групп биотина

• Зонд чистоты

• Условия инкубации

• Буферный состав

• Метод обнаружения

• Основа расчета

Значения, полученные с использованием различных тестовых датчиков или методов, могут быть несопоставимы напрямую.

Контроль качества проточной цитометрии

Процедура контроля качества проточной цитометрии может оценить:

• Положение основной популяции частиц

• Процент закрытых микросфер

• Репортерная флуоресценция после загрузки стандартного зонда

• Ширина распределения флуоресценции

• Разделение фона

• Повторяемость

• Совокупное население

Используйте одинаковые настройки прибора при сравнении производственных партий.

L Специализированная документация

Доступная документация может включать:

• Сертификат анализа

• Спецификация продукта

• Частица -размер результатов

• Результаты по содержанию твердых веществ

• Результаты связывающей способности

• Паспорт безопасности

• Инструкции по обращению

• Рекомендации по хранению

• L или номер

• Дата производства

Необходимые испытания и критерии приемки должны быть согласованы до начала массового производства.

Массовое производство и настройка

Шанхайская биотехнологическая компания SanYu, L td. поставляет микросферы SHBC стрептавидина для лабораторных исследований, пилотных разработок, повторного производства и оптовых закупок.

Оценка выборки исследования

Образцы могут быть оценены на предмет:

• Обнаружение проточной цитометрии

• Частица дисперсия

• Стрептавидиновая активность

• Загрузка биотинилированного лиганда

• Неспецифическое связывание

• Частица восстановление

• Осуществимость анализа

• Совместимость инструментов

Пилотная разработка

Пилотные партии могут поддерживать:

• Оптимизация анализа

• Проверка способности связывания

• Исследования стабильности

• Выбор буфера

• Оценка упаковки

• Разработка контроля качества

• Проверка клиента

• Передача процесса

Массовое производство

Массовое производство может быть организовано после подтверждения технических требований и спецификаций выпуска.

Пожалуйста, предоставьте:

• Требуемое количество

• Ожидаемый годовой спрос

• Предпочтительный размер упаковки

• Предполагаемое применение

• Требуемый диаметр частиц

• Требуемое содержание твердых веществ

• Требуемая связующая способность

• Тип биотинилированного лиганда

• Требования к буферу

• Консервационные ограничения

• Требования к контролю качества

• Требования к документации

• График доставки

• Место доставки

Пользовательский диаметр Частица

Альтернативные размеры частиц могут обсуждаться в зависимости от применения и технической осуществимости.

Пользовательская загрузка стрептавидина L

Можно оценить уровни стрептавидинового покрытия или целевые показатели связывающей способности в зависимости от проекта.

Пользовательское кодирование флуоресценции

Внутренне флуоресцентные или закодированные стрептавидиновые микросферы могут обсуждаться для проектов мультиплексной проточной цитометрии.

Возможные варианты могут включать в себя:

• Альтернативные длины волн возбуждения

• Альтернативные длины волн излучения

• Различные цвета флуоресценции

• Несколько уровней интенсивности флуоресценции

• Коды частиц по индивидуальному заказу

Пользовательский буфер и концентрация

Могут быть оценены альтернативные концентрации твердых веществ, составы буферов, системы консервантов и форматы упаковки.

OEM и частная поставка L abel

Форматы сотрудничества могут включать:

• OEM упаковка

• Этикетки по индивидуальному заказу

• Поставка под частной торговой маркой

• Каталожные номера по индивидуальному заказу

• Оптовые поставки сырья

• Кастомизация технической документации

Рекомендации по обращению и хранению

Следуйте окончательной этикетке продукта, техническим данным и сертификату анализа для конкретной партии.

Общие рекомендации включают в себя:

• Хранить в указанных условиях охлаждения.

• Не замораживайте, если не подтверждена стабильность при замораживании-оттаивании.

• Держите контейнер плотно закрытым.

• Храните флакон в вертикальном положении.

• Перед отбором проб тщательно перемешайте.

• Используйте чистые наконечники для пипеток и пробирки с низким уровнем связывания.

• Избегайте загрязнения исходной суспензии.

• Не допускайте высыхания микросфер.

• Избегайте повторных ненужных изменений температуры.

• Не возвращайте разбавленный материал в исходный контейнер.

• Запишите номер партии продукта и дату открытия.

Ресуспендирование

Поскольку 5 частиц µm могут осесть во время хранения:

1. Дайте флакону достичь рекомендуемой температуры обращения.

2. Аккуратно переверните или поверните флакон.

3. При необходимости применяйте контролируемое вортексирование.

4. Убедитесь, что суспензия однородна.

5. Проверьте наличие необратимых агрегатов.

Избегайте замораживания

Замерзание может вызвать:

• Частица агрегация

• Снижение активности стрептавидина

• Изменения в устойчивости подвески

• Снижение восстановления частиц

• Повышенный фон анализа

Избегайте высыхания

Не позволяйте гранулам микросфер высыхать во время стирки.

Высыхание может вызвать необратимую агрегацию и снижение функциональных характеристик.

Защититесь от свободного биотина

Избегайте свободного биотина во время иммобилизации биотинилированных лигандов.

Оценка стабильности приготовленного реагента

L Нагруженные игандом и блокированные микросферы могут иметь стабильность, отличную от исходной суспензии SA PS 5UM-10.

Оцените приготовленный реагент в предполагаемых условиях хранения, транспортировки и эксплуатации.

Часто задаваемые вопросы

Что такое СА PS 5УМ-10?

SA PS 5UM-10 представляет собой суспензию микросфер, покрытых 5 µm стрептавидином, поставляемую с содержанием твердых веществ 1% для улавливания биотинилированных биомолекул в проточной цитометрии и аналитических исследованиях на основе шариков.

Что такое бренд SHBC ?

SHBC — бренд микросфер и биотехнологических материалов Шанхайской биотехнологической компании SanYu, L td.

Каков номинальный диаметр частиц?

Номинальный диаметр частиц составляет 5 µm .

Фактически измеренный диаметр и распределение частиц по размерам должны быть подтверждены с использованием документации по конкретной партии.

Каково содержание твердых веществ?

SA PS 5UM-10 поставляется с содержанием твердых веществ 1%.

Магнитны ли микросферы SA PS 5УМ-10?

Не следует считать продукт магнитным, если магнитные свойства специально не указаны в технической спецификации.

Для магнитной сепарации выберите продукт, конкретно описанный как магнитные шарики стрептавидина.

Микросферы флюоресцируют?

Не следует предполагать, что стандартный продукт содержит внутренний флуоресцентный краситель, если только флуоресценция не указана в спецификации продукта.

Обнаружение проточной цитометрией может использовать рассеяние или флуоресценцию связанного репортера.

Какие молекулы могут связываться с SA PS 5UM-10?

Поверхность стрептавидина может захватывать биотинилированные антитела, антигены, белки, пептиды, олигонуклеотиды, DNA , RNA , аптамеры и другие биотинсодержащие молекулы.

Может ли одифицированное антитело u nm связываться напрямую?

U nm одифицированное антитело не будет специфически прикрепляться посредством взаимодействия стрептавидин-биотин, если оно не биотинилировано или не связано с помощью другого совместимого реагента.

Требуется ли активация EDC/NHS ?

Активация EDC/NHS обычно не требуется при загрузке биотинилированной молекулы на микросферы, покрытые стрептавидином.

Какова биотинсвязывающая способность?

Связывающая способность должна быть подтверждена с использованием спецификации продукта или сертификата анализа для конкретной партии.

Его не следует рассчитывать только на основе содержания твердых веществ.

Можно ли использовать SA PS 5UM-10 в проточной цитометрии?

Да. Диаметр частиц 5 µm подходит для оценки в анализах проточной цитометрии и исследованиях на основе частиц.

Может ли обычный проточный цитометр обнаружить 5 микросфер µm ?

Многие обычные проточные цитометры могут обнаружить 5 микросфер µm используя подходящие настройки рассеяния.

Фактическая производительность зависит от оптики прибора, лазеров, детекторов, настроек триггера и буфера образцов.

Можно ли использовать SA PS 5UM-10 для сэндвич-иммуноанализа?

Да. Биотинилированное захватывающее антитело может быть иммобилизовано на частице с последующим захватом и обнаружением мишени с помощью флуоресцентного репортерного антитела.

Можно ли использовать его для обнаружения нуклеиновых кислот?

Да. Биотинилированные олигонуклеотиды, продукты DNA , RNA , PCR и аптамеры можно оценивать на предмет иммобилизации и захвата мишени.

Можно ли использовать SA PS 5UM-10 в мультиплексных анализах?

Да, при условии, что популяцию SA PS 5UM-10 можно отличить от других популяций микросфер.

Может потребоваться индивидуальное кодирование флуоресценции.

Как следует мыть микросферы?

Метод промывки зависит от состава частиц, плотности, буфера, объема и требуемого восстановления.

Можно оценить центрифугирование или мембранные методы.

Почему восстановление микросфер низкое?

Возможные причины включают в себя:

• Недостаточная центробежная сила

• Короткое время центрифугирования

• L oss во время удаления супернатанта

• Адгезия к поверхности трубы

• Несовместимый метод разделения

• Частица агрегация

• Чрезмерное мытье

Как можно уменьшить неспецифическое связывание?

Оптимизируйте блокирующий реагент, концентрацию лиганда, концентрацию репортера, условия промывки, уровень детергента, разбавление образца и время инкубации.

Можно ли использовать буферы, содержащие свободный биотин?

Свободный биотин может занимать участки связывания стрептавидина, и его, как правило, следует избегать во время загрузки лиганда.

Почему частицы оседают?

Частицы микронного размера могут оседать из-за своего размера и плотности.

Тщательно перемешивайте суспензию перед каждым этапом отбора проб.

Следует ли разбавлять SA PS 5UM-10 перед проточной цитометрией?

Да. Подготовьте рабочее разведение в соответствии с необходимым количеством частиц и частотой событий.

При разработке метода рекомендуется серия разведений.

Можно ли заморозить микросферы?

Замораживание обычно не рекомендуется, если не была специально подтверждена стабильность при замораживании-оттаивании.

Можно ли настроить концентрацию?

Альтернативные концентрации твердых веществ могут обсуждаться в соответствии с требованиями проекта и возможностью производства.

Можно ли настроить емкость переплета?

Могут быть оценены целевые показатели загрузки стрептавидина или связывающей способности в зависимости от проекта.

Можно ли получить флуоресцентные микросферы стрептавидина?

Флуоресцентные или кодированные стрептавидиновые микросферы могут обсуждаться для квалифицированных проектов мультиплексной проточной цитометрии.

Возможно ли массовое производство?

Да. Шанхайская биотехнологическая компания SanYu, L td. поддерживает образцы, пилотные партии, повторные заказы, проекты OEM и массовое производство.

Какая информация необходима для коммерческого предложения?

Пожалуйста, предоставьте:

• Каталожный номер SA PS 5УМ-10

• Требуемое количество

• Ожидаемый годовой объем закупок

• Предпочтительный размер упаковки

• Предполагаемое применение

• Модель проточного цитометра

• Тип биотинилированного лиганда

• Требуемая связующая способность

• Требуемое количество микросфер на тест

• Ограничения буфера

• Консервационные ограничения

• Требования к контролю качества

• Требования к документации

• Место доставки

Запросить образец или оптовое предложение

SHBC SA PS 5UM-10 5 µm Стрептавидиновые микросферы обеспечивает гибкую платформу частиц для иммобилизации биотинилированных антител, белков, пептидов, олигонуклеотидов, DNA , RNA , аптамеров и других биотин-меченных биомолекул.

Продукт подходит для:

• Анализы с использованием проточной цитометрии

• Сэндвич-иммуноанализы на основе шариков

• Анализы конкурентного связывания

• Иммобилизация биотинилированных антител

• Исследование взаимодействия белков

• Захват нуклеиновой кислоты

• Анализы гибридизации

• Исследования аффинного связывания

• Разработка мультиплексной проточной цитометрии

• Производство исследовательских реагентов

СА PS 5УМ-10 обеспечивает:

• 5 µm номинальный диаметр частиц

• Стрептавидин-функциональная поверхность

• 1% суспензия твердых веществ

• Совместимость с биотинилированными биомолекулами.

• Поставка образцов и пилотных партий

• Возможность массового производства

• OEM и поддержка индивидуальной разработки

Для оценки образца или оптовой закупки укажите предполагаемое применение, необходимое количество, биотинилированный лиганд, желаемую связывающую способность, конфигурацию проточного цитометра, требования к упаковке и спецификации контроля качества.

Название продукта: 5 µm Стрептавидиновые микросферы
Номер по каталогу: SA PS 5UM-10
Марка: SHBC
Производитель: Shanghai SanYu Biotechnology Co., L td.
Номинальный диаметр Частица : 5 µm
Модификация поверхности: Содержание твердого вещества стрептавидина
: 1 %
Основное применение: исследования в области проточной цитометрии и бисерного анализа.
Возможности поставки: образцы, пилотные партии и массовое производство.
Назначение: только для исследовательских целей. Не для диагностического или терапевтического использования.