Флуоресцентные микросферы с временным разрешением

1. Флуоресцентные микросферы с временным разрешением. Введение в продукт

Флуоресцентные микросферы с временным разрешением предназначены для реагентов иммуноанализа с латеральным потоком и изготовлены из флуоресцентных красителей с временным разрешением, сополимеризованных со стиролом. Флуоресцентные микросферы с временным разрешением обладают характеристиками большого смещения Стокса, отсутствием внутреннего эффекта гашения во время агрегации, сильным сигналом обнаружения, флуоресцентным красителем, обернутым в микросферы, не подверженным влиянию внешней среды, и стабильной флуоресценцией. Это идеальный маркер для иммунофлуоресцентной количественной хроматографии.

2. Параметры микросфер

1. Состав: Модифицированные полистирольные микросферы, модифицированные флуоресцентными комплексами редкоземельного элемента европия.

2. Твёрдое вещество: 1% (1 мл суспензии содержит 10 мг микросфер).

3. Средний размер частиц: 200 нм.

4. Однородность размера частиц: CV<5%.

5. Функциональные группы: карбоксильная группа, сульфатная группа и т. д.

6. Содержание карбоксила: 200±10 мкмоль/г.

7. Свойства флуоресценции: длина волны возбуждения: 365 нм, длина волны излучения: 610 нм.

8. Срок службы флуоресценции: 720 мкс.

9. Плотность: 1,05 г/см3.

10. Показатель преломления: 1,59 (589 нм, 25 ℃)

11. Внешний вид: белая эмульсия.
Третье: сохранение микросфер
Условия хранения: Хранить при температуре 2-8°С, в защищенном от света, герметично закрытом месте, не подлежит многократному замораживанию и оттаиванию. 4. Как использовать

(1) Шаги активации:

1. Диспергируйте микросферы с помощью ультразвука в течение примерно 2 минут, а затем встряхните их вручную;

2. В EP-пробирку объемом 2 мл добавьте 100 мкл микросфер (содержание твердых веществ 1%), затем добавьте 900 мкл сверхчистой воды (или MES-буфера) и отставьте в сторону;

3. Подготовка:

10 мг/мл этанольный раствор N-гидроксисукцинимида (NHS) Раствор А
10 мг/мл 1-(3-диметиламинопропил)-3-этилкарбодиимида гидрохлорида (EDC) этанольный раствор B
Примечание. NHS и EDC легко впитывают влагу. Эти два реагента необходимо нагревать более 30 минут перед взвешиванием.

4. Добавьте 5 мкл раствора А к суспензии микросфер и хорошо перемешайте, затем добавьте 5 мкл раствора Б, снова перемешайте и проведите реакцию при комнатной температуре в течение 15–30 минут;

5. Центрифугируйте при 14000 об/мин в течение 15 минут, удалите надосадочную жидкость, добавьте 1 мл сверхчистой воды (или буфера для связывания антител), а затем равномерно диспергируйте ультразвуком.
Примечание. Обязательно тщательно диспергируйте, иначе микросферы после сшивания антитела легко агломерируются, и полоска будет плохо работать.

(2) Сшивка антител

Обратите особое внимание на то, выпадает ли в осадок антитело, использованное для сшивания. Если происходит осаждение, антитело необходимо центрифугировать или отфильтровать, иначе сшитые микросферы агломерируются. Антитела, которые были отфильтрованы или центрифугированы, необходимо повторно определить концентрацию антител.
Количество сшитого антитела на поверхности микросфер составляет: антитело/микросфера = 10~50 мкг/мг, а оптимальное количество метки обычно составляет 20 мкг/мг.

Этапы перекрестного связывания антител:

1. Возьмите 1 мл указанной выше суспензии активированных микросфер, диспергируйте ее ультразвуком и по каплям добавьте антитело при перемешивании. Оптимальная дозировка антител составляет 20 мкг;
Примечание. Рекомендуемым буфером для перекрестного связывания антител является буфер борной кислоты, 0,02 моль/л, pH = 8,0. Каждое антитело имеет свой оптимальный буфер для сшивки (тип, концентрация, pH), который вам необходимо изучить самостоятельно.

2. Перемешивайте при комнатной температуре в течение 1 часа, а затем проверьте работоспособность микросфер после связывания антитела;
Примечание. Тест-полоски, покрытые козьими антимышиными IgG, можно использовать для проверки текучести и способности распознавания антител микросфер после перекрестного связывания антител.

3. Добавить БСА (конечная концентрация 0,51ТР3Т) для блокировки на 1 час;

4. Центрифуга при 13000 об/мин в течение 15 мин;

5. Добавьте 1 мл консервационного раствора к центрифугированным микросферам, хорошо перемешайте и храните в защищенном от света месте до использования.

Примечание. Поскольку антитела в каждом проекте разные, вам необходимо самостоятельно найти лучшее решение для сохранения. Базовая формула консервирующего раствора: 10% сахароза (масса/объем), 0,01 моль/л PB pHPB pH=7,4.