免疫磁珠(IMB)是通过物理吸附、化学交联等方法将具有免疫活性的分子,如抗体(或抗原)结合到磁性粒子表面形成的复合物,既具有免疫反应的特异性,又具有磁响应性。作为载体的磁性粒子通常由金属(如铁、钴、镍等)或金属氧化物(如氧化铁)等磁性材料制成,粒径一般在纳米至微米级。
结构 免疫磁珠:磁珠由核心金属颗粒(Fe2O3、Fe3O4)组成,核心由包裹在外层的高分子材料(如聚苯乙烯、聚氯乙烯)和最外层的功能配体(如-NH2、-COOH、-OH、-CHO)构成。
工作原理
免疫反应结合阶段:当免疫磁珠加入含有目标抗原(或抗体)的样本中时,磁珠表面的抗体(或抗原)会与目标抗原(或抗体)特异性结合。例如,在检测血液中的癌细胞时,免疫磁珠表面偶联有癌细胞表面特定标志物(如上皮细胞粘附分子,EpCAM)的抗体会与癌细胞表面的EpCAM特异性结合,从而使免疫磁珠对癌细胞进行“捕获”。
磁分离阶段:完成结合后,施加外部磁场,由于免疫磁珠本身的磁性,它们会迅速将结合的靶分子(或细胞)从样品溶液中分离出来。例如,将含有免疫磁珠癌细胞复合物的血液样本置于磁场中,免疫磁珠癌细胞就会被吸引到磁场的一侧,而其他成分(如血细胞、血浆蛋白等)则留在溶液中,从而实现癌细胞与其他成分的分离。
免疫磁珠的应用领域
1. 生物医学研究
(1)细胞分选
磁珠分选又称免疫磁珠细胞分选,主要利用针对特定细胞表面抗原的抗体标记细胞,标记细胞与磁珠交联后置于磁场中吸附,从而进行选择或去除。磁珠分选速度快、操作简便,是科研人员分离高纯度、高活性特定细胞亚群最常用的方法之一。
高纯度分离细胞可用于许多生命科学分选实验的场景,例如疾病建模、细胞治疗研究、动物模型的过继细胞移植实验、体外药物筛选、杂交瘤制备等。
免疫磁珠细胞分选可以在几分钟内从复杂的细胞混合物中分离出高纯度的细胞。当使用纳米级磁珠进行细胞分选时,磁珠的尺寸和成分使其可生物降解,不会激活或影响细胞的功能和活力。细胞的生理功能保持不变,因此细胞的磁性标记可以立即用于分析和后续实验。
(2) 蛋白质/抗体的分离纯化
采用抗体(蛋白)包被的免疫磁珠纯化技术不需要复杂的层析设备,对样品清晰度没有限制,只需要简单的磁吸附步骤就可以轻松将单克隆抗体与其表达产物分离,有效解决了传统层析技术的不足。
(3)核酸分离纯化
核酸与磁珠的结合主要依靠静电、疏水、氢键作用。在裂解缓冲液的作用下,细胞或组织中的DNA/RNA被释放出来。此时,表面修饰的超顺磁性二氧化硅纳米磁珠与核酸发生“特异性结合”,形成“核酸磁珠复合物”。然后在外界磁场的作用下,复合物被分离。
可广泛应用于基因组研究、分子进化研究、医学遗传病研究、突变基因检测、肿瘤筛查、HPV检测、HLA分型、器官移植配型、法医生物样本血斑、精液斑、头发、烟蒂等现场物证检测,以及法医亲子鉴定、血缘关系鉴定、考古、中小学生物实验等众多领域。
- 病原体检测与富集:在微生物研究中,免疫磁珠可用于检测和富集特定的病原体。例如,在检测食品中的致病性大肠杆菌时,将偶联有抗大肠杆菌抗体的免疫磁珠加入到食品提取物中。磁珠与大肠杆菌结合后,通过磁分离和后续的培养、PCR等检测方法确定大肠杆菌的存在和数量。
2.临床诊断与治疗
(1)肿瘤诊断与监测:在早期癌症诊断中,免疫磁珠可用于富集血液中的循环肿瘤细胞(CTC),作为肿瘤早期诊断、疗效评估、复发监测的生物标志物。例如,通过检测肺癌患者血液中的CTC,医生可以了解肿瘤的转移情况,评估治疗方案的有效性。
(2)免疫治疗:在一些免疫治疗方法中,免疫磁珠可以作为载体,递送免疫调控分子,如将免疫刺激因子偶联到免疫磁珠上,通过磁珠的特异性结合递送至免疫细胞(如T细胞),增强其免疫活性,用于治疗某些自身免疫性疾病或肿瘤等。
- 食品安全检测
可用于检测食品中的有害微生物(如沙门氏菌、李斯特菌等)、毒素(如黄曲霉毒素)或转基因成分。例如,将偶联有抗沙门氏菌抗体的免疫磁珠加入食品样品的提取液中,经磁分离后再进行检测,可快速灵敏地检测出沙门氏菌的存在,确保食品安全。
免疫磁珠的优点
- 特异性强
通过抗原与抗体的特异性结合,可以准确识别并捕获目标分子或细胞,有效减少非特异性吸附和背景干扰,提高检测分离的准确性。
- 分离效率高
在外界磁场的作用下,免疫磁珠可以快速从底物液相中分离,从复杂的生物样本中富集目标分子,大大减少分离时间,提高工作效率。
- 操作简单
无需复杂的仪器设备,适用于全自动工作站,可实现一键自动化提取,减少手工操作的难度和误差。
- 稳定性好
具有良好的物理和化学稳定性,在不同的实验条件下均能保持其性能,保证实验结果的可靠性。
- 功能多样
可与荧光标记、化学发光等多种检测技术和分析方法联用,实现目标分子的高灵敏检测和定量分析,应用于基因纯化、蛋白纯化、细胞纯化、微生物富集等多个领域。
免疫磁珠存在的挑战
非特异性结合:虽然特异性较高,但在某些情况下仍可能发生非特异性结合,导致检测结果出现假阳性,影响实验准确性。
磁珠聚集:不适当的储存条件或外界因素可能造成磁珠聚集,降低比表面积和活性,影响与目标分子的结合效率。
价格昂贵:特别是经过特殊修饰或功能化的免疫磁珠,高昂的成本限制了其在大规模实验或临床检测中的广泛应用。
对细胞功能的影响:在细胞分离纯化过程中,可能与细胞表面受体或其他分子发生相互作用,干扰细胞正常的生理功能和生物行为,影响后续的研究和应用。
我们的解决方案
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我们的免疫磁珠
羧基磁珠 |
链霉亲和素磁珠 |
环氧磁珠 |
胺基磁珠 |
NHS 磁珠 |
甲磺酰基磁珠 |
镍磁珠 |
硅胶磁珠 |
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