时间分辨荧光微球

1. 时间分辨荧光微球产品介绍

时间分辨荧光微球是专为侧流免疫分析试剂而设计的，由时间分辨荧光染料与苯乙烯共聚而成。时间分辨荧光微球具有斯托克斯位移大、聚集过程中无内部猝灭效应、检测信号强、荧光染料包裹在微球内，不易受外界环境影响、荧光稳定等特点，是免疫荧光定量色谱的理想标记物。

2. 微球参数

1. 成分：稀土元素铕荧光配合物改性聚苯乙烯微球

2.固含量：1%（1ml悬浮液含10mg微球）

3.平均粒径：200nm

4、粒度均匀度：CV<5%

5.功能基团：羧基、硫酸基等。

6、羧基含量：200±10μmol/g

7.荧光特性：激发波长：365nm，发射波长：610nm

8.荧光寿命：720μs

9.密度：1.05g/cm3

10、折射率：1.59（589nm,25℃）

11.外观：白色乳液
三：微球的保存
储藏条件：2-8℃，避光，密封保存，不可反复冻融。4.使用方法

（1）激活步骤：

1、将微球超声分散约2分钟，然后手动振摇；

2. 在2mL EP管中加入100μL微球（固形物含量1%），再加入900μL超纯水（或MES缓冲液），备用；

3.准备：

10mg/ml N-羟基琥珀酰亚胺（NHS）乙醇溶液A溶液
10mg/ml 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐（EDC）乙醇溶液B
注意：NHS和EDC均易吸潮，这两种试剂需预热30分钟以上后才能称重。

4、向微球混悬液中加入5μl溶液A并混匀，再加入5μl溶液B，再次混匀，室温下反应15～30分钟；

5.14000r/min离心15min，弃上清，加入1ml超纯水（或抗体偶联缓冲液），超声波分散均匀。
注意：一定要分散彻底，否则交联抗体后的微球容易团聚，导致试纸条运行不良。

（2）抗体交联

特别注意交联所用的抗体是否发生沉淀，若发生沉淀则需要对抗体进行离心或过滤，否则交联微球会团聚。过滤或离心过的抗体需重新测定抗体浓度。
微球表面交联抗体的量为：抗体/微球=10~50μg/mg，最佳标记量一般为20μg/mg。

抗体交联步骤：

1、取1ml上述活化后的微球混悬液，超声分散，搅拌下逐滴加入抗体，最佳抗体用量为20ug；
注：推荐的抗体交联缓冲液为硼酸缓冲液，0.02mol/L，pH=8.0。每种抗体都有其最佳的交联缓冲液（种类、浓度、pH），需要自行探索。

2、室温下混合1小时，然后测试微球偶联抗体后的性能；
注：可用羊抗鼠IgG包被的试纸条来测试抗体交联后微球的流动性和抗体识别性能。

3.加入BSA（终浓度为0.5%）封闭1小时；

4.13000r/min离心15min；

5.向离心后的微球中加入1ml保存液，混匀，放入冰箱避光保存直至使用。

注：由于每个项目的抗体不同，需要自行探索最佳保存液，基础保存液配方为：10%蔗糖（w/v），0.01mol/L PB pHPB pH=7.4。