Microesferas fluorescentes resueltas en el tiempo

1. Time Resolved Fluorescent Microspheres Product introduction

Time resolved fluorescent microspheres is designed for lateral flow immunoassay reagents and is made of time-resolved fluorescent dyes copolymerized with styrene. Time-resolved fluorescence microspheres has the characteristics of large stokes displacement, no internal quenching effect during aggregation, strong detection signal, fluorescent dye wrapped in microspheres, not easily affected by the external environment, and stable fluorescence. It is an ideal marker for immunofluorescence quantitative chromatography.

2. Parámetros de microesferas

1. Ingredientes: Microesferas de poliestireno modificado con complejos fluorescentes de europio, elemento de tierras raras

2. Contenido de sólidos: 1% (1 ml de suspensión contiene 10 mg de microesferas)

3. Tamaño medio de partícula: 200 nm

4. Uniformidad del tamaño de las partículas: CV<5%

5. Grupos funcionales: grupo carboxilo, grupo sulfato, etc.

6. Contenido de carboxilo: 200±10μmol/g

7. Propiedades de fluorescencia: longitud de onda de excitación: 365 nm, longitud de onda de emisión: 610 nm

8. Vida útil de la fluorescencia: 720μs

9. Densidad: 1,05 g/cm3

10. Índice de refracción: 1,59 (589 nm, 25 ℃)

11. Aspecto: emulsión blanca
Tres: preservación de las microesferas
Condiciones de almacenamiento: Almacenar a 2-8°C, protegido de la luz, sellado y no se puede congelar ni descongelar repetidamente. 4. Cómo utilizar

(1) Activation steps:

1. Disperse the microspheres ultrasonically for about 2 minutes, and then shake them manually;

2. En un tubo EP de 2 ml, agregue 100 μl de microesferas (contenido sólido 1%), luego agregue 900 μl de agua ultrapura (o tampón MES) y reserve;

3. Preparación:

Solución A de etanol de N-hidroxisuccinimida (NHS) de 10 mg/ml
10 mg/ml de solución de etanol B de hidrocloruro de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida (EDC)
Nota: NHS y EDC son fáciles de absorber la humedad. Es necesario recalentar estos dos reactivos durante más de 30 minutos antes de pesarlos.

4. Agregue 5 µl de solución A a la suspensión de microesferas y mezcle bien, luego agregue 5 µl de solución B, mezcle nuevamente y reaccione a temperatura ambiente durante 15 a 30 minutos;

5. Centrifugar a 14000 r/min durante 15 minutos, eliminar el sobrenadante, agregar 1 ml de agua ultrapura (o tampón de acoplamiento de anticuerpos) y luego dispersar uniformemente mediante ultrasonidos.
Nota: Asegúrese de dispersar completamente; de lo contrario, las microesferas después de reticular el anticuerpo se aglomerarán fácilmente y la tira funcionará mal.

(2) Reticulación de anticuerpos

Preste especial atención a si el anticuerpo utilizado para la reticulación precipita. Si se produce precipitación, es necesario centrifugar o filtrar el anticuerpo; de lo contrario, las microesferas entrecruzadas se aglomerarán. Es necesario volver a determinar la concentración de anticuerpos en los anticuerpos que se han filtrado o centrifugado.
La cantidad de anticuerpo reticulado en la superficie de las microesferas es: anticuerpo/microesfera = 10 ~ 50 μg/mg, y la cantidad de etiquetado óptima es generalmente 20 μg/mg.

Pasos de entrecruzamiento de anticuerpos:

1. Tome 1 ml de la suspensión de microesferas activadas anterior, dispérsela mediante ultrasonidos y agregue el anticuerpo gota a gota mientras se agita. La dosis óptima de anticuerpos es 20 ug;
Nota: El tampón de reticulación de anticuerpos recomendado es el tampón de ácido bórico, 0,02 mol/l, pH = 8,0. Cada anticuerpo tiene su tampón de reticulación óptimo (tipo, concentración, pH), que debe explorar usted mismo.

2. Mezclar a temperatura ambiente durante 1 hora y luego probar el rendimiento de las microesferas después de acoplar el anticuerpo;
Nota: Las tiras reactivas recubiertas de IgG anti-ratón de cabra se pueden utilizar para probar la fluidez y el rendimiento de reconocimiento de anticuerpos de las microesferas después del entrecruzamiento de anticuerpos.

3. Agregue BSA (concentración final de 0,51 TP3T) para bloquear durante 1 hora;

4. Centrifugar a 13000 r/min durante 15 min;

5. Agregue 1 ml de solución conservante a las microesferas centrifugadas, mezcle bien y guárdelo en el refrigerador protegido de la luz hasta su uso.

Nota: Debido a que los anticuerpos de cada proyecto son diferentes, usted mismo debe explorar la mejor solución de preservación. La fórmula básica de la solución de conservación es: sacarosa 10% (p/v), 0,01 mol/L PB pHPB pH=7,4.