Perline magnetiche streptavidina 5um MSA5UM-10 1%

Sfere magnetiche di streptavidina da 5 µm MSA5UM-10

MSA5UM-10 è una sospensione di sfere magnetiche streptavidina-funzionali da 5 µm fornita all'1% di solidi.

Quando la concentrazione di solidi è espressa in peso per volume, l'1% corrisponde a circa 10 mg di sfere magnetiche per millilitro di sospensione.

Il prodotto è sviluppato per la cattura e l'immobilizzazione di anticorpi, antigeni, proteine, peptidi, aptameri, oligonucleotidi biotinilati e altre biomolecole marcate con biotina.

MSA5UM-10 può essere valutato come fase solida magnetica nello sviluppo di test immunologici in chemiluminescenza, nella ricerca sui test immunologici magnetici, nell'arricchimento di biomolecole, nella preparazione dei campioni, nello scale-up dei processi e nella produzione di reagenti in lotti.

La streptavidina immobilizzata sulla superficie delle sfere magnetiche lega i ligandi biotinilati senza richiedere all'utente finale di attivare le sfere con EDC, NHS, glutaraldeide o un altro reagente di attivazione chimica.

Dopo aver caricato una molecola di cattura biotinilata selezionata, le sfere magnetiche funzionalizzate possono essere utilizzate per la cattura del bersaglio, la raccolta magnetica, i lavaggi ripetuti e il rilevamento del segnale a valle.

MSA5UM-10 è destinato ad aziende biotecnologiche, sviluppatori di test immunologici, istituti di ricerca e produttori di reagenti che richiedono una materia prima definita con sfere magnetiche di streptavidina da 5 µm per la valutazione di laboratorio, la produzione pilota e la fornitura in grandi quantità.

Il reagente finito deve essere convalidato utilizzando il ligando biotinilato, la matrice del campione, il separatore magnetico, il programma di lavaggio, i prodotti chimici di rilevamento e l'analizzatore immunologico previsti.

Panoramica del prodotto

Il sistema streptavidina-biotina fornisce un metodo flessibile per immobilizzare diverse biomolecole biotinilate su una fase solida magnetica comune.

Le sfere magnetiche commerciali di streptavidina da 5 µm esatti vengono utilizzate per catturare anticorpi biotinilati, antigeni, proteine ​​e sonde di acido nucleico. Sono inoltre commercializzati per test immunologici, chemiluminescenza di particelle magnetiche, isolamento di proteine, cattura di acidi nucleici e separazione cellulare.

MSA5UM-10 è progettato per supportare:

• Immobilizzazione di anticorpi biotinilati;

• Immobilizzazione dell'antigene biotinilato;

• Saggi immunologici sandwich magnetici;

• Saggi di rilevamento degli anticorpi;

• Saggi immunologici competitivi;

• Sviluppo di test immunologici in chemiluminescenza;

• Ricerca su test di elettrochemiluminescenza;

• Arricchimento immunomagnetico;

• Cattura di peptidi biotinilati;

• Cattura degli acidi nucleici e degli aptameri;

• Sviluppo automatizzato dei reagenti;

• Produzione su scala pilota;

• Produzione in lotti.

MSA5UM-10 viene fornito come materia prima per la ricerca e lo sviluppo di reagenti. Non viene fornito come reagente diagnostico finito.

Specifiche del prodotto MSA5UM-10

I seguenti parametri specifici del prodotto devono essere confermati attraverso la scheda tecnica applicabile e il certificato di analisi specifico del lotto:

• Distribuzione granulometrica;

• Caricamento di streptavidina;

• Attività della streptavidina;

• Capacità di legare la biotina libera;

• Capacità di caricamento degli anticorpi biotinilati;

• Capacità di caricamento degli oligonucleotidi biotinilati;

• Legame non specifico;

• Prestazioni di raccolta magnetica;

• Tampone di sospensione;

• Formulazione bloccante;

• Sistema conservante;

• Condizioni di conservazione;

• Periodo di validità;

• Criteri di rilascio dei lotti.

I fornitori commerciali utilizzano diverse strutture particellari, prodotti chimici di superficie e metodi analitici. I valori della capacità vincolante del concorrente dovrebbero pertanto essere utilizzati solo per il benchmarking del mercato, non come specifiche per MSA5UM-10.

Come funzionano le sfere magnetiche di streptavidina?

La streptavidina immobilizzata sulla superficie della biglia magnetica fornisce siti di legame per affinità per la biotina.

Quando un anticorpo, antigene, proteina, peptide o oligonucleotide biotinilato viene incubato con MSA5UM-10, il gruppo biotina si lega alla streptavidina sulla superficie della sfera.

Il complesso risultante può essere rappresentato come:

Perla magnetica – streptavidina – biotina – ligando

Il ligando biotinilato fornisce il riconoscimento del bersaglio biologico, mentre la particella magnetica fornisce una fase solida per la raccolta, il lavaggio e la manipolazione dei reagenti.

Le particelle magnetiche commerciali rivestite di streptavidina vengono utilizzate per legare anticorpi biotinilati, proteine, sonde di acido nucleico e altre biomolecole marcate nei flussi di lavoro di dosaggio immunologico e di separazione.

Esempio utilizzando un anticorpo di cattura biotinilato

Un immunodosaggio sandwich magnetico può includere i seguenti passaggi:

1. Preparare un anticorpo di cattura biotinilato.

2. Incubare l'anticorpo con MSA5UM-10.

3. Consentire alla biotina di legarsi alla streptavidina di superficie.

4. Raccogliere magneticamente le perline caricate con anticorpi.

5. Rimuovere l'anticorpo non legato.

6. Risospendere le sfere caricate nella formulazione selezionata.

7. Incubare le sfere con il campione.

8. Cattura l'antigene bersaglio.

9. Aggiungere un anticorpo di rilevamento etichettato.

10. Raccogliere magneticamente e lavare il complesso immunitario.

11. Aggiungere o attivare il reagente del segnale chemiluminescente.

12. Misurare il segnale analitico.

Esempio utilizzando un antigene biotinilato

Per un test di rilevamento degli anticorpi:

1. Preparare un antigene biotinilato.

2. Caricare l'antigene su MSA5UM-10.

3. Rimuovere l'antigene non legato.

4. Incubare le sfere caricate con l'antigene con il campione.

5. Cattura gli anticorpi specifici del bersaglio.

6. Aggiungere un anticorpo secondario marcato.

7. Eseguire la raccolta e il lavaggio magnetico.

8. Misurare il segnale risultante.

Esempio utilizzando un oligonucleotide biotinilato

Un oligonucleotide biotinilato può essere immobilizzato per:

• Cattura dell'acido nucleico;

• Saggi di ibridazione;

• Rilevamento basato su aptameri;

• Arricchimento del target;

• Immobilizzazione della sonda;

• Ricerca diagnostica molecolare;

• Esperimenti di pull-down;

• Preparazione del campione prima dell'amplificazione.

La posizione e il grado di biotinilazione dovrebbero essere selezionati per preservare l'ibridazione o l'attività di riconoscimento del bersaglio.

Caratteristiche principali di MSA5UM-10

Dimensione delle particelle definita da 5 µm

MSA5UM-10 fornisce un formato di particelle magnetiche definito da 5 µm anziché un ampio intervallo su scala micrometrica.

La dimensione delle particelle può influenzare:

• Numero di particelle per unità di massa;

• Area della superficie geometrica;

• Accessibilità del ligando;

• Decantazione guidata dalla gravità;

• Raccolta magnetica;

• Formazione di zone di raccolta;

• Efficienza di lavaggio;

• Ridispersione;

• Movimentazione automatizzata dei liquidi.

Le prestazioni effettive dipendono anche dal contenuto di materiale magnetico, dalla distribuzione delle dimensioni delle particelle, dal rivestimento superficiale, dalla densità di streptavidina, dal tampone di sospensione e dalla configurazione del magnete.

Superficie funzionale streptavidina

La superficie della perla fornisce siti di legame per affinità per i ligandi biotinilati.

I potenziali ligandi includono:

• Anticorpi monoclonali biotinilati;

• Anticorpi policlonali biotinilati;

• Antigeni ricombinanti biotinilati;

• Proteine ​​naturali biotinilate;

• Peptidi biotinilati;

• Enzimi biotinilati;

• Aptameri biotinilati;

• Sonde di DNA biotinilato;

• Sonde di RNA biotinilato;

• Apteni biotinilati;

• Altre molecole di affinità marcate con biotina.

Formulazione di solidi all'1%.

Espressa come p/v, una sospensione di solidi all'1% corrisponde a circa 10 mg/ml.

I calcoli approssimativi della massa delle sfere sono:

• 10 µl contengono circa 0,1 mg di sfere;

• 50 µl contengono circa 0,5 mg di sfere;

• 100 µl contengono circa 1 mg di sfere;

• 500 µl contengono circa 5 mg di sfere;

• 1 ml contiene circa 10 mg di perle.

Questi calcoli dovrebbero essere utilizzati solo dopo aver confermato che la specifica dell'1% è espressa come p/v.

I concorrenti esatti da 5 µm vengono forniti anche a 10 mg/ml o all'1% di solidi, rendendola una concentrazione familiare per il confronto con la concorrenza e lo sviluppo di metodi.

Non è richiesta alcuna attivazione aggiuntiva delle microsfere

Un ligando adeguatamente biotinilato può normalmente essere caricato senza attivare la superficie della biglia magnetica utilizzando EDC/NHS o un altro reagente di accoppiamento covalente.

Ciò può semplificare lo sviluppo del test poiché è possibile confrontare diverse molecole di cattura biotinilate utilizzando la stessa piattaforma di sfere magnetiche.

Screening flessibile dei ligandi

MSA5UM-10 può essere valutato con più anticorpi, antigeni o sonde biotinilati.

Questo supporta:

• Screening degli anticorpi di cattura;

• Confronto delle coppie di anticorpi;

• Valutazione del costrutto antigene;

• Screening dei peptidi;

• Screening degli aptameri;

• Espansione del target del test;

• Sviluppo di reagenti multiprodotto.

Elaborazione magnetica in fase solida

Dopo il caricamento del ligando e la cattura del target, le particelle possono essere raccolte utilizzando un separatore magnetico compatibile.

Un processo tipico include:

• Erogazione delle perline;

• Incubazione del campione;

• Cattura del bersaglio;

• Raccolta magnetica;

• Rimozione del surnatante;

• Lavaggio;

• Incubazione del reagente di rilevamento;

• Lavaggio magnetico aggiuntivo;

• Generazione del segnale.

Fornitura dalla ricerca alla produzione

MSA5UM-10 può supportare:

• Valutazione iniziale di fattibilità;

• Screening dei ligandi biotinilati;

• Ottimizzazione del test immunologico;

• Valutazione dell'analizzatore automatizzato;

• Studi di stabilità;

• Produzione pilota;

• Valutazione della coerenza del lotto;

• Approvvigionamento di materie prime in grandi quantità.

Perché scegliere le microsfere magnetiche di streptavidina da 5 µm?

Posizionamento esatto del prodotto da 5 µm

Alcuni fornitori offrono prodotti da 4,0–4,5 µm o 4,5 µm, mentre altri forniscono una specifica nominale esatta di 5 µm. MSA5UM-10 è pensato per i clienti il ​​cui progetto di sviluppo, specifica della materia prima o valutazione dello strumento richiede una microsfera di streptavidina definita da 5 µm.

Collezione magnetica chiaramente osservabile

Sotto un campo magnetico compatibile, le particelle da 5 µm possono formare una zona di raccolta più chiaramente osservabile rispetto alle perle più piccole.

Ciò può aiutare i ricercatori a monitorare:

• Se la raccolta delle perline è completa;

• Se le particelle vengono perse durante l'aspirazione;

• Se è avvenuta l'aggregazione;

• Se il lavaggio è coerente;

• Se le particelle raccolte sono state completamente ridisperse.

La raccolta magnetica effettiva dipende dal contenuto di materiale magnetico, dalla concentrazione delle sfere, dalla forza del magnete, dalla geometria del recipiente, dalla viscosità del tampone e dal volume del campione.

Pratici lavaggi ripetuti

I test immunologici in chemiluminescenza richiedono comunemente diversi cicli di raccolta e lavaggio magnetici.

MSA5UM-10 può essere valutato per flussi di lavoro che richiedono:

• Recupero magnetico ripetibile;

• Rimozione controllata del surnatante;

• Bassa perdita di tallone;

• Lavaggio costante;

• Ridispersione completa delle sfere;

• Volume residuo stabile;

• Precisione analitica ripetibile.

Adatto per lo sviluppo manuale e automatizzato

Le caratteristiche di raccolta visibili delle sfere più grandi su scala micrometrica possono essere utili durante lo sviluppo manuale e la risoluzione dei problemi.

MSA5UM-10 può anche essere valutato con analizzatori automatizzati, ma la compatibilità deve essere convalidata per il sistema specifico.

I parametri importanti includono:

• Miscelazione reagente-serbatoio;

• Precisione nell'erogazione delle microsfere;

• Dimensioni del puntale della pipetta;

• Dimensioni dei tubi;

• Geometria della tazza di reazione;

• Posizione del magnete;

• Tempo di raccolta magnetica;

• Altezza di aspirazione;

• Volume di lavaggio;

• Ridispersione delle perle;

• Riporto.

TargetMol e BeaverBio posizionano entrambi i loro prodotti a base di streptavidina da 5 µm per test immunologici o applicazioni automatizzate ad alta produttività, ma la compatibilità effettiva rimane specifica dello strumento.

Importante compromesso sulla superficie

Rispetto alle particelle più piccole con composizione e densità simili, le sfere da 5 µm generalmente forniscono meno particelle e una minore area superficiale geometrica per unità di massa.

Pertanto, un protocollo sviluppato utilizzando sfere da 1 µm non deve essere trasferito direttamente su sfere da 5 µm senza riottimizzazione:

• Dosaggio delle perle;

• Rapporto ligando-perlina;

• Tempo di caricamento;

• Miscelazione;

• Tempo di incubazione del campione;

• Lavaggio;

• Concentrazione finale delle perle.

La migliore dimensione delle particelle deve essere selezionata in base alle prestazioni del test funzionale piuttosto che in base al solo diametro nominale.

Sfere di streptavidina da 5 µm rispetto a 3 µm, 2,8 µm e 1 µm

Differenze nella chimica della superficie, nella distribuzione delle dimensioni delle particelle, nel carico magnetico, nella densità della streptavidina, nella formulazione bloccante e nel tampone di sospensione possono essere più importanti di una piccola differenza nel diametro nominale.

Un confronto affiancato dovrebbe valutare:

• Caricamento di anticorpi biotinilati;

• Efficienza nella cattura del bersaglio;

• Segnale vuoto;

• Segnale positivo;

• Rapporto segnale/fondo;

• Recupero magnetico;

• Efficienza di lavaggio;

• Ridispersione;

• Precisione;

• Stabilità;

• Compatibilità dello strumento.

Applicazioni nei test immunologici in chemiluminescenza

Saggi immunologici a sandwich magnetico

Un anticorpo di cattura biotinilato può essere caricato su MSA5UM-10.

Le particelle caricate con anticorpi catturano l'antigene bersaglio dal campione. Un anticorpo di rilevamento marcato forma quindi un complesso immunitario a sandwich.

Dopo la raccolta e il lavaggio magnetico, l'etichetta di rilevamento genera il segnale chemiluminescente.

Importanti variabili di sviluppo includono:

• Dosaggio delle perle;

• Caricamento di anticorpi di cattura;

• Grado di biotinilazione degli anticorpi;

• Volume del campione;

• Cattura il tempo;

• Concentrazione di anticorpi di rilevamento;

• Efficienza di lavaggio;

• Substrato chemiluminescente;

• Rapporto segnale/fondo.

Saggi diretti di chemiluminescenza

MSA5UM-10 può essere valutato in sistemi di chemiluminescenza diretta utilizzando un ligando biotinilato adatto e un reagente di riconoscimento marcato con segnale.

Le sfere commerciali di streptavidina da 5 µm esatte sono posizionate specificatamente per la chemiluminescenza basata su particelle magnetiche e il rilevamento di anticorpi neutralizzanti.

Le prestazioni di MSA5UM-10 devono essere convalidate in modo indipendente nel sistema di reagenti completo.

Saggi indiretti di chemiluminescenza

Le particelle possono essere valutate con:

• Anticorpi secondari biotinilati;

• Anticorpi anti-specie biotinilati;

• Proteine ​​di affinità biotinilate;

• Peptidi biotinilati;

• Aptameri biotinilati.

Ricerca sui test di elettrochemiluminescenza

MSA5UM-10 può essere valutato nella ricerca immunologica in elettrochemiluminescenza.

La compatibilità deve essere confermata con:

• Modulo di posizionamento magnetico;

• Configurazione degli elettrodi;

• Etichetta elettrochemiluminescente;

• Tampone di reazione;

• Recipiente di reazione;

• Sistema fluidico;

• Sequenza di lavaggio;

• Programma per la lettura dei segnali.

Saggi di rilevamento degli anticorpi

Un antigene biotinilato può essere immobilizzato su MSA5UM-10 per catturare gli anticorpi bersaglio dai campioni di ricerca.

Le potenziali applicazioni includono:

• Ricerca sugli anticorpi contro le malattie infettive;

• Saggi di autoanticorpi;

• Studi sulla risposta ai vaccini;

• Valutazione dell'antigene ricombinante;

• Monitoraggio della risposta anticorpale.

Saggi immunologici competitivi

Antigeni biotinilati, apteni o coniugati di piccole molecole possono essere immobilizzati per lo sviluppo di test immunologici competitivi.

Questo formato può essere valutato quando l'analita target non può supportare una struttura sandwich convenzionale a due anticorpi.

Arricchimento immunomagnetico

I ligandi di affinità biotinilati caricati su MSA5UM-10 possono essere valutati per l'arricchimento di:

• proteine;

• antigeni;

• cellule;

• Microrganismi;

• Particelle biologiche;

• Altri obiettivi riconosciuti dall'affinità.

Cattura dell'acido nucleico e dell'aptamero

Le sonde di DNA, RNA o aptameri biotinilati possono essere immobilizzate per:

• Saggi di ibridazione;

• Arricchimento di acidi nucleici;

• Cattura del bersaglio prima dell'amplificazione;

• Rilevamento basato su aptameri;

• Sviluppo di biosensori;

• Ricerca diagnostica molecolare;

• Studi di interazione DNA-proteine.

I prodotti commerciali a base di streptavidina da 5 µm sono commercializzati per sonde di acido nucleico biotinilato, studi di interazione DNA-proteina e separazione magnetica di biomolecole.

Anticorpi biotinilati e biomolecole compatibili

Anticorpi biotinilati

Importanti variabili anticorpali includono:

• Purezza degli anticorpi;

• Concentrazione di anticorpi;

• Chimica della biotinilazione;

• Grado di biotinilazione;

• Posizione della biotina;

• Aggregazione di anticorpi;

• Mantenimento dell'attività legante l'antigene;

• Tampone della formulazione originale.

Una biotinilazione eccessiva può ridurre l'attività biologica o produrre un orientamento sfavorevole sulla superficie della biglia magnetica.

Una biotinilazione insufficiente può ridurre il caricamento delle sfere e la cattura del bersaglio.

Antigeni biotinilati

Gli antigeni biotinilati possono essere utilizzati per i test di rilevamento degli anticorpi.

Lo sviluppatore deve confermare che la biotinilazione non modifica o blocca un epitopo antigenico critico.

Peptidi biotinilati

Le potenziali applicazioni includono:

• Screening degli anticorpi;

• Analisi degli epitopi;

• Saggi immunologici competitivi;

• Ricerca sull'interazione delle proteine;

• Cattura dell'affinità.

Oligonucleotidi biotinilati

La biotina può essere introdotta all'estremità 5', all'estremità 3' o in un'altra posizione convalidata.

La posizione di modifica dovrebbe preservare l'ibridazione, il riconoscimento del bersaglio o l'attività dell'aptamero dopo l'immobilizzazione.

Proteine ​​ed enzimi biotinilati

Le proteine ​​o gli enzimi ricombinanti biotinilati possono essere valutati per:

• Studi sull'interazione delle proteine;

• Saggi enzimatici;

• Arricchimento di affinità;

• Sviluppo di biosensori;

• Preparazione del materiale di calibrazione.

Flusso di lavoro consigliato per il caricamento del ligando biotinilato

Il seguente flusso di lavoro è un framework di sviluppo generale. Non è un protocollo specifico del prodotto convalidato.

Passaggio 1: caratterizzare il ligando biotinilato

Documentazione:

• Identità del ligando;

• Peso molecolare;

• Concentrazione;

• Purezza;

• Formulazione originale;

• Metodo di biotinilazione;

• Grado stimato di biotinilazione;

• Attività biologica;

• Stato di aggregazione;

• Additivi stabilizzanti.

Passaggio 2: rimuovere la biotina libera in eccesso

La biotina libera può occupare i siti di legame della streptavidina disponibili e ridurre il carico dell'anticorpo, antigene, proteina o oligonucleotide biotinilato previsto.

I potenziali metodi di purificazione includono:

• Dissalazione;

• Dialisi;

• Cromatografia ad esclusione dimensionale;

• Ultrafiltrazione;

• HPLC o FPLC ove appropriato;

• Un altro metodo di purificazione convalidato.

Passaggio 3: risospendere completamente MSA5UM-10

Mescolare la sospensione originale fino a renderla omogenea prima del campionamento.

I metodi possibili includono:

• Inversione delicata;

• Miscelazione a rulli;

• Rotazione end-over-end;

• Vortex controllato;

• Un altro metodo di miscelazione convalidato.

Poiché le particelle da 5 µm possono depositarsi in modo più evidente rispetto alle sfere più piccole, mantenere una miscelazione adeguata durante la preparazione di più aliquote.

Evitare un'eccessiva formazione di schiuma.

Passaggio 4: calcolare la massa della perla richiesta

Supponendo una concentrazione di 10 mg/ml:

Massa delle sfere = volume della sospensione × 10 mg/ml

Preparare più gruppi di dosi di microsfere anziché testare una sola condizione.

Passaggio 5: lavare o equilibrare le perle

Raccogliere le particelle utilizzando un separatore magnetico compatibile.

Rimuovere il mezzo di sospensione originale quando necessario ed equilibrare le sfere in un tampone di caricamento del ligando convalidato.

Non lasciare asciugare le sfere magnetiche.

Passaggio 6: aggiungere il ligando biotinilato

Valutare diversi rapporti ligando-perlina.

I possibili gruppi sperimentali includono:

• Basso carico di ligandi;

• Carico medio di ligandi;

• Elevato carico di ligandi;

• Tempi di incubazione diversi;

• Temperature diverse;

• Differenti formulazioni tampone.

Passaggio 7: mantenere una miscelazione delicata

Utilizzare una miscelazione sufficiente per mantenere un contatto uniforme tra microsfere e ligando senza danneggiare il ligando biologico.

Per le sfere da 5 µm, la miscelazione dovrebbe essere sufficiente per evitare una sedimentazione irregolare durante la reazione di caricamento.

Passaggio 8: raccogliere magneticamente le perline caricate

Standardizzare:

• Tipo di magnete;

• Nave;

• Volume di reazione;

• Concentrazione delle perle;

• Orario di ritiro;

• Posizione della raccolta;

• Volume liquido residuo.

Passaggio 9: conservare il surnatante

Conservare il surnatante post-caricamento quando è necessario misurare l'efficienza di caricamento dei ligandi.

Passaggio 10: lavare le perline caricate

Rimuovere:

• Legante biotinilato non legato;

• Biotina libera residua;

• Componenti della formulazione indesiderati;

• Altri materiali non legati.

Passaggio 11: risospendere nel tampone finale

I potenziali componenti della formulazione includono:

• Respingente;

• Sale;

• Stabilizzatore proteico;

• Polimero sintetico;

• Tensioattivo;

• Conservante;

• Zucchero o poliolo;

• Componente di blocco.

Passaggio 12: valutare le prestazioni funzionali

I test consigliati includono:

• Efficienza di caricamento dei ligandi;

• Capacità di cattura del bersaglio;

• Segnale vuoto;

• Segnale positivo;

• Rapporto segnale/fondo;

• Recupero magnetico;

• Ridispersione delle perle;

• Precisione;

• Stabilità accelerata;

• Stabilità in tempo reale.

Come ottimizzare MSA5UM-10 in un test immunologico

Ottimizza il dosaggio delle microsfere

Confrontare diverse quantità di sferette nel test completo.

Un numero troppo basso di sfere potrebbe limitare la cattura del bersaglio.

Troppe perle potrebbero aumentare:

• Consumo di reagenti;

• Segnale vuoto;

• Adsorbimento non specifico;

• Requisiti di lavaggio;

• Interferenza residua del cordone;

• Riporto dello strumento.

Ottimizza il caricamento del ligando biotinilato

Valutare diverse quantità di anticorpo o antigene biotinilato per milligrammo di sfere magnetiche.

La condizione di carico di ligando più elevata non è necessariamente la migliore condizione analitica.

Un carico eccessivo può causare:

• Affollamento sterico;

• Ridotta accessibilità al target;

• Legame non specifico più elevato;

• Attività funzionale ridotta;

• Scarsa stabilità di archiviazione.

Ottimizza il grado di biotinilazione

Confrontare ligandi con diversi livelli di biotinilazione.

Valutare:

• Efficienza di caricamento delle microsfere;

• Mantenimento dell'attività biologica;

• Prestazioni di acquisizione del bersaglio;

• Segnale vuoto;

• Segnale positivo;

• Precisione;

• Stabilità.

Ottimizza la miscelazione

Poiché le particelle da 5 µm possono depositarsi durante l'incubazione, valutare:

• Miscelazione continua e intermittente;

• Velocità di rotazione;

• Velocità di agitazione;

• Durata della miscelazione;

• Geometria del recipiente di reazione;

• Uniformità del cordone;

• Formazione di schiuma;

• Stabilità del ligando.

Ottimizza la separazione magnetica

Valutare:

• Forza del magnete;

• Posizione del magnete;

• Orario di ritiro;

• Geometria del recipiente di reazione;

• Concentrazione delle perle;

• Viscosità tampone;

• Liquido residuo;

• Perdita di sfere durante l'aspirazione.

Ottimizza il lavaggio

Confrontare:

• Composizione del tampone di lavaggio;

• Concentrazione del tensioattivo;

• Volume di lavaggio;

• Numero di cicli di lavaggio;

• Miscelazione durante il lavaggio;

• Tempo di raccolta magnetica;

• Volume di lavaggio residuo.

Un lavaggio insufficiente può aumentare lo sfondo. Un lavaggio eccessivo o aggressivo può ridurre il recupero delle sfere o influenzare i componenti sensibili del test.

Ottimizza la formulazione di blocco e archiviazione

Le potenziali variabili di formulazione includono:

• Bloccanti delle proteine;

• Polimeri bloccanti sintetici;

• Tensioattivi non ionici;

• Forza ionica;

• Zuccheri;

• Polioli;

• Conservanti.

La formulazione finale dovrebbe supportare la dispersione delle sfere, un fondo basso, l'attività della streptavidina e la stabilità del ligando.

Ottimizza i parametri dell'analizzatore automatizzato

Per lo sviluppo CLIA automatizzato, valutare:

• Frequenza di miscelazione reagente-serbatoio;

• Precisione nell'erogazione delle microsfere;

• assestamento in stand-by;

• Miscelazione per incubazione;

• Tempo di raccolta magnetica;

• Altezza di aspirazione;

• Cicli di lavaggio;

• Volume residuo;

• Ridispersione delle perle;

• Riporto.

Come valutare le prestazioni leganti la biotina

Capacità totale di legame della biotina

È possibile utilizzare un reagente marcato con biotina per stimare i siti di legame della streptavidina disponibili.

I fornitori utilizzano molecole e metodi di test diversi. Ad esempio, i concorrenti con precisione di 5 µm riportano separatamente la capacità per sonde corte di acido nucleico biotinilato e biotina-IgG, mentre altri fornitori riportano la capacità di biotina libera in pmol per milligrammo.

MSA5UM-10 dovrebbe avere un proprio metodo di prova convalidato e un intervallo di accettazione interno.

Caricamento di anticorpi biotinilati

Misurare la quantità di anticorpi prima e dopo il caricamento.

Un calcolo approssimativo è:

Anticorpo caricato = Anticorpo iniziale - Anticorpo non legato

I possibili metodi analitici includono:

• Assorbimento UV;

• dosaggio BCA;

• saggio di Bradford;

• Misurazione della fluorescenza;

• ELISA;

• Un altro test proteico convalidato.

Capacità funzionale di cattura del bersaglio

Il caricamento chimico non conferma che l'anticorpo o l'antigene rimanga biologicamente attivo.

I test funzionali dovrebbero misurare l'effettiva cattura del bersaglio in condizioni di analisi rappresentative.

Legame non specifico

Confrontare:

• Perline di streptavidina scariche;

• Sfere caricate con ligando;

• Perle bloccate;

• Campioni negativi;

• Campioni positivi;

• Materiali interferenti rappresentativi.

Recupero magnetico

Misurare il recupero delle microsfere dopo ripetuti prelievi magnetici e lavaggi.

Prestazioni del test immunologico

Valutare:

• Segnale vuoto;

• Segnale di campione negativo;

• Segnale basso-positivo;

• Segnale altamente positivo;

• Rapporto segnale/fondo;

• Precisione;

• Recupero;

• Linearità;

• Specificità;

• Effetto gancio;

• Stabilità.

Controllo qualità per ricerca e produzione in lotti

Aspetto e dispersione

Ispezionare:

• Aspetto della sospensione;

• Aggregazione visibile;

• Comportamento alla sedimentazione;

• Omogeneità dopo la miscelazione;

• Facilità di ridispersione;

• La stabilità durante la lavorazione è mantenuta.

Dimensione e distribuzione delle particelle

Confermare la dimensione nominale delle particelle di 5 µm utilizzando un metodo convalidato appropriato.

Per la produzione in lotti, monitorare sia la dimensione media delle particelle che la distribuzione delle dimensioni delle particelle.

Contenuto di solidi

Verificare la concentrazione dei solidi perché influisce:

• Calcoli della massa delle sfere;

• Calcoli del caricamento del ligando;

• Formulazione del test;

• Precisione di riempimento;

• Resa produttiva.

Attività della streptavidina

Utilizzare un test standardizzato di legame della biotina per valutare l'attività funzionale della streptavidina sulla superficie delle sfere.

Capacità di legare la biotina

Stabilire un metodo di prova convalidato e un intervallo di accettazione interna.

I valori della concorrenza dovrebbero essere utilizzati solo come informazioni di benchmarking, non come specifiche per MSA5UM-10.

Caricamento di anticorpi biotinilati

Utilizzare un anticorpo biotinilato rappresentativo per valutare le prestazioni pratiche di caricamento del ligando.

Prestazioni della raccolta magnetica

Standardizzare:

• Magnete;

• Nave;

• Volume del campione;

• Respingente;

• Concentrazione delle perle;

• Temperatura;

• Orario di raccolta.

Legame non specifico

Valutare il background utilizzando proteine, anticorpi e matrici di campioni rappresentativi.

Prestazioni del test immunologico funzionale

I test consigliati includono:

• Segnale vuoto;

• Segnale di campione negativo;

• Segnale di campione positivo;

• Rapporto segnale/fondo;

• Sensibilità analitica;

• Precisione;

• Recupero;

• Linearità;

• Specificità;

• Stabilità.

Coerenza tra lotti

Per la produzione di routine, stabilire intervalli di accettazione per:

• Dimensione delle particelle;

• Distribuzione granulometrica;

• Contenuto di solidi;

• Attività della streptavidina;

• Capacità di legare la biotina;

• Raccolta magnetica;

• Dispersione;

• Legame non specifico;

• Prestazioni del test immunologico funzionale.

L'approvazione finale delle materie prime dovrebbe basarsi sulle prestazioni del sistema di analisi completo.

Ampliamento e fornitura in grandi quantità per i produttori di test immunologici

Fase di valutazione

I campioni di valutazione possono supportare lo screening di:

• Anticorpi di cattura biotinilati;

• Antigeni biotinilati;

• Dosaggio delle perle;

• Livello di caricamento del ligando;

• Formulazione bloccante;

• Separazione magnetica;

• Sensibilità del test;

• Segnale di fondo.

Stadio su scala pilota

Le quantità pilota possono supportare:

• Conferma del processo di caricamento del ligando;

• Formulazione dei reagenti;

• Test di compatibilità dell'analizzatore;

• Studi di stabilità;

• Valutazione del processo di riempimento;

• Test iniziali di consistenza del lotto.

Fase di produzione in lotti

La pianificazione della fornitura in blocco può includere:

• Domanda annuale;

• Previsioni d'acquisto;

• Volume dell'imballaggio;

• Specifiche di qualità;

• Documentazione tecnica;

• Documentazione di qualità;

• Requisiti del lotto riservato;

• Aspettative di controllo del cambiamento;

• Pianificazione delle scorte di sicurezza.

I concorrenti di 5 µm esatti offrono formati da 1 ml, fiale multiple, 5 ml o 10 ml, mentre alcuni fornitori forniscono anche canali di quotazione all'ingrosso. Ciò dimostra che un imballaggio scalabile e una fornitura a lungo termine sono requisiti di acquisto importanti in questa categoria di prodotti.

Considerazioni sullo scale-up

Una procedura di caricamento dei ligandi in laboratorio non deve essere ridimensionata solo moltiplicando i volumi dei reagenti.

Riconvalidare:

• Geometria della nave;

• Efficienza di miscelazione;

• Omogeneità delle perline;

• Sequenza di addizione del ligando;

• Tempo di incubazione;

• Uniformità della temperatura;

• Raccolta magnetica;

• Efficienza di lavaggio;

• Tempo di attesa del processo;

• Uniformità di riempimento finale.

Per le particelle da 5 µm, è particolarmente importante mantenere una sospensione omogenea durante il caricamento e il riempimento.

Servizi personalizzati con microsfere magnetiche di streptavidina

SHBC è in grado di valutare i requisiti personalizzati di sfere magnetiche di streptavidina per aziende biotecnologiche, istituti di ricerca e produttori di test immunologici.

Le potenziali opzioni di personalizzazione includono:

• Dimensioni delle particelle alternative;

• Contenuto di solidi personalizzato;

• Carico di streptavidina aggiustato;

• Obiettivi leganti la biotina specifici del cliente;

• Sistemi di blocco alternativi;

• Tampone di sospensione personalizzato;

• Sistemi conservanti alternativi;

• pH specificato dal cliente;

• Volumi di imballi speciali;

• Produzione su scala pilota;

• Produzione in serie;

• Imballaggio OEM;

• Servizi a marchio privato;

• Test di qualità specifici per il cliente.

La fattibilità della personalizzazione dipende dalle specifiche richieste, dall'applicazione prevista, dai requisiti di convalida e dalla quantità dell'ordine.

Raccomandazioni per la conservazione e la manipolazione

Conservare MSA5UM-10 secondo l'etichetta del prodotto, la scheda tecnica e il certificato di analisi specifico del lotto.

Le raccomandazioni generali per la gestione includono:

• Mescolare accuratamente prima del campionamento;

• Mantenere l'uniformità della sospensione durante l'erogazione;

• Utilizzare attrezzature pulite e calibrate;

• Evitare che le sfere magnetiche si asciughino;

• Prevenire la contaminazione microbica e chimica;

• Evitare il congelamento se non espressamente validato;

• Evitare l'esposizione non necessaria a temperature estreme;

• Confermare la compatibilità del buffer prima dello scambio del buffer;

• Prevenire la contaminazione con biotina libera;

• Registrare il numero di lotto del prodotto;

• Valutare separatamente la stabilità delle sfere caricate con il ligando.

Le istruzioni commerciali relative alle sfere di streptavidina da 5 µm raccomandano comunemente un'accurata miscelazione prima del campionamento, evitando la formazione di bolle e prevenendo il congelamento. Le condizioni specifiche del prodotto per MSA5UM-10 devono essere confermate utilizzando la propria documentazione tecnica.

Domande frequenti

Cos'è MSA5UM-10?

MSA5UM-10 è una sospensione di sfere magnetiche streptavidina-funzionali da 5 µm fornita all'1% di solidi per catturare biomolecole biotinilate nella ricerca sui test immunologici, nello sviluppo di CLIA e nella produzione in lotti.

Cosa significa 1% di solidi?

Se espresso come p/v, l'1% di solidi corrisponde a circa 10 mg di sfere magnetiche per millilitro di sospensione.

Quali molecole può catturare MSA5UM-10?

MSA5UM-10 può essere valutato per il legame di anticorpi biotinilati, antigeni, proteine, peptidi, aptameri, DNA, RNA e altre molecole marcate con biotina.

Qual è il principio vincolante?

La biotina sul ligando selezionato si lega alla streptavidina immobilizzata sulla superficie della biglia magnetica.

MSA5UM-10 richiede l'attivazione EDC o NHS?

Normalmente non è necessaria alcuna attivazione aggiuntiva delle sfere EDC/NHS per caricare un ligando adeguatamente biotinilato.

È incluso un anticorpo di cattura?

No. MSA5UM-10 viene fornito come materia prima con sfere magnetiche di streptavidina. Il cliente seleziona e prepara il ligando di cattura biotinilato richiesto.

La sospensione all'1% è pronta per l'uso diretto?

Non necessariamente. La concentrazione di lavoro ottimale dipende dal ligando, dalla concentrazione target, dal volume del test, dalla matrice del campione e dall'analizzatore.

Perché scegliere una dimensione delle particelle di 5 µm?

Il formato da 5 µm può essere valutato quando un progetto richiede un supporto magnetico su scala micrometrica più grande, una raccolta chiaramente osservabile, lavaggi ripetuti o compatibilità con una specifica di materia prima esistente da 5 µm.

In cosa differiscono le perle da 5 µm dalle perle da 3 µm?

Rispetto alle particelle da 3 µm di composizione simile, le particelle da 5 µm generalmente forniscono meno sfere e una minore area superficiale geometrica per unità di massa, pur mostrando un diverso comportamento di sedimentazione, raccolta magnetica e manipolazione.

In cosa differiscono le sfere da 5 µm da quelle da 1 µm?

Il formato da 1 µm generalmente fornisce più particelle e una maggiore area superficiale geometrica per unità di massa. Il formato da 5 µm può fornire una raccolta più visibile ma richiede maggiore attenzione alla miscelazione e alla sedimentazione.

Le sfere magnetiche da 5 µm si depositano?

Durante la conservazione e l'incubazione possono depositarsi particelle di dimensioni micrometriche. La sospensione deve essere miscelata prima del campionamento e mantenuta in adeguata miscelazione durante la lavorazione.

È possibile utilizzare MSA5UM-10 per i test immunologici in chemiluminescenza?

MSA5UM-10 può essere valutata come fase solida magnetica nello sviluppo CLIA. La compatibilità con il sistema di reagenti completo e l'analizzatore deve essere convalidata.

Può essere valutato per test di elettrochemiluminescenza?

Il prodotto può essere valutato nella ricerca ECL. La compatibilità con l'elettrodo, il sistema di posizionamento magnetico, la fluidica e la chimica del segnale deve essere confermata sperimentalmente.

MSA5UM-10 può essere utilizzato con analizzatori automatizzati?

Può essere valutato per sistemi automatizzati. La dispensazione, la miscelazione, la raccolta magnetica, l'aspirazione, il lavaggio e la ridispersione devono essere validate sull'analizzatore specifico.

Quanto anticorpo biotinilato dovrebbe essere caricato?

La quantità ottimale dipende dalla capacità legante convalidata, dal peso molecolare dell'anticorpo, dal grado di biotinilazione e dai requisiti del test. È necessario confrontare diversi livelli di carico.

Una quantità maggiore di anticorpi migliora sempre la sensibilità?

No. Un carico eccessivo di ligandi può causare affollamento sterico, ridurre l'accessibilità al bersaglio e aumentare il legame non specifico.

La biotina libera può interferire con il caricamento?

SÌ. La biotina libera può occupare i siti di legame della streptavidina e ridurre il carico dell'anticorpo, antigene o sonda biotinilata prevista.

Come si può misurare l’efficienza di caricamento dei ligandi?

Confrontare la quantità di ligando iniziale con la quantità rimanente nel surnatante post-caricamento. Dovrebbe essere misurata anche l’attività funzionale di cattura del bersaglio.

Gli anticorpi non biotinilati possono legarsi in modo specifico?

Non si prevede che gli anticorpi non biotinilati si leghino specificamente attraverso l’interazione streptavidina-biotina. Il legame osservato può derivare da un adsorbimento non specifico.

Come dovrebbe essere miscelato MSA5UM-10?

Miscelare utilizzando un metodo convalidato come inversione, miscelazione con rulli, rotazione end-over-end o vortex controllato fino a quando la sospensione risulta omogenea.

Cosa bisogna controllare se la raccolta magnetica è incompleta?

Controllo:

• Forza del magnete;

• Orario di ritiro;

• Concentrazione delle perle;

• Viscosità tampone;

• Aggregazione di particelle;

• Geometria della nave.

Cosa dovrebbe essere controllato se il carico di ligando è basso?

Valutare:

• Grado di biotinilazione;

• Contaminazione da biotina libera;

• Concentrazione del ligando;

• Quantità di perline;

• Tempo di caricamento;

• Compatibilità buffer;

• Aggregazione dei ligandi.

Cosa è necessario controllare se il background del test è elevato?

Valutare:

• Formulazione bloccante;

• Dosaggio delle perle;

• Densità di caricamento del ligando;

• Efficienza di lavaggio;

• Matrice del campione;

• Adsorbimento non specifico;

• Concentrazione del reagente di rilevamento.

MSA5UM-10 è un reagente diagnostico finito?

No. MSA5UM-10 viene fornito come materia prima per la ricerca e lo sviluppo di reagenti. Il cliente è responsabile della convalida del reagente finito, del processo di produzione e dell'applicazione prevista.

Sono disponibili campioni di valutazione?

I campioni di valutazione possono essere discussi in base all'applicazione prevista, al ligando biotinilato e alla quantità di test richiesta.

È disponibile la fornitura in grandi quantità?

È possibile organizzare forniture su scala pilota e in grandi quantità per progetti qualificati di ricerca, sviluppo e produzione.

È possibile personalizzare la concentrazione, il tampone o l'imballaggio?

Il contenuto di solidi personalizzato, il caricamento di streptavidina, il tampone di sospensione, il sistema di bloccaggio e il formato di imballaggio possono essere valutati in base ai requisiti del progetto.

Richiedi un campione o un preventivo in blocco

Contattare SHBC per richiedere un campione di valutazione, informazioni tecniche o un preventivo per quantità di microsfere magnetiche di streptavidina MSA5UM-10 da 5 µm.

Si prega di fornire:

• Applicazione prevista per il test immunologico;

• Anticorpo, antigene o altro ligando biotinilato;

• Peso molecolare del ligando;

• Metodo di biotinilazione;

• Grado stimato di biotinilazione;

• Quantità di valutazione richiesta;

• Quantità pilota stimata;

• Domanda annua prevista;

• Volume di imballaggio preferito;

• Documenti tecnici richiesti;

• Documenti di qualità richiesti;

• Programma di sviluppo degli obiettivi;

• Requisiti delle specifiche personalizzate.

SHBC supporta i progetti relativi alle sfere magnetiche di streptavidina, dalla valutazione iniziale del caricamento dei ligandi e dall'ottimizzazione dei test immunologici alla produzione pilota e alla produzione in serie.