Perlas magnéticas de estreptavidina de 20 um MSA10UM-10 MSA10UM-10

Perlas magnéticas de estreptavidina de 20 µm MSA20UM-10

MSA20UM-10 es una suspensión de perlas magnéticas con función de estreptavidina de 20 µm suministrada con un 1 % de sólidos.

El producto está desarrollado para capturar e inmovilizar anticuerpos, antígenos, proteínas, péptidos, aptámeros, oligonucleótidos y otras biomoléculas marcadas con biotina.

MSA20UM-10 se puede evaluar como una fase sólida magnética de partículas grandes para la investigación de inmunoensayos, el desarrollo de inmunoensayos de quimioluminiscencia, el enriquecimiento de objetivos, el pretratamiento de muestras, la captura por afinidad, la separación inmunomagnética, el desarrollo de procesos y la fabricación de reactivos por lotes.

La estreptavidina inmovilizada en la superficie de la perla magnética se une a ligandos biotinilados sin necesidad de que el usuario final active la superficie de la perla usando EDC, NHS, glutaraldehído u otro reactivo de activación química.

Después de cargar un ligando de captura biotinilado seleccionado, las perlas magnéticas funcionalizadas se pueden usar para la captura del objetivo, la recolección magnética, el lavado repetido y la detección de señales posteriores.

MSA20UM-10 está destinado a empresas de biotecnología, desarrolladores de inmunoensayos, instituciones de investigación y fabricantes de reactivos que requieren un portador magnético de estreptavidina definido de 20 µm para evaluación de laboratorio, validación a escala piloto y suministro a granel.

Debido a que 20 µm es un tamaño de partícula relativamente grande para una fase sólida magnética analítica, la compatibilidad con el ensayo, el separador magnético, el sistema de manejo de líquidos y el analizador previstos debe validarse experimentalmente.

Descripción general del producto

Las perlas magnéticas de estreptavidina proporcionan una plataforma de afinidad flexible para inmovilizar biomoléculas biotiniladas en una fase sólida magnética recuperable.

El sistema estreptavidina-biotina permite inmovilizar diferentes anticuerpos, antígenos, proteínas y sondas de ácido nucleico biotinilados en la misma plataforma de perlas.

Las series comerciales de perlas magnéticas de estreptavidina incluyen productos exactos de 20 µm, mientras que también se utilizan formatos más grandes de 30 a 50 µm para la carga de anticuerpos, el inmunoenriquecimiento y la preparación de muestras.

MSA20UM-10 puede evaluarse para:

• Inmovilización con anticuerpos biotinilados;

• Inmovilización de antígeno biotinilado;

• Inmunoensayos tipo sándwich magnético;

• Ensayos de detección de anticuerpos;

• Inmunoensayos competitivos;

• Investigación de inmunoensayos de quimioluminiscencia;

• Investigación de ensayos de electroquimioluminiscencia;

• Pretratamiento de la muestra;

• Enriquecimiento de objetivos;

• Captura por afinidad;

• Separación inmunomagnética;

• Estudios de interacción de proteínas;

• Captura de ácido nucleico biotinilado;

• Investigación de separación de células o microorganismos;

• Validación de procesos a escala piloto;

• Fabricación de reactivos por lotes.

MSA20UM-10 se suministra como materia prima para investigación y desarrollo de reactivos. No se suministra como reactivo de diagnóstico terminado.

MSA20UM-10 Especificaciones del producto

Cuando la especificación del 1% de sólidos se expresa como peso por volumen, corresponde aproximadamente a 10 mg de material de perlas por mililitro. La base de concentración debe confirmarse en la TDS del producto aplicable.

Los siguientes parámetros específicos del producto deben confirmarse mediante la TDS aplicable y el CoA específico del lote:

• Distribución del tamaño de partículas;

• Matriz de partículas;

• Contenido de material magnético;

• carga de estreptavidina;

• Actividad funcional de estreptavidina;

• Capacidad libre de unión a biotina;

• Capacidad de carga de IgG biotinilada;

• Capacidad de carga de oligonucleótidos biotinilados;

• Unión no específica;

• Rendimiento de recogida magnética;

• Tampón de suspensión;

• Formulación bloqueante;

• Sistema conservante;

• Temperatura de almacenamiento;

• Duración;

• Criterios de liberación de lotes.

Los datos de desempeño de la competencia solo deben usarse para realizar evaluaciones comparativas del mercado. No debe presentarse como especificaciones MSA20UM-10.

¿Qué son las perlas magnéticas de estreptavidina de 20 µm?

Las perlas magnéticas de estreptavidina de 20 µm son microesferas magnéticas con un diámetro nominal de aproximadamente 20 micrómetros y estreptavidina inmovilizada en su superficie.

La superficie de estreptavidina captura ligandos biotinilados, mientras que el componente magnético permite que las partículas se recojan utilizando un separador magnético compatible.

En comparación con las perlas magnéticas analíticas de 1 µm, 2,8 µm o 3 µm comúnmente utilizadas, las perlas de 20 µm representan una fase sólida magnética de partículas grandes.

Para partículas esféricas con composición y densidad similares, el aumento del diámetro de las partículas generalmente da como resultado:

• Menos partículas por unidad de masa;

• Menor superficie geométrica teórica por unidad de masa;

• Asentamiento más pronunciado impulsado por la gravedad;

• Una zona de recogida magnética más visible;

• Mayor importancia del control de mezcla y dosificación;

• Diferentes requisitos de manipulación de líquidos.

El rendimiento real también depende de la densidad de las partículas, el contenido de material magnético, la distribución del tamaño de las partículas, el recubrimiento de la superficie, la densidad de la estreptavidina, el tampón de suspensión y el diseño del imán.

¿Cómo funciona la unión estreptavidina-biotina?

La estreptavidina inmovilizada en la superficie de la perla magnética reconoce la biotina unida a un anticuerpo, antígeno, proteína, péptido u oligonucleótido.

La estructura de afinidad resultante se puede representar como:

Perla magnética-estreptavidina-biotina-ligando

El ligando biotinilado proporciona reconocimiento de objetivos biológicos, mientras que la partícula magnética proporciona una fase sólida recuperable para separación, lavado y manipulación de reactivos.

Las partículas recubiertas de estreptavidina se utilizan ampliamente como matrices para capturar proteínas biotiniladas, inmunoglobulinas, ADN, ARN y otras moléculas marcadas con biotina.

Formato de anticuerpo de captura biotinilado

Un inmunoensayo tipo sándwich magnético puede incluir:

1. Preparar un anticuerpo de captura biotinilado.

2. Incubar el anticuerpo con MSA20UM-10.

3. Permita que los grupos de biotina se unan a la estreptavidina de superficie.

4. Recoja magnéticamente las perlas cargadas de anticuerpos.

5. Retire el anticuerpo no unido.

6. Resuspender las perlas cargadas en la formulación seleccionada.

7. Incubar las perlas con la muestra.

8. Capturar el antígeno objetivo.

9. Agregue un anticuerpo de detección marcado.

10. Recoge y lava magnéticamente el complejo inmunológico.

11. Genera la señal de detección seleccionada.

12. Mida la respuesta analítica.

Formato de antígeno biotinilado

Para un ensayo de detección de anticuerpos:

1. Preparar un antígeno biotinilado.

2. Cargue el antígeno en MSA20UM-10.

3. Retire el antígeno no unido.

4. Incubar las perlas funcionalizadas con la muestra.

5. Capture anticuerpos específicos del objetivo.

6. Agregue un anticuerpo secundario marcado.

7. Realizar recogida y lavado magnético.

8. Mida la señal resultante.

Formato de oligonucleótido biotinilado

Se pueden inmovilizar sondas de ADN, ARN o aptámeros biotinilados para:

• Captura de ácido nucleico;

• Ensayos de hibridación;

• Enriquecimiento de objetivos;

• Inmovilización de la sonda;

• Detección basada en aptámeros;

• Experimentos desplegables;

• Preparación de la muestra antes de la amplificación.

La posición y el grado de biotinilación deben seleccionarse para preservar la hibridación, el reconocimiento de objetivos o la actividad de los aptámeros.

Características clave de MSA20UM-10

Tamaño de partícula definido de 20 µm

MSA20UM-10 proporciona un formato de perla nominal definido de 20 µm en lugar de una amplia gama de partículas grandes.

Un tamaño de partícula controlado puede ayudar a los investigadores a estandarizar:

• Dispensación de cuentas;

• Carga de ligando;

• Colección magnética;

• Lavado;

• Redispersión;

• Pretratamiento de la muestra;

• Producción piloto;

• Comparación lote a lote.

Superficie funcional de estreptavidina

La superficie de la perla puede capturar diferentes ligandos biotinilados, incluidos:

• Anticuerpos monoclonales;

• Anticuerpos policlonales;

• Antígenos recombinantes;

• Proteínas naturales;

• Péptidos;

• enzimas;

• aptámeros;

• sondas de ADN;

• sondas de ARN;

• Oligonucleótidos;

• Conjugados de hapteno;

• Otras moléculas de reconocimiento marcadas con biotina.

Formulación de 1% de sólidos

Cuando se expresa como p/v, el 1 % de sólidos corresponde a aproximadamente 10 mg/ml.

Los cálculos aproximados de masa de cuentas son:

• 10 µl contienen aproximadamente 0,1 mg;

• 50 µl contienen aproximadamente 0,5 mg;

• 100 µl contienen aproximadamente 1 mg;

• 500 µL contienen aproximadamente 5 mg;

• 1 ml contiene aproximadamente 10 mg.

Estos cálculos solo deben usarse después de confirmar que la concentración del producto se expresa como p/v.

No se requiere activación adicional de cuentas

Normalmente se puede cargar un ligando biotinilado adecuadamente sin activar la superficie de la perla usando EDC/NHS u otro reactivo de acoplamiento covalente.

Esto puede simplificar el desarrollo porque se pueden comparar varias moléculas de captura biotiniladas utilizando la misma plataforma de perlas magnéticas.

Colección magnética claramente observable

Bajo un campo magnético apropiado, las partículas de 20 µm pueden formar una zona de recolección claramente observable.

Esto puede ayudar a los investigadores a monitorear:

• Finalización de la colección magnética;

• Pérdida de cuentas durante la aspiración;

• Agregación de partículas;

• Consistencia de lavado;

• Redispersión después de la recolección.

La recolección magnética real debe confirmarse utilizando el imán, el recipiente, la concentración de perlas, el volumen de muestra y la formulación del tampón previstos.

Adecuado para proyectos de investigación a producción

MSA20UM-10 puede admitir:

• Selección inicial de material;

• Evaluación de ligando biotinilado;

• Desarrollo de inmunoensayos;

• Optimización del pretratamiento de muestras;

• Estudios de enriquecimiento de objetivos;

• Evaluación de estabilidad;

• Procesamiento a escala piloto;

• Pruebas de coherencia de lotes;

• Adquisición de materia prima a granel.

¿Por qué elegir perlas magnéticas de estreptavidina de 20 µm?

Fase sólida magnética grande

MSA20UM-10 se puede evaluar cuando un proyecto requiere un portador magnético más grande que las perlas analíticas de 1 a 5 µm comúnmente utilizadas.

Las posibles razones incluyen:

• Colección magnética claramente observable;

• Lavado manual o semiautomático;

• Pretratamiento de la muestra;

• Enriquecimiento de objetivos;

• Captura de objetivos biológicos relativamente grandes;

• Compatibilidad con una especificación de material existente de 20 µm.

Cómodo monitoreo manual de procesos

Las perlas magnéticas grandes pueden ser más fáciles de observar durante:

• Colección magnética;

• Eliminación de sobrenadante;

• Lavado repetido;

• Inspección de agregación;

• Solución de problemas de pérdida de partículas;

• Pruebas de redispersión.

Potencial de enriquecimiento del objetivo

Los ligandos de afinidad biotinilados cargados en MSA20UM-10 se pueden evaluar para enriquecer o eliminar:

• Proteínas;

• Antígenos;

• Anticuerpos;

• Células;

• Microorganismos;

• Partículas biológicas;

• Ácidos nucleicos;

• Otros objetivos reconocidos por afinidad.

Los productos magnéticos de estreptavidina de partículas grandes se utilizan comercialmente para flujos de trabajo de preparación de muestras y inmunoenriquecimiento de anticuerpos.

Importante compensación de superficie

Para partículas esféricas con material y densidad similares, el aumento del diámetro de las partículas reduce el número de partículas y el área de superficie geométrica teórica por unidad de masa.

Un procedimiento desarrollado con perlas de 1 µm, 3 µm, 5 µm o 10 µm no debe transferirse directamente a perlas de 20 µm.

Se deben volver a optimizar los siguientes parámetros:

• Dosificación de perlas;

• Relación ligando-perla;

• Tiempo de carga de ligando;

• Condiciones de mezcla;

• tiempo de incubación objetivo;

• Condiciones de lavado;

• Concentración final de perlas.

La automatización requiere una validación cuidadosa

MSA20UM-10 puede evaluarse para sistemas automatizados o semiautomáticos seleccionados, pero no se debe asumir la compatibilidad.

Los principales elementos de validación incluyen:

• Mezcla de depósito de reactivo;

• Asentamiento de partículas durante el modo de espera;

• Diámetro interno de la punta de pipeta;

• Dimensiones de los tubos;

• Juego de válvulas;

• Precisión de dispensación de cuentas;

• Geometría del recipiente de reacción;

• Posición del imán;

• Tiempo de recogida magnética;

• Altura de aspiración;

• Eficiencia de lavado;

• Redispersión;

• Continuar;

• Riesgo de bloqueo fluídico.

Las perlas magnéticas de estreptavidina de partículas pequeñas a menudo se validan específicamente con plataformas automatizadas dedicadas, lo que ilustra por qué un producto de 20 µm debe probarse por separado con el instrumento previsto.

Cuentas magnéticas de estreptavidina de 20 µm frente a cuentas más pequeñas

El diámetro de las partículas no debería ser el único criterio de selección.

Otros factores importantes incluyen:

• Distribución del tamaño de partículas;

• Contenido de material magnético;

• Matriz de partículas;

• densidad de estreptavidina;

• Capacidad activa de unión a biotina;

• Formulación bloqueante;

• Unión no específica;

• Tampón de suspensión;

• Recuperación magnética;

• Rendimiento del ensayo funcional.

El tamaño de partícula preferido debe seleccionarse mediante pruebas funcionales en paralelo en el flujo de trabajo previsto.

Aplicaciones en el desarrollo de reactivos para inmunoensayos

MSA20UM-10 puede evaluarse para:

• Inmunoensayos tipo sándwich magnético;

• Ensayos de detección de anticuerpos;

• Inmunoensayos competitivos;

• Investigación de inmunoensayos de quimioluminiscencia;

• Investigación de ensayos de electroquimioluminiscencia;

• Enriquecimiento de objetivos inmunomagnéticos;

• Pretratamiento de la muestra;

• Captura por afinidad;

• Investigación sobre inmunoprecipitación;

• Estudios de interacción de proteínas;

• Captura de ácido nucleico biotinilado;

• Separación de células o microorganismos.

La idoneidad del formato de 20 µm depende del objetivo, la matriz de la muestra, el recipiente de reacción, el separador magnético y el sistema de detección posterior.

Investigación de inmunoensayos de quimioluminiscencia

Se puede cargar un anticuerpo de captura biotinilado en MSA20UM-10.

Las perlas cargadas con anticuerpos capturan el antígeno diana de la muestra. Luego, un anticuerpo de detección marcado forma un complejo inmunológico.

Después de la recolección magnética y el lavado, la etiqueta de detección genera la señal quimioluminiscente.

Las variables de desarrollo importantes incluyen:

• Dosificación de perlas;

• Carga de anticuerpos de captura;

• Grado de biotinilación de anticuerpos;

• Volumen de muestra;

• tiempo de captura del objetivo;

• Concentración de anticuerpos de detección;

• Eficiencia de lavado;

• Sustrato quimioluminiscente;

• Relación señal-fondo.

Dado que 20 µm es mayor que los tamaños de partículas utilizados por muchos sistemas CLIA automatizados, la compatibilidad del analizador debe confirmarse experimentalmente.

Ensayos de detección de anticuerpos

Se puede inmovilizar un antígeno biotinilado en MSA20UM-10 para capturar anticuerpos específicos del objetivo.

Las posibles aplicaciones de investigación incluyen:

• Ensayos de anticuerpos contra enfermedades infecciosas;

• Ensayos de autoanticuerpos;

• Estudios de respuesta a vacunas;

• Evaluación de antígenos recombinantes;

• Monitoreo de la respuesta de anticuerpos.

Inmunoensayos competitivos

Los antígenos biotinilados, los haptenos o los conjugados de moléculas pequeñas se pueden evaluar en formatos de ensayo competitivos.

Este enfoque puede ser adecuado cuando el analito no puede soportar una estructura sándwich de dos anticuerpos convencional.

Investigación sobre electroquimioluminiscencia

MSA20UM-10 se puede evaluar en la investigación de ECL cuando el módulo de posicionamiento magnético, la configuración del electrodo y la vía fluídica son compatibles con partículas de 20 µm.

El equipo de desarrollo debe validar:

• Posicionamiento de partículas cerca del electrodo;

• Recuperación magnética;

• Interferencia de electrodos;

• Eficiencia de lavado;

• Geometría del recipiente de reacción;

• Aclaramiento fluídico;

• Química de señales;

• Continuar.

Aplicaciones en pretratamiento de muestras y enriquecimiento de objetivos

MSA20UM-10 se puede evaluar para flujos de trabajo de preparación de muestras donde la recuperación magnética y el lavado repetido son importantes.

Las aplicaciones potenciales incluyen:

• Enriquecimiento de proteínas objetivo;

• Captura de antígenos;

• Purificación de anticuerpos;

• Separación celular;

• Enriquecimiento de microorganismos;

• Captura de partículas biológicas;

• Enriquecimiento de ácidos nucleicos;

• Limpieza de muestras;

• Eliminación de componentes que interfieren.

Los sistemas magnéticos de estreptavidina más grandes se utilizan comercialmente para inmunoprecipitación, purificación de proteínas, purificación de ácidos nucleicos y enriquecimiento de objetivos biológicos.

Anticuerpos y biomoléculas biotinilados compatibles

Anticuerpos biotinilados

Las variables de anticuerpos importantes incluyen:

• Pureza de anticuerpos;

• Concentración de anticuerpos;

• Química de biotinilación;

• Grado de biotinilación;

• Posición de biotina;

• Estado de agregación;

• Actividad de unión a antígeno retenida;

• Tampón de formulación original.

Una biotinilación excesiva puede reducir la actividad biológica o producir una orientación desfavorable después de la inmovilización.

Una biotinilación insuficiente puede reducir la carga de perlas y la captura funcional del objetivo.

Antígenos biotinilados

Se pueden utilizar antígenos biotinilados para ensayos de detección de anticuerpos.

El desarrollador debe confirmar que la biotinilación no modifica ni bloquea un epítopo importante.

Péptidos biotinilados

Las aplicaciones potenciales incluyen:

• Detección de anticuerpos;

• Análisis de epítopos;

• Ensayos competitivos;

• Estudios de interacción de proteínas;

• Captura por afinidad.

Oligonucleótidos biotinilados

La biotina se puede introducir en el extremo 5', en el extremo 3' o en otra posición validada.

La posición de modificación seleccionada debería preservar la hibridación, el alargamiento o la actividad del aptámero.

Proteínas y enzimas biotiniladas

Las proteínas y enzimas biotiniladas se pueden evaluar para:

• Estudios de interacción de proteínas;

• Ensayos enzimáticos;

• Enriquecimiento de afinidad;

• Desarrollo de biosensores;

• Preparación del material de calibración.

Flujo de trabajo de carga de ligando biotinilado recomendado

El siguiente flujo de trabajo es un marco de desarrollo general. No es un protocolo validado específico de producto.

Paso 1: caracterizar el ligando biotinilado

Registro:

• Identidad del ligando;

• Peso molecular;

• Concentración;

• Pureza;

• Formulación original;

• Método de biotinilación;

• Grado estimado de biotinilación;

• Actividad biológica;

• Estado de agregación;

• Aditivos estabilizantes.

Paso 2: eliminar el exceso de biotina libre

La biotina libre puede ocupar los sitios de unión de estreptavidina disponibles y reducir la carga del ligando biotinilado deseado.

Los posibles métodos de purificación incluyen:

• Desalación;

• Diálisis;

• Cromatografía de exclusión por tamaño;

• Ultrafiltración;

• HPLC o FPLC;

• Otro proceso de purificación validado.

Spherotech señala específicamente que la biotina libre y los pequeños compuestos biotinilados libres pueden unirse más rápido que las moléculas biotiniladas más grandes.

Paso 3: Resuspender completamente MSA20UM-10

Mezclar la suspensión original hasta que quede homogénea antes de retirar una alícuota.

Los métodos adecuados pueden incluir:

• Inversión suave;

• Mezclado con rodillos;

• Rotación de un extremo a otro;

• Vórtice controlado a baja velocidad;

• Otro método validado con baja espuma.

Debido a que las partículas de 20 µm pueden sedimentarse durante el almacenamiento y las detenciones temporales del proceso, se debe mantener una mezcla adecuada al preparar múltiples alícuotas.

Paso 4: Calcule la cantidad de cuentas requerida

Cuando se confirma que la concentración es de 10 mg/ml:

Masa de perlas = volumen de suspensión × 10 mg/ml

Evalúe varias dosis de perlas en lugar de probar solo una condición.

Paso 5: lavar o equilibrar las cuentas

Recoja las perlas magnéticas utilizando un separador compatible.

Retire el medio de suspensión original cuando sea necesario y equilibre las partículas en un tampón de carga de ligando validado.

No permita que las partículas se sequen.

Paso 6: agregue el ligando biotinilado

Evalúe varias relaciones ligando-perla:

• Baja carga de ligando;

• Carga de ligando media;

• Alta carga de ligando;

• Diferentes tiempos de incubación;

• Diferentes temperaturas;

• Diferentes formulaciones de tampones.

Paso 7: mantener una mezcla uniforme

Utilice suficiente mezcla para evitar la sedimentación y mantener el contacto perla-ligando sin dañar el ligando biológico.

Los protocolos de perlas de estreptavidina de partículas grandes enfatizan el mantenimiento de una suspensión uniforme durante la carga y alícuotas del ligando.

Paso 8: recoja magnéticamente las cuentas cargadas

Estandarizar:

• Tipo de imán;

• Buque;

• Volumen de reacción;

• Concentración de perlas;

• Hora de recogida;

• Posición de recogida;

• Volumen de líquido residual.

Paso 9: retener el sobrenadante

Conserve el sobrenadante posterior a la carga cuando sea necesario medir la eficiencia de carga del ligando.

Paso 10: lave las cuentas cargadas

Eliminar:

• Ligando biotinilado libre;

• Biotina libre residual;

• Componentes de formulación no deseados;

• Otros materiales no consolidados.

Paso 11: Resuspender en el buffer final

Los componentes potenciales de la formulación incluyen:

• Buffer;

• Sal;

• Estabilizador de proteínas;

• Polímero sintético;

• tensioactivo;

• Preservativo;

• Azúcar o poliol;

• Componente de bloqueo.

La formulación final debe optimizarse en cuanto a dispersión de perlas, actividad de ligando, fondo bajo y estabilidad de almacenamiento.

Paso 12: Evaluar el desempeño funcional

Las pruebas recomendadas incluyen:

• Eficiencia de carga de ligandos;

• Captura de objetivos funcionales;

• Señal en blanco;

• Señal positiva;

• Relación señal-fondo;

• Recuperación magnética;

• Redispersión de perlas;

• Precisión;

• Estabilidad acelerada;

• Estabilidad en tiempo real.

Cómo optimizar MSA20UM-10

Optimice la dosis de perlas

Muy pocas cuentas pueden limitar la captura del objetivo.

Demasiadas cuentas pueden aumentar:

• Consumo de reactivos;

• Señal en blanco;

• Adsorción inespecífica;

• Requisitos de lavado;

• interferencia de partículas residuales;

• Transferencia de instrumentos.

Optimizar la carga de ligando

Evaluar varias cantidades de anticuerpo o antígeno biotinilado por miligramo de perlas.

La carga química más alta no necesariamente proporciona el mejor resultado funcional.

Una carga excesiva puede causar:

• Apiñamiento estérico;

• Accesibilidad de destino reducida;

• Aumento de la unión no específica;

• Actividad funcional reducida;

• Peor estabilidad en almacenamiento.

Optimizar el grado de biotinilación

Comparar ligandos con diferentes niveles de biotinilación.

Evaluar:

• Eficiencia de carga de cuentas;

• Actividad biológica retenida;

• Rendimiento de captura de objetivos;

• Señal en blanco;

• Señal positiva;

• Precisión;

• Estabilidad.

Optimizar la mezcla

Como las partículas de 20 µm pueden sedimentar, evalúe:

• Mezclado continuo versus intermitente;

• Velocidad de mezcla;

• Duración de la mezcla;

• Geometría del recipiente;

• Uniformidad de la suspensión;

• Formación de espuma;

• Estabilidad del ligando.

Optimizar la separación magnética

Evaluar:

• Fuerza del imán;

• Posición del imán;

• Hora de recogida;

• Geometría del recipiente;

• Concentración de perlas;

• Volumen de muestra;

• Viscosidad del tampón;

• Líquido residual;

• Pérdida de perlas durante la aspiración.

Optimizar el lavado

Comparar:

• Composición de tampón de lavado;

• Concentración de surfactante;

• Volumen de lavado;

• Número de ciclos de lavado;

• Mezclar durante el lavado;

• Tiempo de recogida magnética;

• Volumen de lavado residual.

Un lavado insuficiente puede aumentar el fondo del ensayo. Un lavado excesivo o agresivo puede reducir la recuperación de partículas o afectar los componentes biológicos sensibles.

Optimice el procesamiento automatizado o semiautomático

Evaluar:

• Frecuencia de mezcla del depósito;

• Establecimiento durante el modo de espera;

• Precisión de dispensación de cuentas;

• Dimensiones de las puntas de pipeta y de los tubos;

• Juego de válvulas;

• Mezcla de incubación;

• Colección magnética;

• Altura de aspiración;

• Ciclos de lavado;

• Volumen residual;

• Redispersión;

• Continuar;

• Riesgo de bloqueo fluídico.

Cómo evaluar el rendimiento de unión a biotina

Capacidad total de unión a biotina

Se puede utilizar un reactivo de biotina marcado para estimar los sitios de unión de estreptavidina disponibles.

Diferentes proveedores utilizan diferentes partículas, ligandos de prueba, unidades y procedimientos analíticos. Por lo tanto, MSA20UM-10 debería tener su propio método validado y rango de aceptación interno.

Carga de anticuerpos biotinilados

Mida la concentración de anticuerpos antes y después de la carga de cuentas.

Un cálculo aproximado es:

Anticuerpo cargado = Anticuerpo inicial − Anticuerpo no unido

Los posibles métodos analíticos incluyen:

• absorbancia UV;

• ensayo BCA;

• ensayo de Bradford;

• Medición de fluorescencia;

• ELISA;

• Otro ensayo de proteínas validado.

Capacidad funcional de captura de objetivos

La carga de ligando químico no confirma la actividad biológica retenida.

Las pruebas funcionales deben medir la captura real del objetivo en condiciones de ensayo representativas.

Unión no específica

Comparar:

• Cuentas descargadas;

• Perlas cargadas de ligando;

• Cuentas bloqueadas;

• Muestras negativas;

• Muestras positivas;

• Sustancias perturbadoras representativas.

Recuperación magnética

Mida la recuperación de las perlas después de repetidos lavados y recolección magnética.

Rendimiento del ensayo funcional

Evaluar:

• Señal en blanco;

• Señal de muestra negativa;

• Señal positiva baja;

• Señal positiva alta;

• Relación señal-fondo;

• Precisión;

• Recuperación;

• Linealidad;

• Especificidad;

• Efecto gancho;

• Estabilidad.

Control de calidad para investigación y producción por lotes

Propiedades físicas

Los elementos de control de calidad física recomendados incluyen:

• Apariencia;

• Dispersión;

• Tamaño de partícula;

• Distribución del tamaño de partículas;

• Contenido de sólidos;

• Comportamiento de sedimentación;

• Facilidad de redispersión.

Propiedades funcionales de la superficie

Las pruebas de rendimiento de superficie recomendadas incluyen:

• actividad de estreptavidina;

• Capacidad libre de unión a biotina;

• Carga de anticuerpos biotinilados;

• Carga de oligonucleótidos biotinilados;

• Unión inespecífica.

Rendimiento magnético

Utilice condiciones estandarizadas para:

• Tipo de imán;

• Buque;

• Buffer;

• Volumen de muestra;

• Concentración de perlas;

• Hora de recogida;

• Temperatura.

Rendimiento del inmunoensayo funcional

Evaluar:

• Señal en blanco;

• Señal positiva;

• Relación señal-fondo;

• Sensibilidad analítica;

• Precisión;

• Recuperación;

• Especificidad;

• Estabilidad.

Consistencia entre lotes

Para producción de rutina, establezca rangos de aceptación para:

• Tamaño de partícula;

• Distribución del tamaño de partículas;

• Contenido de sólidos;

• actividad de estreptavidina;

• Capacidad de unión a biotina;

• Recuperación magnética;

• Dispersión;

• Unión no específica;

• Rendimiento del ensayo funcional.

La aprobación final de la materia prima debe basarse en el desempeño en todo el flujo de trabajo de separación o ensayo del cliente.

Ampliación y suministro a granel para fabricantes de reactivos

Etapa de evaluación

Las muestras de evaluación pueden respaldar la detección de:

• Anticuerpos biotinilados;

• Antígenos biotinilados;

• Dosificación de perlas;

• Nivel de carga de ligando;

• Formulación bloqueante;

• Separación magnética;

• Captura de objetivos;

• Antecedentes del ensayo.

Etapa a escala piloto

Las cantidades piloto pueden soportar:

• Confirmación del proceso de carga de ligandos;

• formulación de reactivos;

• Pruebas de compatibilidad de instrumentos;

• Estudios de estabilidad;

• Evaluación del proceso de llenado;

• Prueba inicial de consistencia del lote.

Etapa de producción por lotes

La planificación del suministro a granel puede incluir:

• Demanda anual;

• Previsión de compras;

• Volumen de embalaje;

• Especificaciones de calidad;

• Documentación técnica;

• Documentación de calidad;

• Requisitos de lote reservado;

• Expectativas de control de cambios;

• Planificación del stock de seguridad.

Consideraciones de ampliación

Un procedimiento de laboratorio no debe escalarse únicamente multiplicando los volúmenes de reactivo.

Revalidar:

• Geometría del recipiente;

• Eficiencia de mezcla;

• Uniformidad de suspensión de cuentas;

• secuencia de adición de ligando;

• Tiempo de incubación;

• Distribución de temperatura;

• Colección magnética;

• Eficiencia de lavado;

• Tiempo de espera del proceso;

• Uniformidad de llenado final.

Mantener una suspensión homogénea durante la carga del ligando y el llenado final es particularmente importante para partículas de 20 µm.

Servicios personalizados de perlas magnéticas de estreptavidina

SHBC puede evaluar requisitos personalizados para empresas de biotecnología, instituciones de investigación y fabricantes de reactivos.

Las posibles opciones de personalización incluyen:

• Tamaños de partículas alternativos;

• Contenido de sólidos personalizado;

• Carga de estreptavidina ajustada;

• Objetivos de unión a biotina específicos del cliente;

• Formulaciones bloqueantes alternativas;

• Tampón de suspensión personalizado;

• Sistemas conservantes alternativos;

• pH especificado por el cliente;

• Volúmenes de embalaje especiales;

• Producción a escala piloto;

• Fabricación a granel;

• Embalaje OEM;

• Servicios de marca propia;

• Pruebas de calidad específicas del cliente.

La viabilidad de la personalización depende de las especificaciones solicitadas, la aplicación prevista, los requisitos de validación y la cantidad del pedido.

Recomendaciones de almacenamiento y manipulación

Almacene MSA20UM-10 de acuerdo con la etiqueta del producto, el TDS y el CoA específico del lote.

Las recomendaciones generales de manejo incluyen:

• Mezclar bien antes de tomar la muestra;

• Mantener la uniformidad de la suspensión durante la dispensación;

• Utilice equipos limpios y calibrados;

• Evite permitir que las perlas magnéticas se sequen;

• Prevenir la contaminación microbiana y química;

• Evite la congelación a menos que esté específicamente validado;

• Evite la exposición innecesaria a temperaturas extremas;

• Confirme la compatibilidad del búfer antes del intercambio del búfer;

• Prevenir la contaminación con biotina libre;

• Registre el número de lote del producto;

• Evalúe la estabilidad de las perlas cargadas con ligando por separado.

Las instrucciones comerciales de perlas magnéticas de estreptavidina recomiendan mantener las partículas en líquido, evitando que se sequen y evitando la congelación.

Grandes perlas de escala micrométrica pueden sedimentarse durante el almacenamiento y las detenciones temporales del proceso. Por lo tanto, la suspensión debe homogeneizarse completamente antes de cada operación de muestreo, carga o llenado.

Preguntas frecuentes

¿Qué es MSA20UM-10?

MSA20UM-10 es una suspensión de perlas magnéticas funcionales de estreptavidina de 20 µm suministrada con un 1 % de sólidos para capturar biomoléculas biotiniladas en investigación de inmunoensayos, pretratamiento de muestras, enriquecimiento de objetivos y fabricación de reactivos por lotes.

¿Qué significa 1% de sólidos?

Cuando se expresa como p/v, el 1 % de sólidos corresponde a aproximadamente 10 mg de material de perlas magnéticas por mililitro. La base de concentración debe confirmarse en la TDS del producto.

¿Qué moléculas puede capturar MSA20UM-10?

Las perlas pueden evaluarse para determinar la unión de anticuerpos, antígenos, proteínas, péptidos, aptámeros, ADN, ARN y otras moléculas marcadas con biotina biotinilados.

¿MSA20UM-10 requiere activación EDC/NHS?

Normalmente no se requiere activación adicional de EDC/NHS para cargar un ligando biotinilado adecuadamente.

¿Se incluye un anticuerpo de captura?

No. MSA20UM-10 se suministra como materia prima de perlas magnéticas de estreptavidina. El cliente selecciona y prepara el anticuerpo, antígeno u otro ligando de captura biotinilado requerido.

¿La suspensión al 1% está lista para usar directamente?

No necesariamente. La concentración de trabajo óptima depende del ligando, el objetivo, el volumen de la muestra, el formato del ensayo y el sistema de separación magnética.

¿Por qué elegir un tamaño de partícula de 20 µm?

El formato de 20 µm se puede evaluar cuando un proyecto requiere una fase sólida magnética grande, recolección claramente observable, lavado repetido, pretratamiento de muestras, enriquecimiento objetivo o compatibilidad con una especificación de material de 20 µm existente.

¿Se asientan las perlas magnéticas de 20 µm?

Sí. Las partículas magnéticas de gran escala micrométrica pueden sedimentarse durante el almacenamiento, la incubación y las detenciones del proceso. La suspensión debe mezclarse antes del muestreo y mantenerse en una mezcla adecuada durante el procesamiento.

¿En qué se diferencian las perlas de 20 µm de las de 10 µm?

Para partículas hechas de materiales similares, las perlas de 20 µm generalmente proporcionan menos partículas individuales y menos área de superficie geométrica teórica por unidad de masa, al tiempo que muestran una sedimentación más pronunciada y un comportamiento de recolección magnética diferente.

¿En qué se diferencian las perlas de 20 µm de las de 1 a 3 µm?

Las partículas más pequeñas generalmente proporcionan más partículas y una mayor superficie geométrica por unidad de masa. El formato de 20 µm puede ser más fácil de observar, pero requiere mayor atención a la mezcla, la sedimentación y la compatibilidad fluídica.

¿Se puede utilizar MSA20UM-10 para el desarrollo de inmunoensayos?

MSA20UM-10 se puede evaluar como una fase sólida magnética en la investigación de inmunoensayos. El rendimiento debe validarse utilizando el ligando, la matriz de muestra, el separador magnético y el sistema de detección previstos.

¿Se puede evaluar MSA20UM-10 para CLIA?

Se puede evaluar el desarrollo de inmunoensayos de quimioluminiscencia cuando el recipiente de reacción, el separador magnético y el sistema de manipulación de líquidos son compatibles con partículas de 20 µm.

¿Se puede evaluar para ensayos de electroquimioluminiscencia?

Puede evaluarse en la investigación de ECL. La compatibilidad con el electrodo, el módulo de posicionamiento magnético, la vía fluídica y la química de la señal debe confirmarse experimentalmente.

¿Se puede utilizar MSA20UM-10 con analizadores automatizados?

Puede evaluarse para sistemas automatizados o semiautomáticos seleccionados. Se deben validar la dispensación, la mezcla, la recolección magnética, la aspiración, el lavado y la compatibilidad de la ruta de fluidos.

¿Cuánto anticuerpo biotinilado se debe cargar?

La cantidad óptima depende de la capacidad de unión validada del producto, el peso molecular del anticuerpo, el grado de biotinilación y los requisitos de aplicación. Se deben comparar varios niveles de carga.

¿Una mayor carga de anticuerpos siempre mejora el rendimiento?

No. La carga excesiva del ligando puede causar apiñamiento estérico, reducir la accesibilidad al objetivo y aumentar la unión no específica.

¿Puede la biotina libre interferir con la carga de ligandos?

Sí. La biotina libre puede ocupar los sitios de unión de estreptavidina disponibles y reducir la carga del ligando biotinilado deseado.

¿Cómo se puede medir la eficiencia de carga de ligandos?

Compare la cantidad de ligando inicial con la cantidad de ligando libre que queda en el sobrenadante posterior a la carga. También se debe evaluar la actividad funcional de captura de objetivos.

¿Cómo se debe mezclar MSA20UM-10?

Utilice un método validado, como inversión suave, mezcla con rodillo, rotación de un extremo a otro o agitación vorticial controlada a baja velocidad hasta que la suspensión sea homogénea.

¿Qué se debe comprobar si la recogida magnética está incompleta?

Evaluar:

• Fuerza del imán;

• Posición del imán;

• Hora de recogida;

• Concentración de perlas;

• Volumen de muestra;

• Viscosidad del tampón;

• Agregación de partículas;

• Geometría del vaso.

¿Qué se debe comprobar si la carga del ligando es baja?

Evaluar:

• Grado de biotinilación;

• Contaminación libre de biotina;

• Concentración de ligando;

• Cantidad de cuentas;

• Tiempo de incubación;

• Compatibilidad de búfer;

• Agregación de ligandos.

¿Qué se debe comprobar si el fondo del ensayo es alto?

Evaluar:

• Formulación bloqueante;

• Dosificación de perlas;

• Densidad de carga de ligando;

• Eficiencia de lavado;

• Matriz de muestra;

• Adsorción inespecífica;

• Concentración del reactivo de detección.

¿MSA20UM-10 es un reactivo de diagnóstico terminado?

No. MSA20UM-10 se suministra como materia prima para investigación y desarrollo de reactivos. El cliente es responsable de validar el reactivo terminado, el proceso de fabricación y la aplicación prevista.

¿Hay muestras de evaluación y cantidades a granel disponibles?

Los requisitos de evaluación, piloto y suministro a granel se pueden discutir según la aplicación prevista, la demanda anual estimada y el formato de embalaje requerido.

¿Se puede personalizar la concentración, el tampón o el embalaje?

El contenido de sólidos personalizado, la carga de estreptavidina, el tampón de suspensión, la formulación de bloqueo y el formato de empaque se pueden evaluar de acuerdo con los requisitos del proyecto.

Solicite una muestra o una cotización al por mayor

Comuníquese con SHBC para solicitar una muestra de evaluación, información técnica o una cotización a granel para las perlas magnéticas de estreptavidina MSA20UM-10 de 20 µm.

Por favor proporcione:

• Aplicación prevista de inmunoensayo o separación;

• Anticuerpo, antígeno u otro ligando biotinilado;

• Peso molecular del ligando;

• Método de biotinilación;

• Grado estimado de biotinilación;

• Matriz de muestra;

• Separador o analizador magnético;

• Cantidad de evaluación requerida;

• Cantidad piloto estimada;

• Demanda anual esperada;

• Volumen de embalaje preferido;

• Documentos técnicos requeridos;

• Documentos de calidad requeridos;

• Calendario de desarrollo de objetivos;

• Requisitos de especificaciones personalizadas.

SHBC apoya proyectos de perlas magnéticas de estreptavidina, desde la evaluación de la carga de ligandos y la optimización de inmunoensayos hasta la validación piloto y la fabricación a granel.