Microesferas de estreptavidina 3um SAPS3UM-10 1%

Microesferas de estreptavidina de 3 µm para citometría de flujo

Las microesferas de estreptavidina SHBC SAPS3UM-10 son microesferas funcionalizadas en superficie de 3 µm desarrolladas para inmovilizar anticuerpos, antígenos, proteínas, péptidos, oligonucleótidos, ADN, ARN, aptámeros y otras biomoléculas marcadas con biotina.

El producto se suministra como una suspensión de sólidos al 1 % y está diseñado para el desarrollo de ensayos de citometría de flujo, investigación de inmunoensayos basados ​​en perlas, estudios de interacción de biomoléculas, captura de ácidos nucleicos, detección basada en partículas y fabricación de reactivos de investigación.

Shanghai SanYu Biotechnology Co., Ltd. respalda la evaluación de muestras de laboratorio, el desarrollo a escala piloto, la producción repetida y el suministro a granel para empresas de biotecnología, institutos de investigación, laboratorios de citometría de flujo, fabricantes de reactivos y organizaciones de desarrollo de ensayos.

Respuesta rápida del producto

SAPS3UM-10 es una suspensión de microesferas recubiertas de estreptavidina de 3 µm suministrada con un 1 % de sólidos. Su superficie funcional con estreptavidina une biomoléculas biotiniladas y puede usarse para desarrollar ensayos de perlas de citometría de flujo, sistemas de captura por afinidad, inmunoensayos, métodos de detección de ácidos nucleicos y plataformas de investigación basadas en partículas múltiples.

Productos destacados

• Nombre del producto: Microesferas de estreptavidina de 3 µm

• Número de catálogo: SAPS3UM-10

• Marca: SHBC

• Fabricante: Shanghai SanYu Biotechnology Co., Ltd.

• Diámetro nominal de partícula: 3 µm

• Modificación de superficie: estreptavidina

• Contenido de sólidos: 1%

• Principio de unión: afinidad estreptavidina-biotina

• Forma física: Suspensión acuosa de microesferas.

• Aplicación principal: investigación de ensayos de citometría de flujo.

• Capacidad de suministro: muestras, lotes piloto y producción a granel.

• Personalización: Disponible según viabilidad técnica

• Uso previsto: uso exclusivo en investigación

¿Qué son las microesferas de estreptavidina SAPS3UM-10?

SAPS3UM-10 consta de microesferas de 3 µm con estreptavidina inmovilizada en la superficie de la partícula.

El recubrimiento de estreptavidina proporciona sitios de unión para moléculas biotiniladas. Los investigadores pueden cargar un anticuerpo, antígeno, proteína, péptido, sonda de ácido nucleico u otro ligando biotinilado seleccionado en las microesferas sin realizar una activación covalente directa de la superficie de la microesfera.

Una vez inmovilizada la molécula de captura biotinilada, las partículas funcionalizadas se pueden utilizar como fase sólida para la captura de objetivos, la detección de fluorescencia, el análisis de interacciones biomoleculares, el desarrollo de inmunoensayos y la medición de citometría de flujo.

Los posibles ligandos biotinilados incluyen:

• Anticuerpos monoclonales

• Anticuerpos policlonales

• Anticuerpos recombinantes

• Fragmentos de anticuerpos

• Antígenos

• Proteínas recombinantes

• Péptidos

• enzimas

• Receptores

• Lectinas

• Sondas de oligonucleótidos

• sondas de ADN

• sondas de ARN

• aptámeros

• Pequeñas moléculas biotiniladas.

El diámetro de 3 µm proporciona una población de partículas del tamaño de una micra que generalmente puede producir señales de dispersión más fuertes que las partículas submicrónicas más pequeñas o de 1 µm en muchos citómetros de flujo convencionales.

Esto hace que SAPS3UM-10 sea adecuado para investigadores que desean una plataforma de partículas recubiertas de estreptavidina que sea relativamente fácil de detectar, controlar, lavar y analizar.

SAPS3UM-10 se suministra como materia prima para investigación y desarrollo de ensayos. No se suministra como reactivo de diagnóstico terminado, estándar de calibración de citometría de flujo certificado ni perla de recuento absoluto.

SAPS3UM-10 Especificaciones técnicas

Los siguientes parámetros deben confirmarse utilizando la especificación técnica final o el Certificado de Análisis específico del lote:

• matriz de partículas

• Diámetro medio de partículas medido

• Distribución del tamaño de partículas

• Coeficiente de variación del tamaño de partícula.

• Densidad del recubrimiento de estreptavidina

• Capacidad de unión a biotina

• Concentración del número de partículas

• Tampón de suspensión

• pH del tampón

• Estabilizador o tensioactivo

• Preservativo

• Tamaño del paquete

• Duración

• Condiciones de almacenamiento

La capacidad de unión debe indicarse utilizando una molécula de prueba definida, un método de prueba, una base de cálculo y un resultado específico del lote.

La concentración de sólidos del 1% no debe usarse sola para estimar la capacidad de unión de biotina o la concentración del número de partículas.

Cómo funciona la unión estreptavidina-biotina

La estreptavidina es una proteína de unión a biotina que puede capturar biomoléculas biotiniladas mediante una fuerte interacción no covalente.

Cuando se mezcla un ligando biotinilado con SAPS3UM-10, el grupo biotina se une a los sitios de estreptavidina disponibles en la superficie de las microesferas.

La estructura resultante se puede representar como:

Superficie de microesferas – Estreptavidina – Biotina – Ligando de captura

Para un ensayo de anticuerpos, la estructura puede ser:

Microesfera – Estreptavidina – Anticuerpo de captura biotinilado

El anticuerpo de captura inmovilizado puede unirse a su antígeno diana. Luego, un anticuerpo de detección marcado con fluorescencia puede reconocer otro sitio en el antígeno capturado, generando una señal de fluorescencia asociada a microesferas que puede medirse mediante citometría de flujo.

Beneficios de la inmovilización con estreptavidina y biotina

• Normalmente no se requiere activación de EDC/NHS para la carga del ligando.

• Se puede utilizar una plataforma de microesferas con muchos ligandos biotinilados.

• El diseñador del ensayo puede cambiar la molécula de captura sin cambiar la partícula base.

• La inmovilización se puede completar en condiciones acuosas relativamente suaves.

• Se pueden utilizar anticuerpos, proteínas, péptidos y sondas de ácidos nucleicos biotinilados.

• La plataforma es adecuada para el desarrollo de ensayos modulares.

• La carga de ligando se puede optimizar independientemente de la detección posterior.

• El mismo formato de microesferas puede admitir investigaciones de un solo objetivo o múltiples.

El rendimiento final depende de la biotinilación del ligando, la accesibilidad a la biotina, la longitud del espaciador, el tamaño molecular, la densidad de estreptavidina, las condiciones de incubación, el hacinamiento de la superficie y la matriz de ensayo.

¿Por qué elegir microesferas de estreptavidina de 3 µm?

Detección por citometría de flujo más sencilla que las partículas más pequeñas

El diámetro de partícula de 3 µm puede generar señales de dispersión frontal y lateral más fuertes que las microesferas de 1 µm o submicrónicas en muchos citómetros de flujo convencionales.

Esto puede ayudar a los investigadores a:

• Localizar la población de microesferas.

• Separe las microesferas del fondo del buffer

• Establecer una puerta de dispersión estable

• Identificar posibles agregados

• Evaluar poblaciones singletes y dobletes.

• Confirmar la recuperación de partículas después del lavado.

• Realizar adquisición de citometría de flujo de rutina

El rendimiento del instrumento varía, por lo que la detección aún debe confirmarse utilizando el citómetro de flujo previsto.

Área de superficie adecuada para la inmovilización de biomoléculas

Una microesfera de 3 µm proporciona una superficie física para inmovilizar moléculas de captura biotiniladas.

La capacidad de encuadernación utilizable depende de:

• Densidad del recubrimiento de estreptavidina

• Actividad de estreptavidina

• Tamaño molecular del ligando

• Nivel de biotinilación

• Diseño espaciador

• Accesibilidad estérica

• Concentración de ligando

• Condiciones de incubación

Una partícula más grande no garantiza automáticamente una mayor capacidad de unión por miligramo. Se requieren pruebas específicas para cada lote.

Lavado y recuperación convenientes

Las partículas del tamaño de una micra pueden ser más fáciles de recuperar mediante un proceso de centrifugación o filtración validado que las partículas más pequeñas.

El método de separación más adecuado depende de:

• Densidad de partículas

• matriz de partículas

• Volumen de muestra

• fuerza centrífuga

• tiempo de centrifugación

• Material del tubo

• Composición del búfer

• Tasa de recuperación requerida

No se debe asumir que SAPS3UM-10 es magnético a menos que las propiedades magnéticas se indiquen específicamente en su documentación técnica.

Diseño de ensayo flexible

Los investigadores pueden utilizar la misma plataforma de microesferas de estreptavidina con diferentes moléculas de captura biotiniladas.

Esto respalda el rápido desarrollo de ensayos dirigidos a diferentes proteínas, anticuerpos, antígenos, ácidos nucleicos, receptores o ligandos.

Adecuado para la ampliación de la investigación a la producción

SAPS3UM-10 se puede evaluar en un ensayo a escala de laboratorio y luego transferirse a fabricación piloto o a granel una vez que se hayan confirmado las especificaciones.

Esto es adecuado para organizaciones que requieren:

• Muestras de investigación inicial.

• Múltiples lotes de desarrollo

• Verificación a escala piloto

• Comparación de lote a lote

• Suministro a largo plazo

• Embalaje OEM

• Control de calidad específico del cliente

Características y beneficios clave

Diámetro nominal de partícula de 3 µm

La población de partículas de tamaño micrométrico es adecuada para la detección optimizada de citometría de flujo, activación de dispersión, ensayos de unión basados ​​en perlas y seguimiento de partículas.

Superficie funcional de estreptavidina

La superficie captura anticuerpos, proteínas, péptidos, oligonucleótidos, aptámeros y otras moléculas que contienen biotina biotinilados.

Suspensión de sólidos al 1%

SAPS3UM-10 se suministra con un 1 % de sólidos y se puede diluir según el número de partículas, el volumen de ensayo, la tasa de eventos y la capacidad de unión requeridos.

Inmovilización de ligando simple

Los ligandos biotinilados pueden cargarse sin activación directa de carbodiimida de la microesfera por parte del usuario final.

Plataforma de ensayo modular

La microesfera base se puede combinar con diferentes moléculas de captura biotiniladas para múltiples proyectos de investigación.

Compatible con detección de reportero fluorescente

Se puede generar una señal de citometría de flujo utilizando anticuerpos de detección fluorescentes, anticuerpos secundarios, sondas u otros informadores.

Adecuado para investigación Singleplex y Multiplex

SAPS3UM-10 se puede evaluar como una población de microesferas en un sistema multiplex basado en partículas.

Capacidad de producción a granel

SHBC admite muestras de laboratorio, lotes piloto, pedidos repetidos y fabricación a granel.

Opciones de desarrollo personalizadas

Para proyectos calificados, se pueden discutir los requisitos de tamaño de partícula, concentración, recubrimiento de estreptavidina, capacidad de unión, tampón, empaque, codificación de fluorescencia y control de calidad.

Aplicaciones en la investigación de citometría de flujo

Inmunoensayos tipo sándwich a base de perlas

SAPS3UM-10 se puede utilizar como fase sólida en un inmunoensayo tipo sándwich de citometría de flujo.

Un flujo de trabajo típico incluye:

1. Inmovilización de un anticuerpo de captura biotinilado.

2. Bloqueando la superficie de las microesferas.

3. Incubar las partículas con la muestra.

4. Captura del antígeno diana.

5. Adición de un anticuerpo de detección fluorescente.

6. Lavado de reactivos no unidos.

7. Medición de la fluorescencia asociada a microesferas mediante citometría de flujo.

Los objetivos potenciales de la investigación incluyen:

• Citoquinas

• hormonas

• Factores de crecimiento

• Anticuerpos

• Antígenos

• enzimas

• Biomarcadores

• Proteínas asociadas a patógenos

• Analitos ambientales

• Compuestos de investigación

Ensayos competitivos de citometría de flujo

Las microesferas también pueden evaluarse en formatos de ensayo competitivos.

En un ensayo competitivo, la señal de fluorescencia medida puede disminuir o aumentar dependiendo de cómo la muestra objetivo compita con un reactivo marcado o inmovilizado.

Los formatos competitivos pueden ser relevantes para:

• Moléculas pequeñas

• Péptidos

• haptenos

• Drogas

• Toxinas

• hormonas

• Objetivos con un solo sitio de unión accesible

Captura de anticuerpos biotinilados

Los anticuerpos biotinilados se pueden inmovilizar en SAPS3UM-10 para:

• Detección de antígenos

• Detección de anticuerpos

• Detección de hibridomas

• Investigación de biomarcadores

• Comparación de anticuerpos de captura

• Estudios de viabilidad de ensayos.

• Evaluación de especificidad

• Estudios de reactividad cruzada

Investigación sobre la interacción de proteínas y péptidos

Se pueden inmovilizar proteínas o péptidos biotinilados para estudiar:

• Interacciones anticuerpo-antígeno

• Interacciones proteína-proteína

• Unión receptor-ligando

• Interacciones enzima-sustrato

• Reconocimiento de epítopos

• Detección de inhibidores

• Unión del candidato a fármaco

• Comparación de afinidad

Captura y detección de ácidos nucleicos

Se pueden unir oligonucleótidos biotinilados, ADN, ARN, productos de PCR y aptámeros a SAPS3UM-10.

Las aplicaciones potenciales incluyen:

• Captura de ácido nucleico específica de secuencia.

• Desarrollo de ensayos de hibridación.

• Investigación de detección de mutaciones

• Investigación de genotipado

• Captura de productos de PCR

• Detección basada en aptámeros

• Estudios de interacción ADN-proteína.

• Estudios de unión a ARN

• Desarrollo de ensayos moleculares.

Investigación de unión celular

Cuando se recubren con un anticuerpo, receptor, ligando o lectina biotinilado apropiado, se puede evaluar la unión de las microesferas a células o objetivos de la superficie celular.

Los parámetros importantes incluyen:

• Densidad de ligando

• Relación microesfera-célula

• tiempo de incubación

• Temperatura

• Concentración celular

• Método de mezcla

• Condiciones de lavado

• Viabilidad celular

• Adhesión de partículas no específicas

Las microesferas sintéticas no son células biológicas y no deben usarse como sustituto celular directo sin una validación específica de la aplicación.

Citometría de flujo múltiplex

Se pueden distinguir diferentes poblaciones de microesferas por:

• Diámetro de partícula

• Color de fluorescencia interna

• Intensidad de fluorescencia interna

• Color de partículas visibles

• Ligando de superficie

• Fluorescencia reportera

Para el desarrollo múltiple, cada población debe seguir siendo distinguible después de la carga, el bloqueo, la incubación, el lavado y el almacenamiento del ligando.

El canal de fluorescencia informador también debe estar separado de cualquier señal de codificación de microesferas internas.

Investigación de biosensores y ensayos de afinidad

SAPS3UM-10 podrá evaluarse en:

• Biosensores basados ​​en partículas

• Ensayos de microfluidos

• Métodos de captura por afinidad

• Ensayos basados ​​en imágenes

• Detección de alto rendimiento

• Investigación sobre purificación de proteínas.

• Estudios de enriquecimiento de biomoléculas.

• Análisis de unión a ligando

Biomoléculas biotiniladas compatibles

Anticuerpos biotinilados

Los formatos de anticuerpos compatibles pueden incluir:

• IgG de longitud completa

• IgM

• Fragmentos fabulosos

• Fragmentos F(ab′)₂

• Fragmentos variables de cadena única

• Anticuerpos recombinantes

• Anticuerpos de dominio único

• Formatos de anticuerpos diseñados

La actividad de los anticuerpos después de la inmovilización depende del método de biotinilación y de la ubicación de la biotina.

La biotinilación aleatoria excesiva puede reducir la actividad de unión al antígeno o crear una orientación variable de los anticuerpos.

Proteínas biotiniladas

Los ejemplos incluyen:

• Antígenos recombinantes

• enzimas

• Citoquinas

• Factores de crecimiento

• Receptores

• Lectinas

• Proteínas de unión

• Proteínas de fusión

• Estándares de proteínas

Péptidos biotinilados

Los usos potenciales incluyen:

• Mapeo de epítopos

• Detección de anticuerpos

• Estudios de unión a receptores

• investigación enzimática

• Ensayos de detección de drogas

• Estudios de interacción de proteínas.

Un espaciador entre el péptido y la biotina puede mejorar la accesibilidad al objetivo en algunas aplicaciones.

Ácidos nucleicos biotinilados

Los formatos compatibles pueden incluir:

• ADN monocatenario

• ADN bicatenario

• ARN

• Sondas de oligonucleótidos

• amplicones de PCR

• aptámeros

• Sondas de ácido nucleico modificadas

• Capturar secuencias

Moléculas pequeñas biotiniladas

También se pueden inmovilizar pequeños compuestos biotinilados cuando el grupo biotina permanece accesible a la superficie de la estreptavidina.

Durante el diseño del ensayo se deben considerar la longitud del espaciador y la orientación molecular.

Protocolo de carga de ligando biotinilado recomendado

El siguiente flujo de trabajo es un punto de partida del desarrollo general. No es un protocolo de liberación fijo para cada biomolécula.

1. Resuspender SAPS3UM-10

Deje que el producto alcance la temperatura de manipulación recomendada.

Mezcle el vial mediante inversión suave, rotación o agitación controlada mediante vórtex hasta que la suspensión de microesferas sea homogénea.

Debido a que las microesferas del tamaño de una micra pueden sedimentarse durante el almacenamiento, mezcle el producto antes de cada paso de muestreo.

Evite la formación excesiva de espuma.

2. Calcule la cantidad de microesferas requerida

Determine la cantidad de microesferas requerida de acuerdo con:

• Número de pruebas

• Cantidad de microesferas por prueba

• Número requerido de eventos de citometría de flujo

• Concentración objetivo esperada

• Volumen de ensayo

• Capacidad de unión a ligando

• Número de pasos de lavado

• Pérdida de procesamiento esperada

Utilice información sobre la capacidad de encuadernación específica del lote cuando esté disponible.

3. Transferir las microesferas

Transfiera la cantidad requerida de SAPS3UM-10 a un tubo de centrífuga o recipiente de procesamiento limpio y de baja unión.

Utilice puntas de pipeta limpias y evite contaminar el recipiente original.

4. Lavar las Microesferas

Lavar las partículas utilizando un tampón de unión compatible con estreptavidina y el ligando biotinilado.

Un tampón de unión preliminar puede contener un tampón acuoso neutro y una concentración de sal apropiada.

Evite tampones o suplementos que contengan biotina libre durante la carga de ligandos.

Los posibles métodos de recuperación de partículas incluyen:

• Centrifugación

• Filtración por membrana

• Filtración de flujo tangencial

• Otros métodos validados de separación sólido-líquido

Las condiciones de centrifugación requeridas deben establecerse experimentalmente para SAPS3UM-10.

5. preparar el ligando biotinilado

Diluir el anticuerpo, proteína, péptido o ácido nucleico biotinilado en el tampón de unión seleccionado.

Las consideraciones importantes incluyen:

• Concentración de ligando

• Nivel de biotinilación

• Pureza molecular

• Nivel agregado

• Aditivos tampón

• Contaminación libre de biotina

• Estabilidad de las proteínas

• Estabilidad del ácido nucleico

6. Agregue el ligando biotinilado

Combine las microesferas lavadas con el ligando biotinilado.

Utilice una mezcla suave para mantener una suspensión uniforme durante la incubación.

Evite mezclar condiciones que causen formación de espuma, daño a las partículas o desnaturalización de biomoléculas.

7. Optimizar la incubación

Los parámetros a evaluar incluyen:

• Concentración de microesferas

• Concentración de ligando

• Relación ligando-microesfera

• tiempo de incubación

• Temperatura de incubación

• pH del tampón

• Concentración de sal

• Velocidad de mezcla

• Volumen total de reacción

Pruebe varias concentraciones de ligando en lugar de asumir que la carga máxima de ligando proporcionará el mejor resultado del ensayo.

Una carga superficial excesiva puede crear apiñamiento estérico y reducir la accesibilidad al objetivo.

8. Eliminar el ligando libre

Separe y lave las microesferas para eliminar las moléculas biotiniladas no unidas.

Un lavado insuficiente puede aumentar el fondo, mientras que un lavado excesivo puede reducir la recuperación de partículas.

9. Bloquea las microesferas

Incubar las microesferas cargadas de ligando con un reactivo de bloqueo compatible con la aplicación.

Los posibles materiales de bloqueo incluyen:

• Albúmina sérica bovina

• Caseína

• gelatina de pescado

• Inmunoglobulina no inmune

• Polímeros bloqueantes sintéticos

• Tampones comerciales de bloqueo de microesferas

El rendimiento del bloqueo debe evaluarse utilizando muestras tanto positivas como negativas.

10. Resuspender las microesferas preparadas.

Resuspender las partículas recubiertas y bloqueadas en un tampón de ensayo o almacenamiento adecuado.

Evaluar:

• Dispersión de partículas

• Retención de ligando

• Actividad vinculante

• Señal de fondo

• Recuperación de microesferas

• Estabilidad a corto plazo

• Estabilidad a largo plazo

• Sensibilidad a congelación-descongelación

• Estabilidad microbiana

Flujo de trabajo del ensayo de perlas de citometría de flujo

1. preparar las microesferas de captura

Cargue SAPS3UM-10 con la molécula de captura biotinilada seleccionada.

Lave y bloquee las partículas antes de probar la muestra.

2. Preparar controles

Los controles recomendados pueden incluir:

• Búfer de adquisición en blanco

• Control de microesferas sin recubrimiento

• Microesferas de estreptavidina sin ligando biotinilado.

• Microesferas cargadas de ligando sin muestra.

• muestra negativa

• muestra positiva

• Control exclusivo para reporteros

• control de isotipos

• Control de ligando biotinilado no relevante

• Controles de un solo color para experimentos multicolores.

3. Agregue la muestra de prueba

Combine las microesferas preparadas con la muestra.

Optimizar:

• Volumen de muestra

• Dilución de muestra

• Concentración de microesferas

• tiempo de incubación

• Temperatura de incubación

• Método de mezcla

• Rango de concentración objetivo

• Compatibilidad matricial

4. Lavar las Microesferas

Elimine los componentes de la muestra no unidos mientras mantiene una recuperación aceptable de las microesferas.

Registre el número y el volumen de los pasos de lavado durante el desarrollo del método.

5. Agregue el reportero fluorescente

Agregue un anticuerpo de detección fluorescente, un anticuerpo secundario, una sonda de ácido nucleico u otro reactivo indicador.

El fluoróforo informador debe ser compatible con los láseres y detectores del citómetro de flujo previsto.

6. Incubar y lavar

Optimice la concentración del reportero y el tiempo de incubación.

Retire el reportero fluorescente no unido para reducir la señal de fondo.

7. Resuspender para adquisición

Resuspender las partículas finales en un tampón de citometría de flujo limpio y de bajo fondo.

Mezclar las partículas inmediatamente antes de la adquisición.

8. adquirir datos de citometría de flujo

Recopile suficientes eventos de microesferas para respaldar el análisis estadístico previsto.

Los posibles resultados incluyen:

• Intensidad de fluorescencia media

• Intensidad media de fluorescencia

• Porcentaje de microesferas positivas

• Relación señal-fondo

• Curva dosis-respuesta

• Precisión del ensayo

• Recuperación

• Especificidad

• Reactividad cruzada

• Investigación de límite de detección

9. Analizar los datos

Establecer regiones positivas y negativas utilizando controles adecuados.

No defina el umbral positivo utilizando únicamente la muestra de prueba.

Detección y activación de microesferas de 3 µm

Detección de dispersión frontal y dispersión lateral

La población de microesferas de 3 µm se puede localizar mediante dispersión directa y dispersión lateral en muchos citómetros de flujo convencionales.

Se puede utilizar un gráfico preliminar de FSC versus SSC para identificar la población de partículas principal y excluir:

• Ruido electrónico

• Pequeños escombros

• Partículas tampón

• Grandes agregados

• Eventos irregulares

La posición de dispersión exacta depende de la matriz de partículas, el índice de refracción, la óptica del instrumento, la configuración del láser y los ajustes del detector.

Detección de fluorescencia

Si SAPS3UM-10 no contiene un tinte fluorescente interno, la población de microesferas aún se puede medir utilizando la fluorescencia de un indicador vinculado.

Las posibles tramas incluyen:

• FSC versus CSS

• FSC versus fluorescencia reportera

• SSC versus fluorescencia reportera

• Histograma de fluorescencia del reportero

• Área de fluorescencia versus altura

• Área de dispersión versus ancho

Análisis singlete y agregado

Los agregados de partículas pueden producir señales de fluorescencia y dispersión más altas que las partículas individuales.

Los parámetros de la geometría del pulso pueden ayudar a distinguir singletes de dobletes o agregados más grandes.

Los parámetros potenciales incluyen:

• Área de señal

• Altura de la señal

• Ancho de señal

Selección de disparador

Los posibles desencadenantes de la adquisición incluyen:

• dispersión hacia adelante

• dispersión lateral

• Fluorescencia reportera

• Fluorescencia de microesferas internas.

• Estrategias de activación combinadas

El disparador debe proporcionar una separación clara entre los eventos de las microesferas y el fondo.

Concentración de partículas

Ejecute una serie de diluciones durante el desarrollo inicial del método.

Una suspensión excesivamente concentrada puede causar coincidencia o detección de enjambre, en la que se registran múltiples partículas como un solo evento.

Los posibles signos incluyen:

• Cambios de fluorescencia dependientes de la concentración.

• Mayor dispersión aparente

• Distribuciones amplias

• Poblaciones de dobletes inesperadas

• Tasas de eventos inestables

• Linealidad reducida después de la dilución.

Registros de métodos recomendados

Documento:

• Modelo de citómetro de flujo

• Configuración láser

• Filtros detectores

• Ganancia o voltaje del detector

• Configuración de dispersión

• Canal de disparo

• Umbral de activación

• Caudal de muestra

• Dilución de microesferas

• Composición del búfer

• tiempo de adquisición

• Número de eventos recopilados

• Puertas de análisis

• Número de lote del producto

Control de bloqueo y vinculación no específica

La adsorción no específica puede aumentar la fluorescencia de la muestra negativa y reducir la sensibilidad del ensayo.

Las posibles causas incluyen:

• Bloqueo insuficiente

• Bloqueador incompatible

• Exceso de ligando de captura

• Exceso de reportero fluorescente

• Lavado inadecuado

• Anticuerpos agregados

• Componentes de muestra hidrofóbicos

• Alta concentración de proteína en la muestra

• Agregación de partículas

• Interferencia de matriz

• Conjugados inestables

Analizar múltiples reactivos de bloqueo

Evaluar más de una formulación bloqueadora.

El mejor bloqueador debería reducir la fluorescencia de la muestra negativa y al mismo tiempo conservar la señal de la muestra positiva.

Optimizar la carga del ligando de captura

Más ligando no siempre es mejor.

La carga excesiva de ligando puede:

• Aumentar el consumo de reactivos

• Crear apiñamiento estérico

• Reducir la accesibilidad del objetivo

• Incrementar las interacciones no específicas

• Ampliar la variación del ensayo

Valorar el reportero fluorescente

Una concentración excesiva del reportero puede aumentar la fluorescencia de fondo.

Evalúe varias concentraciones de indicadores utilizando muestras positivas y negativas.

Optimice las condiciones de lavado

Los parámetros importantes incluyen:

• Número de lavados

• Composición del tampón de lavado

• Volumen de lavado

• Método de mezcla

• Método de recuperación de partículas

• Volumen de sobrenadante residual

Evalúe los detergentes con cuidado

Una pequeña cantidad de detergente compatible puede mejorar la dispersión de las partículas y reducir la adsorción no específica.

El exceso de detergente puede afectar las interacciones de las biomoléculas o el rendimiento del ensayo.

Evite la biotina libre durante la carga de ligandos

La biotina libre puede ocupar sitios de unión de estreptavidina y reducir la cantidad de ligando biotinilado capturado por las microesferas.

Revise los tampones, los suplementos, los medios de muestra y los reactivos de bloqueo para detectar un posible contenido de biotina.

Comparación de microesferas de estreptavidina de 3 µm y 1 µm

Ambos tamaños de partículas pueden respaldar la citometría de flujo y el desarrollo de ensayos basados ​​en perlas, pero tienen características prácticas diferentes.

Elija SAPS3UM-10 cuando:

• Es importante una detección de dispersión más sencilla.

• Se utilizará un citómetro de flujo convencional.

• Se requiere una entrada de partículas clara.

• Se prefiere el manejo de perlas de tamaño micrométrico.

• Se utilizará recuperación centrífuga.

• El proyecto implica ensayos de rutina basados ​​en perlas.

• Se desea una separación más fácil del fondo de partículas pequeñas.

Elija SAPS1UM-10 cuando:

• Se prefiere un mayor número de partículas por unidad de masa.

• Se requieren microesferas más pequeñas.

• Es importante una menor sedimentación de partículas.

• El instrumento puede detectar de forma fiable partículas de 1 µm.

• El ensayo utiliza pequeños volúmenes de reacción.

• Una superficie colectiva de partículas más grande puede ser beneficiosa.

La selección final debe basarse en el rendimiento del ensayo y no únicamente en el diámetro de las partículas.

Control de calidad y consistencia de lotes

Para la fabricación de reactivos de investigación y la compra al por mayor, SAPS3UM-10 debe evaluarse utilizando las especificaciones acordadas.

Los posibles parámetros de control de calidad incluyen:

• Diámetro medio de partículas

• Distribución del tamaño de partículas

• Coeficiente de variación del tamaño de partícula.

• Aspecto de la suspensión

• Contenido de sólidos

• Consistencia del recubrimiento de estreptavidina

• Capacidad de unión a biotina

• Dispersión de partículas

• Nivel agregado

• Recuperación de partículas

• Fluorescencia de fondo

• Unión no específica

• control microbiano

• Integridad del embalaje

• Estabilidad de almacenamiento

• Consistencia lote a lote

Pruebas de tamaño de partículas

La caracterización del tamaño de las partículas puede incluir:

• Diámetro medio

• Diámetro mediano

• Distribución de tallas

• Coeficiente de variación

• Imágenes de microscopía

• Caracterización específica del instrumento

El método de prueba debe indicarse al informar los resultados del tamaño.

Capacidad de unión a biotina

La capacidad de unión debe determinarse utilizando una sonda biotinilada definida.

El resultado puede verse afectado por:

• Tamaño molecular de la sonda

• Número de grupos de biotina

• Pureza de la sonda

• tiempo de incubación

• Composición del búfer

• Método de detección

• Base de cálculo

Los valores de capacidad de unión de diferentes proveedores pueden no ser directamente comparables cuando se utilizan diferentes sondas o métodos de prueba.

Control de calidad de citometría de flujo

Un método de control de calidad basado en citometría de flujo puede evaluar:

• Posición principal de la población de partículas.

• Porcentaje de microesferas cerradas

• Fluorescencia reportera después de cargar una sonda estándar

• Ancho de distribución de fluorescencia

• Separación de fondo

• Repetibilidad

• Población agregada

Utilice el mismo citómetro de flujo y configuración de adquisición al comparar lotes de producción.

Documentación específica del lote

Los documentos disponibles pueden incluir:

• Certificado de Análisis

• Especificación del producto

• Resultados del tamaño de partícula

• Resultados del contenido de sólidos

• Resultados de capacidad de unión

• Ficha de datos de seguridad

• Instrucciones de manejo

• Recomendaciones de almacenamiento

• Número de lote

• fecha de producción

Las pruebas de liberación requeridas y los límites de aceptación deben confirmarse antes de la fabricación a granel.

Fabricación a granel y personalización

Shanghai SanYu Biotechnology Co., Ltd. proporciona microesferas de estreptavidina SHBC para investigación de laboratorio, desarrollo piloto, producción repetida y compra al por mayor.

Evaluación de muestras de investigación

Se pueden utilizar muestras para evaluar:

• Detección por citometría de flujo

• Dispersión de partículas

• Actividad de estreptavidina

• Carga de ligando biotinilado

• Unión no específica

• Recuperación de partículas

• Viabilidad del ensayo

• Compatibilidad de instrumentos

Desarrollo a escala piloto

Los lotes piloto pueden admitir:

• Optimización del ensayo

• Verificación de capacidad vinculante

• Estudios de estabilidad

• Selección de búfer

• Evaluación de embalaje

• Desarrollo de control de calidad

• Verificación del cliente

• Transferencia de proceso

Producción a granel

La fabricación a granel se puede organizar una vez confirmadas las especificaciones técnicas y los requisitos de calidad.

Por favor proporcione:

• Cantidad requerida

• Demanda anual esperada

• Tamaño de paquete preferido

• Aplicación prevista

• Diámetro de partícula requerido

• Contenido de sólidos requerido

• Capacidad de encuadernación requerida

• tipo de ligando

• Requisitos de búfer

• Restricciones conservantes

• Requisitos de control de calidad

• Requisitos de documentación

• Calendario de entrega

• Destino de entrega

Diámetro de partícula personalizado

Se pueden discutir diámetros de partículas alternativos según el ensayo previsto y la viabilidad técnica.

Recubrimiento de estreptavidina personalizado

Se pueden evaluar los objetivos de carga de estreptavidina o capacidad de unión específicos del proyecto.

Codificación de fluorescencia personalizada

Para proyectos de citometría de flujo múltiple, se pueden analizar las microesferas de estreptavidina codificadas con fluorescencia.

Las opciones potenciales pueden incluir:

• Diferentes longitudes de onda de excitación.

• Diferentes longitudes de onda de emisión

• Múltiples colores de fluorescencia

• Múltiples niveles de intensidad de fluorescencia

• Códigos de partículas específicos del cliente

Concentración personalizada

Se pueden discutir concentraciones de sólidos alternativas de acuerdo con los requisitos de procesamiento, empaque y aplicación.

Tampón y conservante personalizados

Se pueden considerar sistemas de amortiguación específicos del cliente o restricciones de conservantes después de la evaluación de compatibilidad y estabilidad.

Suministro de OEM y marcas privadas

Los formatos de cooperación disponibles pueden incluir:

• Embalaje OEM

• Etiquetas específicas del cliente

• Números de catálogo específicos del cliente

• Suministro de marca privada

• Personalización de documentos técnicos

• Suministro de materia prima a granel

Recomendaciones de manipulación y almacenamiento

Siga la etiqueta del producto final, la ficha técnica y el Certificado de análisis específico del lote.

Las recomendaciones generales incluyen:

• Almacenar en las condiciones de refrigeración especificadas.

• No congelar a menos que se haya validado la estabilidad de congelación y descongelación.

• Mantener el recipiente bien cerrado.

• Guarde el vial en posición vertical.

• Mezcle bien la suspensión antes de tomar la muestra.

• Utilice puntas de pipeta limpias y tubos de baja unión.

• Evite la contaminación del producto original.

• No permita que las microesferas se sequen.

• Evite repetidos cambios de temperatura innecesarios.

• No devuelva el material diluido al contenedor original.

• Registre el número de lote del producto y la fecha de apertura.

Resuspensión

Las microesferas del tamaño de una micra pueden sedimentarse durante el almacenamiento.

Antes de usar:

1. Deje que el vial alcance la temperatura de manipulación recomendada.

2. Invierta o gire suavemente el vial.

3. Aplique agitación controlada cuando sea necesario.

4. Confirmar que la suspensión sea homogénea.

5. Inspeccione si hay agregados irreversibles.

Evite la congelación

La congelación puede causar:

• Agregación de partículas

• Pérdida de actividad de estreptavidina.

• Cambios en la estabilidad de la suspensión.

• Recuperación reducida de partículas

• Mayor fondo de ensayo

Evite el secado

No permita que el pellet de microesferas se seque durante el lavado o procesamiento.

El secado puede causar agregación irreversible y rendimiento funcional reducido.

Proteger contra la biotina libre

Evite la biotina libre en tampones y reactivos durante la carga de ligando biotinilado.

Evalúe la estabilidad de las microesferas preparadas por separado

Las microesferas bloqueadas y cargadas con ligando pueden tener una estabilidad diferente a la de la suspensión SAPS3UM-10 original.

Evaluar la estabilidad del reactivo preparado final en las condiciones de almacenamiento previstas.

Preguntas frecuentes

¿Qué es SAPS3UM-10?

SAPS3UM-10 es una suspensión de microesferas recubiertas de estreptavidina de 3 µm suministrada con un 1 % de sólidos para capturar biomoléculas biotiniladas en citometría de flujo e investigación de ensayos basados ​​en perlas.

¿Qué es la marca SHBC?

SHBC es la marca de microesferas y materiales biotecnológicos de Shanghai SanYu Biotechnology Co., Ltd.

¿Cuál es el diámetro de las partículas?

El diámetro nominal de las partículas es de 3 µm.

El diámetro medido y la distribución del tamaño deben confirmarse mediante documentación específica del lote.

¿Cuál es el contenido de sólidos?

SAPS3UM-10 se suministra con 1% de sólidos.

¿Son magnéticas las microesferas SAPS3UM-10?

No se debe asumir que SAPS3UM-10 es magnético a menos que las propiedades magnéticas se indiquen específicamente en la especificación técnica.

Para un producto de estreptavidina magnética, seleccione un producto descrito específicamente como perlas magnéticas de estreptavidina.

¿Las microesferas son fluorescentes?

No se debe asumir que el producto estándar SAPS3UM-10 contiene un tinte fluorescente interno a menos que se indique específicamente la fluorescencia.

La detección por citometría de flujo puede utilizar dispersión de partículas o fluorescencia de un reportero vinculado.

¿Qué se puede unir a SAPS3UM-10?

La superficie de estreptavidina puede capturar anticuerpos, antígenos, proteínas, péptidos, oligonucleótidos, ADN, ARN, aptámeros y otras moléculas que contienen biotina biotinilados.

¿Puede un anticuerpo no modificado unirse directamente?

Un anticuerpo no modificado no se unirá específicamente a través de la interacción estreptavidina-biotina a menos que esté biotinilado o conectado a través de otro reactivo de unión compatible.

¿Se requiere la activación de EDC/NHS?

Normalmente no se requiere la activación de EDC/NHS cuando se carga una molécula biotinilada en microesferas recubiertas de estreptavidina.

¿Cuál es la capacidad de unión a biotina?

La capacidad vinculante debe confirmarse utilizando la especificación del producto o el Certificado de Análisis específico del lote.

No debe estimarse únicamente a partir del contenido de sólidos.

¿Se puede utilizar SAPS3UM-10 para citometría de flujo?

Sí. El diámetro de partícula de 3 µm es adecuado para la evaluación en ensayos de perlas de citometría de flujo e investigaciones basadas en partículas.

¿Puede un citómetro de flujo convencional detectar partículas de 3 µm?

Muchos citómetros de flujo convencionales pueden detectar microesferas de 3 µm utilizando ajustes de dispersión adecuados.

El rendimiento real depende de la óptica del instrumento, la configuración del láser, los detectores, los umbrales y los buffers.

¿Se puede utilizar el producto para inmunoensayos tipo sándwich?

Sí. Se puede inmovilizar un anticuerpo de captura biotinilado en la microesfera, seguido de la captura del objetivo y la detección con un anticuerpo indicador fluorescente.

¿Se puede utilizar el producto para la detección de ácidos nucleicos?

Sí. Se pueden inmovilizar oligonucleótidos, ADN, ARN, productos de PCR o aptámeros biotinilados para la captura de ácidos nucleicos y la investigación de hibridación.

¿Se puede utilizar SAPS3UM-10 en ensayos multiplex?

Sí, siempre que la población SAPS3UM-10 pueda distinguirse de las demás poblaciones de partículas.

Es posible que se requiera una codificación fluorescente personalizada.

¿Cómo se debe lavar SAPS3UM-10?

El método de lavado depende de la matriz de las partículas, la densidad, el tampón, el volumen y la recuperación requerida.

Se pueden evaluar métodos de centrifugación o filtración.

¿Por qué la recuperación de microesferas es baja?

Las posibles causas incluyen:

• Fuerza centrífuga insuficiente

• Corto tiempo de centrifugación

• Pérdida de partículas durante la eliminación del sobrenadante.

• Adhesión a la superficie del tubo.

• Método de separación incompatible

• Agregación de partículas

• Lavado excesivo

¿Cómo se puede reducir la unión no específica?

Optimice el reactivo de bloqueo, la concentración de ligando, la concentración del indicador, las condiciones de lavado, el nivel de detergente, la dilución de la muestra y el tiempo de incubación.

¿Se pueden utilizar tampones que contengan biotina libre?

La biotina libre puede bloquear los sitios de unión de estreptavidina y, en general, debe evitarse durante la carga del ligando.

¿Por qué se sedimentan las microesferas de 3 µm?

Las partículas del tamaño de una micra pueden sedimentarse durante el almacenamiento debido a su tamaño y densidad.

Mezcle bien la suspensión antes de cada paso de muestreo.

¿Se debe diluir SAPS3UM-10 antes de la citometría de flujo?

Sí. Prepare una dilución de trabajo de acuerdo con el número de partículas y la tasa de eventos requeridos.

Se recomienda una serie de diluciones durante el desarrollo del método.

¿Se pueden congelar las microesferas?

Por lo general, no se recomienda la congelación a menos que se haya validado específicamente la estabilidad de congelación y descongelación.

¿Se puede personalizar la concentración?

Se pueden discutir concentraciones de sólidos alternativas de acuerdo con los requisitos del proyecto y la viabilidad de fabricación.

¿Se puede personalizar la capacidad de encuadernación?

Se pueden evaluar los objetivos de carga de estreptavidina o capacidad de unión específicos del proyecto.

¿Se pueden producir microesferas de estreptavidina fluorescentes?

Se pueden analizar microesferas de estreptavidina fluorescentes o codificadas para proyectos calificados de citometría de flujo y ensayos multiplex.

¿Está disponible la producción a granel?

Sí. Shanghai SanYu Biotechnology Co., Ltd. admite muestras, lotes piloto, pedidos repetidos y producción a granel.

¿Qué información se requiere para una cotización?

Por favor proporcione:

• Número de catálogo SAPS3UM-10

• Cantidad requerida

• Previsión de compras anuales

• Tamaño de paquete preferido

• Aplicación prevista

• Modelo de citómetro de flujo

• Tipo de ligando biotinilado

• Capacidad de encuadernación requerida

• Número de microesferas requerido por prueba

• Restricciones de búfer

• Restricciones conservantes

• Requisitos de control de calidad

• Requisitos de documentación

• Destino de entrega

Solicite una muestra o una cotización al por mayor

Las microesferas de estreptavidina SHBC SAPS3UM-10 de 3 µm proporcionan una plataforma de partículas flexible para inmovilizar anticuerpos, proteínas, péptidos, oligonucleótidos, ADN, ARN, aptámeros y otras biomoléculas marcadas con biotina.

El producto es adecuado para:

• Ensayos de perlas de citometría de flujo

• Desarrollo de inmunoensayos basados ​​en perlas.

• Inmovilización de anticuerpos biotinilados.

• Estudios de interacción de proteínas.

• Captura de ácido nucleico

• Ensayos de hibridación

• Investigación de unión por afinidad

• Desarrollo de citometría de flujo múltiplex.

• Fabricación de reactivos de investigación.

SAPS3UM-10 proporciona:

• Diámetro nominal de partícula de 3 µm

• Superficie funcional de estreptavidina

• suspensión al 1% de sólidos

• Compatibilidad con biomoléculas biotiniladas

• Suministro de muestras y lotes piloto.

• Capacidad de fabricación a granel

• OEM y soporte de desarrollo personalizado

Para la evaluación de muestras o la compra al por mayor, proporcione la aplicación prevista, la cantidad requerida, el ligando biotinilado, la capacidad de unión deseada, la configuración del citómetro de flujo, los requisitos de embalaje y las especificaciones de control de calidad.

Nombre del producto: Microesferas de estreptavidina de 3 µm
Número de catálogo: SAPS3UM-10
Marca: SHBC
Fabricante: Shanghai SanYu Biotechnology Co., Ltd.
Diámetro nominal de partícula: 3 µm
Modificación de la superficie: Estreptavidina
Contenido de sólidos: 1 %
Aplicación principal: Citometría de flujo y ensayo de perlas
Capacidad de suministro para investigación: Muestras, lotes piloto y producción a granel
Uso previsto: Solo para uso en investigación. No para uso diagnóstico o terapéutico.