Microsphères de streptavidine 3um SAPS3UM-10 1 %

Microsphères de streptavidine 3 µm pour la cytométrie en flux

Les microsphères de streptavidine SHBC SAPS3UM-10 sont des microsphères fonctionnalisées en surface de 3 µm développées pour immobiliser les anticorps biotinylés, les antigènes, les protéines, les peptides, les oligonucléotides, l'ADN, l'ARN, les aptamères et d'autres biomolécules marquées à la biotine.

Le produit est fourni sous forme de suspension à 1 % de solides et est conçu pour le développement de tests de cytométrie en flux, la recherche de tests immunologiques à base de billes, les études d'interactions biomolécules, la capture d'acide nucléique, la détection basée sur les particules et la fabrication de réactifs de recherche.

Shanghai SanYu Biotechnology Co., Ltd. prend en charge l'évaluation d'échantillons en laboratoire, le développement à l'échelle pilote, la production répétée et l'approvisionnement en gros pour les entreprises de biotechnologie, les instituts de recherche, les laboratoires de cytométrie en flux, les fabricants de réactifs et les organisations de développement d'analyses.

Réponse rapide au produit

SAPS3UM-10 est une suspension de microsphères enrobées de streptavidine de 3 µm fournie à 1 % de solides. Sa surface fonctionnelle streptavidine lie les biomolécules biotinylées et peut être utilisée pour développer des tests de billes de cytométrie en flux, des systèmes de capture par affinité, des tests immunologiques, des méthodes de détection d'acide nucléique et des plateformes de recherche basées sur des particules multiplexes.

Points forts du produit

• Nom du produit : Microsphères de streptavidine de 3 µm

• Numéro de catalogue : SAPS3UM-10

• Marque : SHBC

• Fabricant : Shanghai SanYu Biotechnology Co., Ltd.

• Diamètre nominal des particules : 3 µm

• Modification de surface : streptavidine

• Teneur en matières solides : 1 %

• Principe de liaison : affinité streptavidine-biotine

• Forme physique : Suspension aqueuse de microsphères

• Application principale : recherche sur les tests de cytométrie en flux

• Capacité d’approvisionnement : échantillons, lots pilotes et production en vrac

• Personnalisation : Disponible selon faisabilité technique

• Utilisation prévue : Utilisation pour la recherche uniquement

Que sont les microsphères de streptavidine SAPS3UM-10 ?

SAPS3UM-10 se compose de microsphères de 3 µm avec de la streptavidine immobilisée à la surface des particules.

L'enrobage de streptavidine fournit des sites de liaison pour les molécules biotinylées. Les chercheurs peuvent charger un anticorps, un antigène, une protéine, un peptide, une sonde d'acide nucléique ou un autre ligand biotinylé sélectionné sur les microsphères sans effectuer d'activation covalente directe de la surface des microsphères.

Une fois la molécule de capture biotinylée immobilisée, les particules fonctionnalisées peuvent être utilisées comme phase solide pour la capture de cibles, la détection de fluorescence, l'analyse des interactions biomoléculaires, le développement de tests immunologiques et la mesure par cytométrie en flux.

Les ligands biotinylés potentiels comprennent :

• Anticorps monoclonaux

• Anticorps polyclonaux

• Anticorps recombinants

• Fragments d'anticorps

• Antigènes

• Protéines recombinantes

• Peptides

• Enzymes

• Récepteurs

• Lectines

• Sondes oligonucléotidiques

• sondes ADN

• Sondes d'ARN

• Aptamères

• Petites molécules biotinylées

Le diamètre de 3 µm fournit une population de particules de taille micronique qui peut généralement produire des signaux de diffusion plus forts que les particules inférieures au micron ou de 1 µm sur de nombreux cytomètres en flux conventionnels.

Cela rend SAPS3UM-10 adapté aux chercheurs qui souhaitent une plate-forme de particules enrobées de streptavidine relativement facile à détecter, à contrôler, à laver et à analyser.

SAPS3UM-10 est fourni comme matière première pour la recherche et le développement de tests. Il n’est pas fourni sous forme de réactif de diagnostic fini, d’étalon d’étalonnage certifié pour la cytométrie en flux ou de bille de comptage absolue.

Spécifications techniques SAPS3UM-10

Les paramètres suivants doivent être confirmés à l’aide des spécifications techniques finales ou du certificat d’analyse spécifique au lot :

• Matrice de particules

• Diamètre moyen des particules mesuré

• Distribution granulométrique

• Coefficient de variation granulométrique

• Densité d'enrobage de streptavidine

• Capacité de liaison à la biotine

• Concentration en nombre de particules

• Tampon de suspension

• pH tampon

• Stabilisant ou tensioactif

• Conservateur

• Taille du paquet

• Durée de conservation

• Conditions de stockage

La capacité de liaison doit être indiquée à l’aide d’une molécule d’essai définie, d’une méthode d’essai, d’une base de calcul et d’un résultat spécifique au lot.

La concentration de 1 % de solides ne doit pas être utilisée seule pour estimer la capacité de liaison à la biotine ou la concentration en nombre de particules.

Comment fonctionne la liaison streptavidine-biotine

La streptavidine est une protéine liant la biotine qui peut capturer des biomolécules biotinylées grâce à une forte interaction non covalente.

Lorsqu'un ligand biotinylé est mélangé avec SAPS3UM-10, le groupe biotine se lie aux sites streptavidine disponibles à la surface des microsphères.

La structure résultante peut être représentée comme suit :

Surface des microsphères – Streptavidine – Biotine – Ligand de capture

Pour un test d’anticorps, la structure peut être :

Microsphère – Streptavidine – Anticorps de capture biotinylé

L'anticorps de capture immobilisé peut se lier à son antigène cible. Un anticorps de détection marqué par fluorescence peut alors reconnaître un autre site sur l'antigène capturé, générant un signal de fluorescence associé aux microsphères qui peut être mesuré par cytométrie en flux.

Avantages de l’immobilisation streptavidine-biotine

• Aucune activation EDC/NHS n’est normalement requise pour le chargement du ligand.

• Une plateforme de microsphères peut être utilisée avec de nombreux ligands biotinylés.

• Le concepteur du test peut modifier la molécule de capture sans modifier la particule de base.

• L'immobilisation peut être réalisée dans des conditions aqueuses relativement douces.

• Des anticorps biotinylés, des protéines, des peptides et des sondes d'acide nucléique peuvent être utilisés.

• La plateforme convient au développement de tests modulaires.

• Le chargement du ligand peut être optimisé indépendamment de la détection en aval.

• Le même format de microsphères peut prendre en charge une recherche à cible unique ou multiplex.

Les performances finales dépendent de la biotinylation du ligand, de l’accessibilité à la biotine, de la longueur de l’espaceur, de la taille moléculaire, de la densité de la streptavidine, des conditions d’incubation, de l’encombrement de la surface et de la matrice de test.

Pourquoi choisir des microsphères de streptavidine de 3 µm ?

Détection plus facile par cytométrie en flux que les particules plus petites

Le diamètre des particules de 3 µm peut générer des signaux de diffusion directe et latérale plus forts que les microsphères de 1 µm ou submicroniques sur de nombreux cytomètres en flux conventionnels.

Cela peut aider les chercheurs :

• Localiser la population de microsphères

• Séparer les microsphères du fond tampon

• Établir une porte de dispersion stable

• Identifier les agrégats possibles

• Évaluer les populations singulet et doublet

• Confirmer la récupération des particules après le lavage

• Effectuer une acquisition de routine par cytométrie en flux

Les performances de l'instrument varient, la détection doit donc toujours être confirmée à l'aide du cytomètre en flux prévu.

Surface appropriée pour l’immobilisation de biomolécules

Une microsphère de 3 µm fournit une surface physique pour immobiliser les molécules de capture biotinylées.

La capacité de liaison utilisable dépend :

• Densité d'enrobage de streptavidine

• Activité streptavidine

• Taille moléculaire du ligand

• Niveau de biotinylation

• Conception d'entretoise

• Accessibilité stérique

• Concentration de ligands

• Conditions d'incubation

Une particule plus grosse ne garantit pas automatiquement une capacité de liaison rapportée plus élevée par milligramme. Des tests spécifiques au lot sont requis.

Lavage et récupération pratiques

Les particules de taille micronique peuvent être plus faciles à récupérer à l’aide d’un processus de centrifugation ou de filtration validé que les particules plus petites.

La méthode de séparation la plus adaptée dépend :

• Densité des particules

• Matrice de particules

• Volume d'échantillon

• Force centrifuge

• Temps de centrifugation

• Matériau du tube

• Composition du tampon

• Taux de récupération requis

SAPS3UM-10 ne doit pas être considéré comme magnétique à moins que les propriétés magnétiques ne soient spécifiquement indiquées dans sa documentation technique.

Conception de test flexible

Les chercheurs peuvent utiliser la même plateforme de microsphères de streptavidine avec différentes molécules de capture biotinylées.

Cela permet le développement rapide de tests ciblant différentes protéines, anticorps, antigènes, acides nucléiques, récepteurs ou ligands.

Adapté à l’intensification de la recherche à la production

SAPS3UM-10 peut être évalué dans un test à l'échelle du laboratoire, puis transféré vers une fabrication pilote ou en vrac une fois les spécifications confirmées.

Cela convient aux organisations qui ont besoin :

• Échantillons de recherche initiaux

• Plusieurs lots de développement

• Vérification à l'échelle pilote

• Comparaison lot à lot

• Approvisionnement à long terme

• Emballage OEM

• Contrôle qualité spécifique au client

Principales caractéristiques et avantages

Diamètre nominal des particules de 3 µm

La population de particules de taille micronique convient à la détection optimisée par cytométrie en flux, au scatter gating, aux tests de liaison basés sur des billes et au suivi des particules.

Surface fonctionnelle de la streptavidine

La surface capture les anticorps biotinylés, les protéines, les peptides, les oligonucléotides, les aptamères et d'autres molécules contenant de la biotine.

Suspension à 1 % de solides

SAPS3UM-10 est fourni à 1 % de solides et peut être dilué en fonction du nombre de particules requis, du volume d'analyse, du taux d'événements et de la capacité de liaison.

Immobilisation simple du ligand

Les ligands biotinylés peuvent être chargés sans activation directe par le carbodiimide de la microsphère par l'utilisateur final.

Plateforme d'analyse modulaire

La microsphère de base peut être combinée avec différentes molécules de capture biotinylées pour plusieurs projets de recherche.

Compatible avec la détection des reporters fluorescents

Un signal de cytométrie en flux peut être généré à l’aide d’anticorps de détection fluorescents, d’anticorps secondaires, de sondes ou d’autres rapporteurs.

Convient à la recherche Singleplex et Multiplex

SAPS3UM-10 peut être évalué comme une population de microsphères dans un système multiplex basé sur des particules.

Capacité de production en vrac

SHBC prend en charge les échantillons de laboratoire, les lots pilotes, les commandes répétées et la fabrication en vrac.

Options de développement personnalisées

La taille des particules, la concentration, l'enrobage de streptavidine, la capacité de liaison, le tampon, l'emballage, le codage de fluorescence et les exigences de contrôle qualité peuvent être discutés pour les projets qualifiés.

Applications dans la recherche sur la cytométrie en flux

Immunoessais sandwich à base de billes

SAPS3UM-10 peut être utilisé comme phase solide dans un test immunologique sandwich par cytométrie en flux.

Un flux de travail typique comprend :

1. Immobilisation d'un anticorps de capture biotinylé.

2. Bloquer la surface des microsphères.

3. Incuber les particules avec l'échantillon.

4. Capturer l'antigène cible.

5. Ajout d'un anticorps de détection fluorescent.

6. Lavage des réactifs non liés.

7. Mesure de la fluorescence associée aux microsphères par cytométrie en flux.

Les cibles potentielles de recherche comprennent :

• Cytokines

• Hormones

• Facteurs de croissance

• Anticorps

• Antigènes

• Enzymes

• Biomarqueurs

• Protéines associées aux agents pathogènes

• Analytes environnementaux

• Composés de recherche

Tests de cytométrie en flux compétitifs

Les microsphères peuvent également être évaluées dans des formats de tests compétitifs.

Dans un test compétitif, le signal de fluorescence mesuré peut diminuer ou augmenter en fonction de la manière dont l'échantillon cible entre en compétition avec un réactif marqué ou immobilisé.

Les formats compétitifs peuvent être pertinents pour :

• Petites molécules

• Peptides

• Haptènes

• Drogues

• Toxines

• Hormones

• Cibles avec un seul site de liaison accessible

Capture d'anticorps biotinylés

Les anticorps biotinylés peuvent être immobilisés sur SAPS3UM-10 pour :

• Détection d'antigène

• Dépistage d'anticorps

• Dépistage des hybridomes

• Recherche de biomarqueurs

• Comparaison capture-anticorps

• Etudes de faisabilité des analyses

• Évaluation de la spécificité

• Études de réactivité croisée

Recherche sur les interactions entre protéines et peptides

Des protéines ou peptides biotinylés peuvent être immobilisés pour étudier :

• Interactions anticorps-antigène

• Interactions protéine-protéine

• Liaison récepteur-ligand

• Interactions enzyme-substrat

• Reconnaissance d'épitopes

• Dépistage des inhibiteurs

• Liaison du candidat médicament

• Comparaison d'affinité

Capture et détection des acides nucléiques

Des oligonucléotides biotinylés, de l'ADN, de l'ARN, des produits de PCR et des aptamères peuvent être attachés à SAPS3UM-10.

Les applications potentielles comprennent :

• Capture d'acide nucléique spécifique à une séquence

• Développement de tests d'hybridation

• Recherche sur la détection des mutations

• Recherche sur le génotypage

• Capture de produits PCR

• Détection basée sur l'aptamère

• Études d'interaction ADN-protéine

• Études de liaison à l'ARN

• Développement d'essais moléculaires

Recherche sur la liaison cellulaire

Lorsqu'elles sont recouvertes d'un anticorps, d'un récepteur, d'un ligand ou d'une lectine biotinylés appropriés, les microsphères peuvent être évaluées pour leur liaison aux cellules ou aux cibles de la surface cellulaire.

Les paramètres importants incluent :

• Densité de ligand

• Rapport microsphère/cellule

• Temps d'incubation

• Température

• Concentration cellulaire

• Méthode de mélange

• Conditions de lavage

• Viabilité cellulaire

• Attachement de particules non spécifique

Les microsphères synthétiques ne sont pas des cellules biologiques et ne doivent pas être utilisées comme substitut cellulaire direct sans validation spécifique à l'application.

Cytométrie en flux multiplex

Différentes populations de microsphères peuvent potentiellement être distinguées par :

• Diamètre des particules

• Couleur de fluorescence interne

• Intensité de fluorescence interne

• Couleur visible des particules

• Ligand superficiel

• Fluorescence du journaliste

Pour le développement multiplex, chaque population doit rester distincte après le chargement du ligand, le blocage, l’incubation de l’échantillon, le lavage et le stockage.

Le canal de fluorescence rapporteur doit également être séparé de tout signal de codage de microsphère interne.

Recherche sur les biocapteurs et les tests d'affinité

SAPS3UM-10 peut être évalué dans :

• Biocapteurs à base de particules

• Dosages microfluidiques

• Méthodes de capture d'affinité

• Tests basés sur l'imagerie

• Criblage à haut débit

• Recherche sur la purification des protéines

• Etudes d'enrichissement de biomolécules

• Analyse de liaison au ligand

Biomolécules biotinylées compatibles

Anticorps biotinylés

Les formats d’anticorps compatibles peuvent inclure :

• IgG complète

• IgM

• Fragments fabuleux

• Fragments F(ab′)₂

• Fragments variables à chaîne unique

• Anticorps recombinants

• Anticorps à domaine unique

• Formats d'anticorps modifiés

L’activité des anticorps après immobilisation dépend de la méthode de biotinylation et de l’emplacement de la biotine.

Une biotinylation aléatoire excessive peut réduire l’activité de liaison à l’antigène ou créer une orientation variable des anticorps.

Protéines biotinylées

Les exemples incluent :

• Antigènes recombinants

• Enzymes

• Cytokines

• Facteurs de croissance

• Récepteurs

• Lectines

• Protéines de liaison

• Protéines de fusion

• Normes protéiques

Peptides biotinylés

Les utilisations potentielles comprennent :

• Cartographie des épitopes

• Dépistage d'anticorps

• Études de liaison aux récepteurs

• Recherche enzymatique

• Tests de dépistage de drogues

• Études d'interactions protéiques

Un espaceur entre le peptide et la biotine peut améliorer l'accessibilité de la cible dans certaines applications.

Acides nucléiques biotinylés

Les formats compatibles peuvent inclure :

• ADN simple brin

• ADN double brin

• ARN

• Sondes oligonucléotidiques

• amplicons PCR

• Aptamères

• Sondes d'acide nucléique modifiées

• Capturer des séquences

Petites molécules biotinylées

Les petits composés biotinylés peuvent également être immobilisés lorsque le groupe biotine reste accessible à la surface de la streptavidine.

La longueur de l’espaceur et l’orientation moléculaire doivent être prises en compte lors de la conception du test.

Protocole de chargement de ligand biotinylé recommandé

Le flux de travail suivant est un point de départ général du développement. Il ne s’agit pas d’un protocole de libération fixe pour chaque biomolécule.

1. Remettre en suspension SAPS3UM-10

Laisser le produit atteindre la température de manipulation recommandée.

Mélanger le flacon par inversion douce, rotation ou vortex contrôlé jusqu'à ce que la suspension de microsphères soit homogène.

Étant donné que des microsphères de la taille d'un micron peuvent se déposer pendant le stockage, mélangez le produit avant chaque étape d'échantillonnage.

Évitez la formation de mousse excessive.

2. Calculez la quantité de microsphères requise

Déterminez la quantité de microsphères requise en fonction de :

• Nombre d'essais

• Quantité de microsphères par test

• Nombre requis d'événements de cytométrie en flux

• Concentration cible attendue

• Volume d'analyse

• Capacité de liaison au ligand

• Nombre d'étapes de lavage

• Perte de traitement attendue

Utilisez les informations de capacité de liaison spécifiques au lot lorsqu'elles sont disponibles.

3. Transférez les microsphères

Transférez la quantité requise de SAPS3UM-10 dans un tube à centrifuger ou un récipient de traitement propre et à faible liaison.

Utilisez des pointes de pipettes propres et évitez de contaminer le récipient d’origine.

4. Lavez les microsphères

Laver les particules à l’aide d’un tampon de liaison compatible avec la streptavidine et le ligand biotinylé.

Un tampon de liaison préliminaire peut contenir un tampon aqueux neutre et une concentration de sel appropriée.

Évitez les tampons ou les suppléments contenant de la biotine libre pendant le chargement du ligand.

Les méthodes possibles de récupération des particules comprennent :

• Centrifugation

• Filtration membranaire

• Filtration à flux tangentiel

• Autres méthodes validées de séparation solide-liquide

Les conditions de centrifugation requises doivent être établies expérimentalement pour SAPS3UM-10.

5. préparer le ligand biotinylé

Diluer l’anticorps, la protéine, le peptide ou l’acide nucléique biotinylé dans le tampon de liaison sélectionné.

Les considérations importantes comprennent :

• Concentration de ligands

• Niveau de biotinylation

• Pureté moléculaire

• Niveau global

• Additifs tampons

• Contamination gratuite par la biotine

• Stabilité des protéines

• Stabilité des acides nucléiques

6. Ajouter le ligand biotinylé

Combiner les microsphères lavées avec le ligand biotinylé.

Utiliser un mélange doux pour maintenir une suspension uniforme pendant l’incubation.

Évitez les conditions de mélange qui provoquent du moussage, des dommages aux particules ou une dénaturation des biomolécules.

7. Optimiser l'incubation

Les paramètres à évaluer comprennent :

• Concentration de microsphères

• Concentration de ligands

• Rapport ligand/microsphère

• Temps d'incubation

• Température d'incubation

• pH tampon

• Concentration en sel

• Vitesse de mélange

• Volume total de réaction

Testez plusieurs concentrations de ligand plutôt que de supposer que la charge maximale de ligand fournira le meilleur résultat de test.

Une charge superficielle excessive peut créer un encombrement stérique et réduire l’accessibilité de la cible.

8. Supprimer le ligand non lié

Séparez et lavez les microsphères pour éliminer les molécules biotinylées non liées.

Un lavage insuffisant peut augmenter le bruit de fond, tandis qu'un lavage excessif peut réduire la récupération des particules.

9. Bloquez les microsphères

Incuber les microsphères chargées de ligand avec un réactif de blocage compatible avec l’application.

Les matériaux bloquants potentiels comprennent :

• Albumine sérique bovine

• Caséine

• Gélatine de poisson

• Immunoglobuline non immunitaire

• Polymères bloquants synthétiques

• Tampons commerciaux bloquant les microsphères

Les performances de blocage doivent être évaluées à l’aide d’échantillons positifs et négatifs.

10. Remettre en suspension les microsphères préparées

Remettre en suspension les particules enrobées et bloquées dans un tampon de test ou de stockage approprié.

Évaluer:

• Dispersion des particules

• Rétention de ligand

• Activité de liaison

• Signal de fond

• Récupération de microsphères

• Stabilité à court terme

• Stabilité à long terme

• Sensibilité au gel et au dégel

• Stabilité microbienne

Flux de travail de test de billes de cytométrie en flux

1. Préparez les microsphères de capture

Chargez SAPS3UM-10 avec la molécule de capture biotinylée sélectionnée.

Lavez et bloquez les particules avant de tester les échantillons.

2. Préparer les contrôles

Les contrôles recommandés peuvent inclure :

• Vierge de tampon d'acquisition

• Contrôle des microsphères non enrobées

• Microsphères de streptavidine sans ligand biotinylé

• Microsphères chargées de ligand sans échantillon

• Échantillon négatif

• Échantillon positif

• Contrôle réservé aux journalistes

• Contrôle isotypique

• Contrôle du ligand biotinylé non pertinent

• Contrôles monochromes pour des expériences multicolores

3. Ajoutez l'échantillon de test

Combinez les microsphères préparées avec l’échantillon.

Optimiser:

• Volume d'échantillon

• Dilution de l'échantillon

• Concentration de microsphères

• Temps d'incubation

• Température d'incubation

• Méthode de mélange

• Plage de concentration cible

• Compatibilité matricielle

4. Lavez les microsphères

Supprimez les composants de l’échantillon non liés tout en maintenant une récupération acceptable des microsphères.

Enregistrez le nombre et le volume des étapes de lavage pendant le développement de la méthode.

5. Ajoutez le journaliste fluorescent

Ajoutez un anticorps de détection fluorescent, un anticorps secondaire, une sonde d'acide nucléique ou un autre réactif rapporteur.

Le fluorophore rapporteur doit être compatible avec les lasers et les détecteurs du cytomètre en flux prévu.

6. Incuber et laver

Optimisez la concentration du journaliste et le temps d’incubation.

Supprimez le journaliste fluorescent non lié pour réduire le signal de fond.

7. Remettre en suspension pour acquisition

Remettre en suspension les particules finales dans un tampon de cytométrie en flux propre et à faible fond.

Mélanger les particules immédiatement avant l'acquisition.

8. Acquérir des données de cytométrie en flux

Recueillez suffisamment d’événements de microsphères pour prendre en charge l’analyse statistique prévue.

Les sorties possibles incluent :

• Intensité médiane de fluorescence

• Intensité moyenne de fluorescence

• Pourcentage de microsphères positives

• Rapport signal/arrière-plan

• Courbe dose-réponse

• Précision du test

• Récupération

• Spécificité

• Réactivité croisée

• Recherche sur la limite de détection

9. Analyser les données

Établissez les régions positives et négatives à l’aide de contrôles appropriés.

Ne définissez pas le seuil positif en utilisant uniquement l’échantillon de test.

Détection et déclenchement de microsphères de 3 µm

Détection de diffusion directe et latérale

La population de microsphères de 3 µm peut être localisée à l’aide de la diffusion directe et de la diffusion latérale sur de nombreux cytomètres en flux conventionnels.

Un graphique préliminaire FSC versus SSC peut être utilisé pour identifier la principale population de particules et exclure :

• Bruit électronique

• Petits débris

• Particules tampons

• Gros agrégats

• Événements irréguliers

La position exacte de la diffusion dépend de la matrice de particules, de l'indice de réfraction, de l'optique de l'instrument, de la configuration du laser et des paramètres du détecteur.

Détection de fluorescence

Si SAPS3UM-10 ne contient pas de colorant fluorescent interne, la population de microsphères peut toujours être mesurée en utilisant la fluorescence d'un rapporteur lié.

Les parcelles possibles incluent :

• FSC contre SSC

• FSC versus fluorescence rapporteur

• SSC versus fluorescence rapporteur

• Histogramme de fluorescence Reporter

• Zone de fluorescence en fonction de la hauteur

• Zone de dispersion par rapport à la largeur

Analyse singulet et globale

Les agrégats de particules peuvent produire des signaux de diffusion et de fluorescence plus élevés que les particules individuelles.

Les paramètres de géométrie des impulsions peuvent aider à distinguer les singulets des doublets ou des agrégats plus grands.

Les paramètres potentiels incluent :

• Zone de signalisation

• Hauteur du signal

• Largeur du signal

Sélection du déclencheur

Les déclencheurs d’acquisition possibles comprennent :

• Diffusion vers l'avant

• Dispersion latérale

• Fluorescence du journaliste

• Fluorescence des microsphères internes

• Stratégies de gate combinées

Le déclencheur doit fournir une séparation claire entre les événements de microsphères et l’arrière-plan.

Concentration de particules

Exécutez une série de dilutions lors du développement initial de la méthode.

Une suspension trop concentrée peut provoquer une coïncidence ou une détection d'essaim, dans laquelle plusieurs particules sont enregistrées comme un seul événement.

Les signes possibles incluent :

• Changements de fluorescence dépendant de la concentration

• Augmentation de la dispersion apparente

• Larges distributions

• Populations doublets inattendues

• Taux d'événements instables

• Linéarité réduite après dilution

Enregistrements de méthodes recommandées

Document:

• Modèle de cytomètre en flux

• Configuration des lasers

• Filtres de détecteur

• Gain ou tension du détecteur

• Paramètres de dispersion

• Canal de déclenchement

• Seuil de déclenchement

• Débit d'échantillon

• Dilution des microsphères

• Composition du tampon

• Temps d'acquisition

• Nombre d'événements collectés

• Portes d'analyse

• Numéro de lot du produit

Contrôle de blocage et de liaison non spécifique

L'adsorption non spécifique peut augmenter la fluorescence des échantillons négatifs et réduire la sensibilité du test.

Les causes potentielles comprennent :

• Blocage insuffisant

• Bloqueur incompatible

• Excès de ligand de capture

• Reporteur fluorescent excédentaire

• Lavage inadéquat

• Anticorps agrégés

• Composants d'échantillon hydrophobes

• Concentration élevée en protéines de l'échantillon

• Agrégation de particules

• Interférence matricielle

• Conjugués instables

Filtrer plusieurs réactifs bloquants

Évaluez plus d’une formulation bloquante.

Le meilleur bloqueur devrait réduire la fluorescence de l’échantillon négatif tout en conservant le signal de l’échantillon positif.

Optimiser le chargement du ligand de capture

Plus de ligand n’est pas toujours meilleur.

Une charge excessive de ligand peut :

• Augmenter la consommation de réactifs

• Créer un encombrement stérique

• Réduire l’accessibilité de la cible

• Augmenter les interactions non spécifiques

• Élargir la variation du test

Titrer le journaliste fluorescent

Une concentration excessive de rapporteur peut augmenter la fluorescence de fond.

Évaluez plusieurs concentrations de reporters à l’aide d’échantillons positifs et négatifs.

Optimiser les conditions de lavage

Les paramètres importants incluent :

• Nombre de lavages

• Composition du tampon de lavage

• Volume de lavage

• Méthode de mélange

• Méthode de récupération des particules

• Volume surnageant résiduel

Évaluez soigneusement les détergents

Une petite quantité de détergent compatible peut améliorer la dispersion des particules et réduire l'adsorption non spécifique.

Un excès de détergent peut affecter les interactions des biomolécules ou les performances du test.

Évitez la biotine libre pendant le chargement du ligand

La biotine libre peut occuper les sites de liaison à la streptavidine et réduire la quantité de ligand biotinylé capturée par les microsphères.

Examinez les tampons, les suppléments, les échantillons de milieu et les réactifs de blocage pour connaître leur éventuelle teneur en biotine.

Comparaison des microsphères de streptavidine de 3 µm et 1 µm

Les deux tailles de particules peuvent prendre en charge le développement de cytométrie en flux et de tests à base de billes, mais elles présentent des caractéristiques pratiques différentes.

Choisissez SAPS3UM-10 Quand :

• Une détection plus facile de la dispersion est importante.

• Un cytomètre en flux conventionnel sera utilisé.

• Un déclenchement clair des particules est requis.

• La manipulation de billes de la taille d’un micron est préférable.

• La récupération centrifuge sera utilisée.

• Le projet implique des analyses de routine à base de billes.

• Une séparation plus facile du fond de petites particules est souhaitée.

Choisissez SAPS1UM-10 Quand :

• Un nombre de particules plus élevé par unité de masse est préféré.

• Des microsphères plus petites sont nécessaires.

• Une sédimentation moindre des particules est importante.

• L'instrument peut détecter de manière fiable des particules de 1 µm.

• Le test utilise de petits volumes de réaction.

• Une plus grande surface collective de particules peut être bénéfique.

La sélection finale doit être basée sur les performances du test plutôt que sur le seul diamètre des particules.

Contrôle qualité et cohérence des lots

Pour la fabrication de réactifs de recherche et l'achat en gros, SAPS3UM-10 doit être évalué à l'aide de spécifications convenues.

Les paramètres potentiels de contrôle de qualité comprennent :

• Diamètre moyen des particules

• Distribution granulométrique

• Coefficient de variation granulométrique

• Apparence des suspensions

• Teneur en solides

• Consistance de l'enrobage de streptavidine

• Capacité de liaison à la biotine

• Dispersion des particules

• Niveau global

• Récupération de particules

• Fluorescence de fond

• Liaison non spécifique

• Contrôle microbien

• Intégrité de l'emballage

• Stabilité de stockage

• Cohérence d'un lot à l'autre

Tests de taille des particules

La caractérisation granulométrique peut inclure :

• Diamètre moyen

• Diamètre médian

• Répartition des tailles

• Coefficient de variation

• Images de microscopie

• Caractérisation spécifique à l'instrument

La méthode d'essai doit être indiquée lors de la communication des résultats de taille.

Capacité de liaison à la biotine

La capacité de liaison doit être déterminée à l’aide d’une sonde biotinylée définie.

Le résultat peut être affecté par :

• Taille moléculaire de la sonde

• Nombre de groupes de biotine

• Pureté de la sonde

• Temps d'incubation

• Composition du tampon

• Méthode de détection

• Base de calcul

Les valeurs de capacité de liaison de différents fournisseurs peuvent ne pas être directement comparables lorsque différentes sondes ou méthodes de test sont utilisées.

Contrôle qualité de la cytométrie en flux

Une méthode de CQ basée sur la cytométrie en flux peut évaluer :

• Position principale de la population de particules

• Pourcentage de microsphères fermées

• Fluorescence du reporter après chargement d'une sonde standard

• Largeur de distribution de fluorescence

• Séparation d'arrière-plan

• Répétabilité

• Population globale

Utilisez le même cytomètre en flux et les mêmes paramètres d’acquisition lors de la comparaison des lots de production.

Documentation spécifique au lot

Les documents disponibles peuvent inclure :

• Certificat d'analyse

• Spécification du produit

• Résultats granulométriques

• Résultats sur la teneur en solides

• Résultats de capacité de liaison

• Fiche de données de sécurité

• Instructions de manipulation

• Recommandations de stockage

• Numéro de lot

• Date de fabrication

Les tests de libération requis et les limites d'acceptation doivent être confirmés avant la fabrication en vrac.

Fabrication en vrac et personnalisation

Shanghai SanYu Biotechnology Co., Ltd. fournit des microsphères de streptavidine SHBC pour la recherche en laboratoire, le développement pilote, la production répétée et l'achat en gros.

Évaluation des échantillons de recherche

Des échantillons peuvent être utilisés pour évaluer :

• Détection par cytométrie en flux

• Dispersion des particules

• Activité streptavidine

• Chargement de ligand biotinylé

• Liaison non spécifique

• Récupération de particules

• Faisabilité du test

• Compatibilité des instruments

Développement à l’échelle pilote

Les lots pilotes peuvent prendre en charge :

• Optimisation des tests

• Vérification de la capacité de liaison

• Etudes de stabilité

• Sélection du tampon

• Évaluation des emballages

• Développement du contrôle qualité

• Vérification du client

• Transfert de processus

Production en vrac

La fabrication en vrac peut être organisée après confirmation des spécifications techniques et des exigences de qualité.

Veuillez fournir :

• Quantité requise

• Demande annuelle attendue

• Taille de paquet préférée

• Application prévue

• Diamètre de particule requis

• Teneur en solides requise

• Capacité de liaison requise

• Type de ligand

• Exigences en matière de tampon

• Restrictions relatives aux conservateurs

• Exigences de contrôle de qualité

• Exigences en matière de documentation

• Calendrier de livraison

• Lieu de livraison

Diamètre de particule personnalisé

D’autres diamètres de particules peuvent être discutés en fonction du test prévu et de la faisabilité technique.

Revêtement personnalisé à la streptavidine

Les objectifs de charge ou de capacité de liaison de streptavidine spécifiques au projet peuvent être évalués.

Codage de fluorescence personnalisé

Pour les projets de cytométrie en flux multiplex, les microsphères de streptavidine codées par fluorescence peuvent être discutées.

Les options potentielles peuvent inclure :

• Différentes longueurs d'onde d'excitation

• Différentes longueurs d'onde d'émission

• Plusieurs couleurs de fluorescence

• Plusieurs niveaux d'intensité de fluorescence

• Codes de particules spécifiques au client

Concentration personnalisée

Des concentrations alternatives de solides peuvent être discutées en fonction des exigences de traitement, d'emballage et d'application.

Tampon et conservateur personnalisés

Des systèmes tampons spécifiques au client ou des restrictions en matière de conservateurs peuvent être envisagés après évaluation de la compatibilité et de la stabilité.

Fourniture OEM et marque privée

Les formats de coopération disponibles peuvent inclure :

• Emballage OEM

• Étiquettes spécifiques au client

• Numéros de catalogue spécifiques au client

• Approvisionnement en marque privée

• Personnalisation des documents techniques

• Approvisionnement en matières premières en vrac

Recommandations de manipulation et de stockage

Suivez l'étiquette du produit final, la fiche technique et le certificat d'analyse spécifique au lot.

Les recommandations générales comprennent :

• Conserver dans les conditions réfrigérées spécifiées.

• Ne pas congeler à moins que la stabilité gel-dégel ait été validée.

• Gardez le récipient bien fermé.

• Conservez le flacon à la verticale.

• Mélangez soigneusement la suspension avant de prélever des échantillons.

• Utilisez des pointes de pipettes propres et des tubes à faible liaison.

• Évitez la contamination du produit original.

• Ne laissez pas sécher les microsphères.

• Évitez les changements de température inutiles et répétés.

• Ne remettez pas le matériau dilué dans le récipient d'origine.

• Enregistrez le numéro de lot du produit et la date d’ouverture.

Remise en suspension

Des microsphères de la taille d'un micron peuvent se déposer pendant le stockage.

Avant utilisation :

1. Laisser le flacon atteindre la température de manipulation recommandée.

2. Retournez ou faites pivoter doucement le flacon.

3. Appliquer un vortex contrôlé si nécessaire.

4. Confirmez que la suspension est homogène.

5. Inspectez les agrégats irréversibles.

Évitez le gel

Le gel peut provoquer :

• Agrégation de particules

• Perte d'activité de la streptavidine

• Modifications de la stabilité de la suspension

• Récupération réduite des particules

• Augmentation du fond de test

Évitez de sécher

Ne laissez pas les microsphères sécher pendant le lavage ou le traitement.

Le séchage peut provoquer une agrégation irréversible et une performance fonctionnelle réduite.

Protéger contre la biotine libre

Évitez la biotine libre dans les tampons et les réactifs pendant le chargement du ligand biotinylé.

Évaluer séparément la stabilité des microsphères préparées

Les microsphères chargées de ligand et bloquées peuvent avoir une stabilité différente de celle de la suspension SAPS3UM-10 d'origine.

Évaluer la stabilité du réactif final préparé dans les conditions de stockage prévues.

Foire aux questions

Qu'est-ce que SAPS3UM-10 ?

SAPS3UM-10 est une suspension de microsphères enrobées de streptavidine de 3 µm fournie à 1 % de solides pour capturer des biomolécules biotinylées dans la recherche en cytométrie en flux et en analyses à base de billes.

Qu'est-ce que la marque SHBC ?

SHBC est la marque de microsphères et de matériaux biotechnologiques de Shanghai SanYu Biotechnology Co., Ltd.

Quel est le diamètre des particules ?

Le diamètre nominal des particules est de 3 µm.

Le diamètre mesuré et la distribution des tailles doivent être confirmés à l'aide de la documentation spécifique au lot.

Quelle est la teneur en solides ?

SAPS3UM-10 est fourni à 1 % de solides.

Les microsphères SAPS3UM-10 sont-elles magnétiques ?

SAPS3UM-10 ne doit pas être considéré comme magnétique à moins que les propriétés magnétiques ne soient spécifiquement indiquées dans les spécifications techniques.

Pour un produit à base de streptavidine magnétique, sélectionnez un produit spécifiquement décrit sous le nom de billes magnétiques de streptavidine.

Les microsphères sont-elles fluorescentes ?

Le produit SAPS3UM-10 standard ne doit pas être supposé contenir un colorant fluorescent interne à moins que la fluorescence ne soit spécifiquement indiquée.

La détection par cytométrie en flux peut utiliser la diffusion de particules ou la fluorescence d'un rapporteur lié.

Qu'est-ce qui peut se lier à SAPS3UM-10 ?

La surface de la streptavidine peut capturer des anticorps biotinylés, des antigènes, des protéines, des peptides, des oligonucléotides, de l'ADN, de l'ARN, des aptamères et d'autres molécules contenant de la biotine.

Un anticorps non modifié peut-il se lier directement ?

Un anticorps non modifié ne se liera pas spécifiquement via l’interaction streptavidine-biotine à moins qu’il ne soit biotinylé ou connecté via un autre réactif de liaison compatible.

L’activation EDC/NHS est-elle requise ?

L’activation EDC/NHS n’est normalement pas nécessaire lors du chargement d’une molécule biotinylée sur des microsphères recouvertes de streptavidine.

Quelle est la capacité de liaison à la biotine ?

La capacité de liaison doit être confirmée à l’aide des spécifications du produit ou du certificat d’analyse spécifique au lot.

Elle ne doit pas être estimée uniquement à partir de la teneur en matières solides.

SAPS3UM-10 peut-il être utilisé pour la cytométrie en flux ?

Oui. Le diamètre des particules de 3 µm convient à l’évaluation dans les analyses de billes de cytométrie en flux et à la recherche basée sur les particules.

Un cytomètre en flux conventionnel peut-il détecter des particules de 3 µm ?

De nombreux cytomètres en flux conventionnels peuvent détecter des microsphères de 3 µm en utilisant des paramètres de diffusion appropriés.

Les performances réelles dépendent de l'optique de l'instrument, de la configuration du laser, des détecteurs, des seuils et des tampons.

Le produit peut-il être utilisé pour des immunoessais sandwich ?

Oui. Un anticorps de capture biotinylé peut être immobilisé sur la microsphère, suivi d'une capture et d'une détection de cible avec un anticorps rapporteur fluorescent.

Le produit peut-il être utilisé pour la détection des acides nucléiques ?

Oui. Les oligonucléotides biotinylés, l'ADN, l'ARN, les produits de PCR ou les aptamères peuvent être immobilisés pour la recherche sur la capture et l'hybridation des acides nucléiques.

SAPS3UM-10 peut-il être utilisé dans des tests multiplex ?

Oui, à condition que la population SAPS3UM-10 puisse être distinguée des autres populations de particules.

Un codage fluorescent personnalisé peut être nécessaire.

Comment le SAPS3UM-10 doit-il être lavé ?

La méthode de lavage dépend de la matrice de particules, de la densité, du tampon, du volume et de la récupération requise.

Des méthodes de centrifugation ou de filtration peuvent être évaluées.

Pourquoi la récupération des microsphères est-elle faible ?

Les causes possibles incluent :

• Force centrifuge insuffisante

• Temps de centrifugation court

• Perte de particules lors de l'élimination du surnageant

• Adhérence à la surface du tube

• Méthode de séparation incompatible

• Agrégation de particules

• Lavage excessif

Comment réduire les liaisons non spécifiques ?

Optimisez le réactif de blocage, la concentration du ligand, la concentration du rapporteur, les conditions de lavage, le niveau de détergent, la dilution de l’échantillon et le temps d’incubation.

Peut-on utiliser des tampons contenant de la biotine libre ?

La biotine libre peut bloquer les sites de liaison à la streptavidine et doit généralement être évitée pendant le chargement du ligand.

Pourquoi les microsphères de 3µm se déposent-elles ?

Des particules de taille micrométrique peuvent se déposer pendant le stockage en raison de leur taille et de leur densité.

Mélangez soigneusement la suspension avant chaque étape d’échantillonnage.

Le SAPS3UM-10 doit-il être dilué avant la cytométrie en flux ?

Oui. Préparer une dilution de travail en fonction du nombre de particules et du taux d'événements requis.

Une série de dilutions est recommandée lors du développement de la méthode.

Les microsphères peuvent-elles être congelées ?

La congélation n’est généralement pas recommandée à moins que la stabilité gel-dégel n’ait été spécifiquement validée.

La concentration peut-elle être personnalisée ?

Des concentrations alternatives de solides peuvent être discutées en fonction des exigences du projet et de la faisabilité de la fabrication.

La capacité de reliure peut-elle être personnalisée ?

Les objectifs de charge ou de capacité de liaison de streptavidine spécifiques au projet peuvent être évalués.

Peut-on produire des microsphères fluorescentes de streptavidine ?

Les microsphères de streptavidine fluorescentes ou codées peuvent être discutées pour des projets qualifiés de cytométrie en flux et de tests multiplex.

La production en vrac est-elle disponible ?

Oui. Shanghai SanYu Biotechnology Co., Ltd. prend en charge les échantillons, les lots pilotes, les commandes répétées et la production en vrac.

Quelles informations sont nécessaires pour un devis ?

Veuillez fournir :

• Numéro de catalogue SAPS3UM-10

• Quantité requise

• Prévisions d'achats annuelles

• Taille de paquet préférée

• Application prévue

• Modèle de cytomètre en flux

• Type de ligand biotinylé

• Capacité de liaison requise

• Nombre de microsphères requis par test

• Restrictions de tampon

• Restrictions relatives aux conservateurs

• Exigences de contrôle de qualité

• Exigences en matière de documentation

• Lieu de livraison

Demander un échantillon ou un devis groupé

Les microsphères de streptavidine SHBC SAPS3UM-10 3 µm fournissent une plate-forme de particules flexible pour immobiliser les anticorps biotinylés, les protéines, les peptides, les oligonucléotides, l'ADN, l'ARN, les aptamères et d'autres biomolécules marquées à la biotine.

Le produit convient pour :

• Dosages sur billes par cytométrie en flux

• Développement de tests immunologiques à base de billes

• Immobilisation d'anticorps biotinylés

• Études d'interactions protéiques

• Capture d'acide nucléique

• Tests d'hybridation

• Recherche de liaison par affinité

• Développement de cytométrie en flux multiplex

• Fabrication de réactifs de recherche

SAPS3UM-10 fournit :

• Diamètre nominal des particules de 3 µm

• Surface fonctionnelle streptavidine

• 1% de suspension solide

• Compatibilité avec les biomolécules biotinylées

• Fourniture d'échantillons et de lots pilotes

• Capacité de fabrication en vrac

• Support OEM et développement personnalisé

Pour l’évaluation d’échantillons ou l’achat en gros, indiquez l’application prévue, la quantité requise, le ligand biotinylé, la capacité de liaison souhaitée, la configuration du cytomètre en flux, les exigences d’emballage et les spécifications de contrôle qualité.

Nom du produit : Microsphères de streptavidine de 3 µm
Numéro de catalogue : SAPS3UM-10
Marque : SHBC
Fabricant : Shanghai SanYu Biotechnology Co., Ltd.
Diamètre nominal des particules : 3 µm
Modification de la surface : Contenu en solides de streptavidine
: 1 %
Application principale : Recherche par cytométrie en flux et test de billes
Capacité d'approvisionnement : Échantillons, lots pilotes et production en vrac
Utilisation prévue : Utilisation pour la recherche uniquement. Pas pour un usage diagnostique ou thérapeutique.