Стрептавидиновые магнитные шарики 3 мкм MSA3UM-10 1%

Магнитные стрептавидиновые шарики 3 мкм MSA3UM-10

MSA3UM-10 представляет собой суспензию магнитных шариков со стрептавидиновыми функциональными группами размером 3 мкм, содержащую 1% твердых веществ.

Когда концентрация твердых веществ выражается в виде массы на объем, 1% соответствует примерно 10 мг магнитных шариков на миллилитр суспензии.

Продукт разработан для захвата и иммобилизации биотинилированных антител, антигенов, белков, пептидов, аптамеров, олигонуклеотидов и других меченных биотином биомолекул.

MSA3UM-10 можно использовать в качестве магнитной твердой фазы при разработке хемилюминесцентного иммуноанализа, исследованиях магнитного иммуноанализа, обогащении биомолекул, подготовке проб, масштабировании процесса и серийном производстве реагентов.

Стрептавидин, иммобилизованный на поверхности магнитных гранул, связывает биотинилированные лиганды, не требуя от конечного пользователя активации гранул с помощью EDC, NHS, глутаральдегида или другого реагента химической активации.

После загрузки выбранного биотинилированного захватывающего лиганда функционализированные шарики можно использовать для захвата мишени, магнитного разделения, повторной промывки и обнаружения последующего сигнала.

MSA3UM-10 предназначен для биотехнологических компаний, разработчиков иммуноанализа, научно-исследовательских учреждений и производителей реагентов, которым требуется сырье в виде магнитных шариков стрептавидина размером 3 мкм для лабораторной оценки, пилотного производства и оптовых поставок.

Готовый реагент должен быть проверен с использованием предполагаемого биотинилированного лиганда, матрицы образца, магнитного сепаратора, программы промывки, химического анализа сигналов и иммуноанализатора.

Обзор продукта

Система стрептавидин-биотин обеспечивает гибкий метод иммобилизации различных биотинилированных биомолекул на общей магнитной твердой фазе.

Коммерческие магнитные шарики стрептавидина размером 3 мкм поставляются в концентрации примерно 10 мг/мл и предназначены для захвата биотинилированных антител, белков и нуклеиновых кислот, а также для автоматизированных высокопроизводительных рабочих процессов.

MSA3UM-10 предназначен для поддержки:

• Иммобилизация биотинилированных антител;

• Иммобилизация биотинилированного антигена;

• Магнитные сэндвич-иммуноанализы;

• Анализы обнаружения антител;

• Конкурентные иммуноанализы;

• Разработка хемилюминесцентного иммуноанализа;

• Электрохемилюминесцентные исследования;

• Иммуномагнитное обогащение;

• Захват биотинилированного пептида;

• Захват нуклеиновой кислоты и аптамера;

• Автоматизированная разработка реагентов;

• Опытно-промышленное производство;

• Серийное производство.

MSA3UM-10 поставляется в качестве сырья для исследований и разработок реагентов. Он не поставляется в виде готового диагностического реагента.

Технические характеристики изделия MSA3UM-10

Следующие параметры продукта должны быть подтверждены с помощью применимого технического паспорта и сертификата анализа для конкретной партии:

• Гранулометрический состав;

• Загрузка стрептавидина;

• Стрептавидиновая активность;

• Свободная биотинсвязывающая способность;

• способность загрузки биотинилированных антител;

• способность загрузки биотинилированных олигонуклеотидов;

• Неспецифическое связывание;

• Магнитный коллекционный перформанс;

• Подвесной буфер;

• Блокирующая формулировка;

• Система консервации;

• Условия хранения;

• Срок годности;

• Критерии выпуска партии.

Значения привязки потенциала конкурентов следует использовать только для сравнительного анализа рынка. Их не следует представлять в качестве спецификаций для MSA3UM-10.

Как работают магнитные шарики стрептавидина?

Стрептавидин, иммобилизованный на поверхности магнитных шариков, обеспечивает места связывания биотина.

Когда биотинилированное антитело, антиген, белок, пептид или олигонуклеотид инкубируется с MSA3UM-10, группа биотина связывается с поверхностью стрептавидина.

Полученную структуру можно представить в виде:

Магнитная бусина–стрептавидин–биотин–лиганд

Биотинилированный лиганд обеспечивает распознавание биологических мишеней, а магнитные частицы обеспечивают твердую фазу для сбора, промывки и обработки реагентов.

Коммерческие магнитные частицы, покрытые стрептавидином, используются для разделения биотинилированных белков, иммуноглобулинов, ДНК, РНК и других молекул, меченных биотином.

Пример использования биотинилированного захватывающего антитела

Магнитный сэндвич-иммуноанализ может включать следующие этапы:

1. Подготовьте биотинилированное захватывающее антитело.

2. Инкубируйте антитело с MSA3UM-10.

3. Разрешить группам биотина связываться с поверхностью стрептавидина.

4. Магнитно соберите загруженные антителами шарики.

5. Удалите несвязанное антитело.

6. Ресуспендируйте загруженные шарики в выбранном составе.

7. Инкубируйте шарики с образцом.

8. Захватите целевой антиген.

9. Добавьте меченое детектирующее антитело.

10. Магнитно собирают и промывают иммунный комплекс.

11. Добавьте или запустите выбранный сигнальный реагент.

12. Измерьте аналитический сигнал.

Пример использования биотинилированного антигена

Для анализа обнаружения антител:

1. Приготовьте биотинилированный антиген.

2. Загрузите антиген на MSA3UM-10.

3. Удалить несвязавшийся антиген.

4. Инкубируйте шарики, нагруженные антигеном, с образцом.

5. Захватите целевые антитела.

6. Добавьте меченое вторичное антитело.

7. Выполните магнитную стирку.

8. Измерьте результирующий сигнал.

Пример использования биотинилированного олигонуклеотида

Биотинилированный олигонуклеотид может быть иммобилизован для:

• Захват нуклеиновой кислоты;

• анализы гибридизации;

• Обнаружение на основе аптамеров;

• Целевое обогащение;

• Иммобилизация зонда;

• Молекулярно-диагностические исследования;

• Растягивающие эксперименты;

• Подготовка проб перед амплификацией.

Положение и степень биотинилирования должны быть выбраны так, чтобы сохранить активность гибридизации или распознавания мишени.

Основные характеристики MSA3UM-10

Определенный размер частиц 3 мкм

MSA3UM-10 обеспечивает определенный формат магнитных частиц размером 3 мкм, а не широкий диапазон микрометров.

Размер частиц может влиять на:

• Число частиц на единицу массы;

• Доступная геометрическая площадь поверхности;

• доступность лигандов;

• Седиментация;

• Магнитная коллекция;

• Формирование коллекционной зоны;

• Эффективность стирки;

• редисперсия;

• Автоматизированная обработка жидкостей.

Фактическая эффективность также зависит от содержания магнитного материала, распределения частиц по размерам, покрытия поверхности, плотности стрептавидина, суспензионного буфера и конфигурации магнита.

Стрептавидин-функциональная поверхность

Поверхность обеспечивает сайты аффинного связывания биотинилированных лигандов.

Потенциальные лиганды включают:

• Биотинилированные моноклональные антитела;

• Биотинилированные поликлональные антитела;

• Биотинилированные рекомбинантные антигены;

• Биотинилированные природные белки;

• биотинилированные пептиды;

• Биотинилированные ферменты;

• биотинилированные аптамеры;

• биотинилированные ДНК-зонды;

• биотинилированные РНК-зонды;

• Биотинилированные гаптены;

• Другие аффинные молекулы, меченные биотином.

Состав с содержанием 1% твердых веществ

В весовом/объемном выражении 1%-ная суспензия соответствует примерно 10 мг/мл.

Приблизительные расчеты массы шариков:

• 10 мкл содержит примерно 0,1 мг шариков;

• 50 мкл содержит примерно 0,5 мг шариков;

• 100 мкл содержит примерно 1 мг шариков;

• 500 мкл содержит примерно 5 мг шариков;

• 1 мл содержит примерно 10 мг гранул.

Эти расчеты следует использовать только после подтверждения того, что спецификация продукта в 1% выражена в весовом/объемном соотношении.

Конкуренты с размером частиц 3 мкм также доступны в концентрации 10 мг/мл, что делает эту концентрацию привычной для конкурентного сравнения и разработки методов.

Дополнительная активация шариков не требуется

Правильно биотинилированный лиганд обычно можно загрузить без активации поверхности магнитных шариков с помощью EDC/NHS или другого реагента ковалентного связывания.

Это может упростить разработку раннего анализа, поскольку различные биотинилированные молекулы захвата можно сравнивать на одной и той же платформе для гранул.

Гибкий скрининг лигандов

MSA3UM-10 можно оценить с помощью нескольких биотинилированных антител, антигенов или зондов.

Это поддерживает:

• Скрининг захватывающих антител;

• Сравнение пар антител;

• Оценка антигенной конструкции;

• Пептидный скрининг;

• скрининг аптамеров;

• Расширение мишени анализа;

• Разработка многопродуктовых реагентов.

Магнитная твердофазная обработка

После загрузки лиганда и захвата мишени частицы можно собрать с помощью совместимого магнитного сепаратора.

Типичный процесс включает в себя:

• дозирование шариков;

• Инкубация образцов;

• Захват цели;

• Магнитная коллекция;

• Удаление супернатанта;

• Стирка;

• Инкубация детектирующих реагентов;

• Дополнительная магнитная стирка;

• Генерация сигнала.

Поставка исследований в производство

MSA3UM-10 может поддерживать:

• Первоначальная оценка осуществимости;

• Скрининг биотинилированных лигандов;

• оптимизация иммуноанализа;

• Автоматизированная анализаторная оценка;

• Исследования стабильности;

• Опытное производство;

• Оценка соответствия партии;

• Массовая закупка сырья.

Почему стоит выбрать магнитные шарики стрептавидина размером 3 мкм?

Точное позиционирование продукта с точностью до 3 мкм

Многие конкуренты предлагают продукцию размером 2,8 мкм или 2–3 мкм. MSA3UM-10 обеспечивает точную номинальную спецификацию 3 мкм для клиентов, чьи методы исследования, существующие спецификации сырья или автоматизированные платформы основаны на этом размере частиц.

Установленный формат частиц для иммуноанализа

Коммерческие гранулы стрептавидина размером 3 мкм используются для захвата биотинилированных антител, нуклеиновых кислот и белков и предназначены для автоматизированной магнитной сепарации и высокопроизводительных рабочих процессов.

Определенная магнитная коллекция

Магнитный шарик размером 3 мкм может создать четко очерченную зону сбора под подходящим магнитным полем.

Фактическая производительность сбора зависит от:

• Магнитная загрузка;

• Сила магнита;

• Концентрация шариков;

• Объем выборки;

• Буферная вязкость;

• Геометрия судна;

• Агрегация частиц.

Подходит для многократной стирки

Хемилюминесцентные иммуноанализы обычно требуют нескольких циклов разделения и промывки.

MSA3UM-10 можно оценить для рабочих процессов, требующих:

• Повторяемое восстановление бортов;

• Контролируемое стремление;

• Низкая потеря частиц;

• Полная редисперсия;

• Постоянный остаточный объем стирки;

• Стабильная точность анализа.

Практическая стартовая концентрация

Суспензия А1% может обеспечить удобную стартовую концентрацию для:

• исследования лигандной нагрузки;

• Оптимизация дозировки шариков;

• Сравнение конкурентных продуктов;

• Ручная разработка тестов;

• Автоматизированная рецептура реагентов;

• Пилотная обработка.

Рабочую концентрацию в конечном анализе следует определять экспериментально.

Автоматизированная оценка платформы

MSA3UM-10 можно оценить с помощью автоматизированного CLIA или других анализаторов магнитного иммуноанализа.

Параметры, требующие проверки, включают:

• Смешивание реагента и резервуара;

• Точность дозирования шариков;

• Геометрия реакционного стакана;

• Инкубационное перемешивание;

• Положение магнита;

• Время магнитного сбора;

• Высота аспирации;

• Объем стирки;

• Остаточная жидкость;

• Восстановление бортов;

• редисперсия;

• Переноситься.

Коммерческие магнитные шарики стрептавидина размером 3 мкм предназначены для автоматизированной высокопроизводительной работы, но совместимость остается специфичной для платформы.

Магнитные шарики стрептавидина 3 мкм по сравнению с 2,8 мкм и 1 мкм

Выбор размера частиц требует функционального сравнения, а не только номинального диаметра.

Разница в 0,2 мкм между 2,8 мкм и 3 мкм может быть менее важной, чем различия в:

• Гранулометрический состав;

• Содержание магнитного материала;

• Поверхностное покрытие;

• Загрузка стрептавидина;

• Биотинсвязывающая способность;

• Блокирующая формулировка;

• Неспецифическое связывание;

• Подвесной буфер.

Предпочтительный продукт следует выбирать путем параллельного функционального тестирования.

Применение в разработке хемилюминесцентного иммуноанализа

Магнитный сэндвич-иммуноанализ

Биотинилированное захватывающее антитело можно загрузить на MSA3UM-10.

Частицы, содержащие антитела, захватывают целевой антиген из образца. Меченое детектирующее антитело затем образует сэндвич-комплекс.

После магнитной сепарации и промывки детекторная метка выдает аналитический сигнал.

Важные переменные развития включают в себя:

• Дозировка шариков;

• Загрузка захватывающих антител;

• Степень биотинилирования антител;

• Объем выборки;

• Зафиксировать время;

• Обнаружение-концентрация антител;

• Эффективность стирки;

• Сигнальная подложка;

• Отношение сигнал/фон.

Прямые хемилюминесцентные анализы

MSA3UM-10 можно оценить в форматах прямой хемилюминесценции с использованием подходящей меченой распознающей молекулы.

Коммерческие гранулы стрептавидина размером 3 мкм специально продаются для хемилюминесценции на основе магнитных частиц и захвата биотинилированных лигандов.

Работоспособность MSA3UM-10 должна быть подтверждена независимо в полной системе реагентов.

Электрохемилюминесцентный анализ

MSA3UM-10 может быть использован для проведения иммунохемилюминесцентного анализа.

Совместимость должна быть подтверждена:

• Модуль магнитного позиционирования;

• Конфигурация электродов;

• Электрохемилюминесцентная этикетка;

• Реакционный буфер;

• Расходные материалы для анализов;

• Последовательность стирки;

• Программа считывания сигналов.

Анализы обнаружения антител

Биотинилированный антиген можно иммобилизовать на гранулах для захвата целевых антител из исследовательских образцов.

Потенциальные приложения включают в себя:

• исследование антител к инфекционным заболеваниям;

• анализы на аутоантитела;

• Исследования реакции на вакцины;

• Оценка рекомбинантного антигена;

• Мониторинг ответа антител.

Конкурентные иммуноанализы

Биотинилированные антигены, гаптены или низкомолекулярные конъюгаты могут быть иммобилизованы для разработки конкурентных методов анализа.

Этот формат можно оценить, когда аналит не может поддерживать традиционную сэндвич-структуру из двух антител.

Форматы непрямого иммуноанализа

MSA3UM-10 также можно оценить с помощью:

• Биотинилированные вторичные антитела;

• Биотинилированные антивидовые антитела;

• Биотинилированные аффинные белки;

• биотинилированные пептиды;

• Биотинилированные аптамеры.

Иммуномагнитное обогащение

Биотинилированные аффинные лиганды, загруженные на MSA3UM-10, можно оценить на предмет обогащения:

• Белки;

• Антигены;

• Клетки;

• Микроорганизмы;

• Биологические частицы;

• Другие цели, распознанные по сходству.

Нуклеиновая кислота и захват аптамера

Биотинилированные зонды ДНК, РНК или аптамера могут быть иммобилизованы для:

• анализы гибридизации;

• Обогащение нуклеиновых кислот;

• Захват цели до усиления;

• Обнаружение на основе аптамеров;

• Разработка биосенсоров;

• Молекулярно-диагностические исследования.

Коммерческие гранулы стрептавидина размером 3 мкм используются для захвата меченных биотином антител и зондов ДНК, что поддерживает их использование в рабочих процессах иммуноанализа и нуклеиновых кислот.

Совместимые биотинилированные антитела и биомолекулы

Биотинилированные антитела

Важные переменные антител включают:

• Чистота антител;

• Концентрация антител;

• химия биотинилирования;

• Степень биотинилирования;

• Положение модификации биотина;

• Агрегационный статус;

• Сохраняется антигенсвязывающая активность;

• Оригинальный буферный раствор.

Чрезмерное биотинилирование может снизить биологическую активность или привести к неблагоприятной ориентации на поверхности магнитных шариков.

Недостаточное биотинилирование может снизить нагрузку на гранулы.

Биотинилированные антигены

Биотинилированные антигены можно использовать для анализов обнаружения антител.

Разработчик должен подтвердить, что биотинилирование не модифицирует и не блокирует важный антигенный эпитоп.

Биотинилированные пептиды

Потенциальные приложения включают в себя:

• Скрининг антител;

• Эпитопный анализ;

• Конкурентные иммуноанализы;

• исследование взаимодействия белков;

• Захват близости.

Биотинилированные олигонуклеотиды

Биотин может быть введен на 5'-конец, 3'-конец или в другое проверенное положение.

Выбранное положение модификации должно сохранять гибридизацию, распознавание мишени или активность аптамера после иммобилизации.

Биотинилированные белки и ферменты

Биотинилированные рекомбинантные белки или ферменты можно оценивать на предмет:

• исследования взаимодействия белков;

• Ферментные анализы;

• Обогащение аффинности;

• Разработка биосенсоров;

• Подготовка калибровочного материала.

Рекомендуемый рабочий процесс загрузки биотинилированного лиганда

Следующий рабочий процесс представляет собой общую основу разработки. Это не проверенный протокол для конкретного продукта.

Шаг 1: Охарактеризовать биотинилированный лиганд

Записывать:

• идентичность лиганда;

• Молекулярный вес;

• Концентрация;

• Чистота;

• Оригинальная рецептура;

• метод биотинилирования;

• Предполагаемая степень биотинилирования;

• Биологическая активность;

• Агрегационный статус;

• Стабилизирующие добавки.

Шаг 2: Удалите излишек свободного биотина

Свободный биотин может занимать сайты связывания стрептавидина и снижать нагрузку предполагаемого биотинилированного антитела, антигена, белка или олигонуклеотида.

Spherotech отмечает, что свободный биотин и непрореагировавшие биотинилированные праймеры могут связываться с частицами стрептавидина быстрее, чем более крупные биотинилированные молекулы.

Возможные методы очистки включают в себя:

• Опреснение;

• Диализ;

• Эксклюзионная хроматография;

• Ультрафильтрация;

• ВЭЖХ или СПЛХ, где это возможно;

• Еще один проверенный метод очистки.

Шаг 3. Полностью ресуспендируйте MSA3UM-10.

Перед отбором проб перемешайте исходную суспензию до однородного состояния.

Возможные методы включают в себя:

• Нежная инверсия;

• Роликовые смесители;

• Бесперебойное вращение;

• Контролируемое вортексирование;

• Еще один проверенный метод смешивания.

Избегайте чрезмерного пенообразования.

Шаг 4: Рассчитайте необходимую массу шарика

Предполагая концентрацию 10 мг/мл:

Масса гранул = объем суспензии × 10 мг/мл

Подготовьте несколько групп доз шариков, а не проверяйте только одно условие.

Шаг 5: Промойте или уравновесьте бусины.

Соберите частицы с помощью совместимого магнитного сепаратора.

При необходимости удалите исходную суспензионную среду и уравновесьте шарики в проверенном буфере для загрузки лигандов.

Шаг 6: Добавьте биотинилированный лиганд

Оцените несколько соотношений лигандов и шариков.

Возможные экспериментальные группы включают в себя:

• Низкая лигандная нагрузка;

• Средняя загрузка лигандов;

• Высокая лигандная нагрузка;

• Разное время инкубации;

• Различные температуры;

• Различные составы буферов.

Шаг 7: Поддерживайте бережное перемешивание

Используйте достаточное перемешивание, чтобы поддерживать равномерный контакт шарика с лигандом, не повреждая биологический лиганд.

Шаг 8. Соберите загруженные бусины с помощью магнита.

Стандартизировать:

• Тип магнита;

• Судно;

• Объем реакции;

• Концентрация шариков;

• Время сбора;

• Позиция сбора;

• Остаточный объем жидкости.

Шаг 9: Сохраните супернатант

Сохраняйте супернатант после загрузки, когда необходимо измерить эффективность загрузки лиганда.

Шаг 10: Промойте загруженные бусины

Удалять:

• Несвязанный биотинилированный лиганд;

• Остаточный свободный биотин;

• Нежелательные компоненты рецептуры;

• Другие несвязанные материалы.

Шаг 11: Ресуспендировать в конечном буфере

Потенциальные компоненты рецептуры включают:

• Буфер;

• Соль;

• Белковый стабилизатор;

• Синтетический полимер;

• ПАВ;

• консервант;

• Сахар или полиол;

• Блокирующий компонент.

Шаг 12: Оцените функциональную производительность

Рекомендуемые тесты включают в себя:

• Эффективность загрузки лигандов;

• Возможность захвата целей;

• Пустой сигнал;

• Положительный сигнал;

• Отношение сигнал/фон;

• Магнитное восстановление;

• редисперсия шариков;

• Точность;

• Ускоренная стабильность;

• Стабильность в реальном времени.

Как оптимизировать MSA3UM-10 в иммуноанализе

Оптимизируйте дозировку шариков

Сравните несколько количеств шариков в полном анализе.

Слишком малое количество шариков может ограничить захват цели.

Слишком много бисерин может увеличиться:

• Расход реагентов;

• Пустой сигнал;

• Неспецифическая адсорбция;

• Требования к стирке;

• Остаточные помехи бортов;

• Перенос инструмента.

Оптимизация загрузки биотинилированных лигандов

Оцените несколько количеств биотинилированных антител или антигенов на миллиграмм магнитных шариков.

Условия с самой высокой нагрузкой лигандов не обязательно являются лучшими аналитическими условиями.

Чрезмерная загрузка может привести к:

• Стерическая скученность;

• Сниженная доступность цели;

• Высшее неспецифическое связывание;

• Снижение функциональной активности;

• Плохая стабильность при хранении.

Оптимизация степени биотинилирования

Сравните лиганды с разными уровнями биотинилирования.

Оценивать:

• Эффективность загрузки бортов;

• Сохраненная биологическая активность;

• Производительность захвата целей;

• Пустой сигнал;

• Положительный сигнал;

• Точность;

• Стабильность.

Оптимизируйте время загрузки

Требуемое время загрузки зависит от:

• Размер лиганда;

• доступность биотина;

• Концентрация шариков;

• Смешивание;

• Температура;

• Буферный состав.

Оптимизация формулировки блокировки и хранения

Потенциальные переменные состава включают:

• Блокаторы белка;

• Синтетические блокирующие полимеры;

• Неионогенные поверхностно-активные вещества;

• Ионная сила;

• Сахара;

• Полиолы;

• Консерванты.

Окончательный состав должен поддерживать дисперсность частиц, низкий фон, активность стрептавидина и стабильность лиганда.

Оптимизация магнитной сепарации

Оценивать:

• Сила магнита;

• Положение магнита;

• Время сбора;

• Геометрия реакционного сосуда;

• Концентрация шариков;

• Буферная вязкость;

• Остаточная жидкость;

• Потеря шарика во время аспирации.

Оптимизация стирки

Сравнивать:

• Промывочно-буферная композиция;

• Концентрация ПАВ;

• Объем стирки;

• Количество циклов стирки;

• Смешивание во время стирки;

• Время магнитного сбора;

• Остаточный объем стирки.

Недостаточная промывка может увеличить фон. Чрезмерная промывка может снизить степень извлечения гранул или повлиять на чувствительные компоненты анализа.

Оптимизация параметров автоматического анализатора

Для автоматизированной разработки CLIA оцените:

• Смешивание реагента и резервуара;

• Точность дозирования шариков;

• Инкубационное перемешивание;

• Время магнитного сбора;

• Высота аспирации;

• Циклы стирки;

• Остаточный объем;

• редисперсия шариков;

• Переноситься.

Как оценить связывание биотина и функциональные характеристики

Общая биотинсвязывающая способность

Меченый биотиновый реагент можно использовать для оценки доступных сайтов связывания стрептавидина.

Конкуренты сообщают о емкости в таких единицах, как пикомоль или наномоль свободного биотина на миллиграмм гранул. Результаты существенно различаются в зависимости от структуры частиц, химии поверхности и метода испытаний.

MSA3UM-10 должен иметь собственный проверенный метод испытаний и внутренний диапазон приемки.

Загрузка биотинилированных антител

Измерьте количество антител до и после загрузки.

Примерный расчет такой:

Загруженное антитело = Исходное антитело – Несвязанное антитело.

Возможные аналитические методы включают:

• УФ-поглощение;

• анализ БСА;

• Брэдфордский анализ;

• измерение флуоресценции;

• ИФА;

• Еще один проверенный анализ белка.

Функциональная способность захвата целей

Химическая нагрузка не подтверждает, что антитело или антиген остаются биологически активными.

Функциональное тестирование должно измерять фактический захват мишени в репрезентативных условиях анализа.

Неспецифическое связывание

Сравнивать:

• Незагруженные стрептавидиновые гранулы;

• Нагруженные лигандами шарики;

• Блокированные бусины;

• Отрицательные образцы;

• Положительные образцы;

• Репрезентативные мешающие материалы.

Магнитное восстановление

Измерьте восстановление шариков после многократного магнитного сбора и промывки.

Производительность иммуноанализа

Оценивать:

• Пустой сигнал;

• Сигнал отрицательной выборки;

• Низкоположительный сигнал;

• Высокоположительный сигнал;

• Отношение сигнал/фон;

• Точность;

• Восстановление;

• Линейность;

• Специфика;

• Эффект крючка;

• Стабильность.

Контроль качества для исследований и серийного производства

Внешний вид и дисперсия

Осмотрите:

• Внешний вид подвески;

• Видимая агрегация;

• Поведение седиментации;

• Гомогенность после смешивания;

• Легкость редиспергирования;

• Стабильность во время процесса сохраняется.

Размер и распределение частиц

Подтвердите номинальный размер частиц 3 мкм, используя соответствующий проверенный метод.

При серийном производстве контролируйте как средний размер частиц, так и их распределение по размерам.

Содержание твердых веществ

Проверьте концентрацию твердых веществ, поскольку она влияет на:

• Расчеты массы шариков;

• Расчеты лигандной нагрузки;

• формулировка анализа;

• Точность заполнения;

• Выход продукции.

Стрептавидиновая активность

Используйте стандартизированный тест на связывание биотина для оценки функциональной активности стрептавидина на поверхности частиц.

Биотин-связывающая способность

Установите проверенный метод испытаний и внутренний диапазон приемки.

Значения конкурентов следует использовать только в качестве сравнительной информации, а не в качестве спецификаций для MSA3UM-10.

Загрузка биотинилированных антител

Используйте репрезентативное биотинилированное антитело для оценки практической эффективности нагрузки.

Магнитная коллекция Performance

Стандартизировать:

• Магнит;

• Судно;

• Объем выборки;

• Буфер;

• Концентрация шариков;

• Температура;

• Время сбора.

Неспецифическое связывание

Оцените фон, используя репрезентативные белки, антитела и матрицы образцов.

Функциональная производительность CLIA

Рекомендуемые тесты включают в себя:

• Пустой сигнал;

• Сигнал отрицательной выборки;

• сигнал положительной выборки;

• Отношение сигнал/фон;

• Аналитическая чувствительность;

• Точность;

• Восстановление;

• Линейность;

• Специфика;

• Стабильность.

Согласованность между партиями

Для рутинного производства установите диапазоны приемки для:

• Размер частиц;

• Гранулометрический состав;

• Содержание твердых веществ;

• Стрептавидиновая активность;

• Биотинсвязывающая способность;

• Магнитная коллекция;

• Дисперсия;

• Неспецифическое связывание;

• Функциональный иммуноанализ.

Окончательное одобрение сырья должно основываться на характеристиках всей системы анализа.

Масштабирование и оптовые поставки для производителей иммуноанализа

Этап оценки

Оценочные образцы могут способствовать проверке:

• Биотинилированные захватывающие антитела;

• биотинилированные антигены;

• Дозировка шариков;

• уровень лигандной нагрузки;

• Блокирующая формулировка;

• Магнитная сепарация;

• Чувствительность анализа;

• Фоновый сигнал.

Пилотный этап

Пилотные количества могут поддерживать:

• Подтверждение процесса загрузки лигандов;

• Состав реагентов;

• Тестирование совместимости анализатора;

• Исследования стабильности;

• Оценка процесса наполнения;

• Первоначальное тестирование целостности партии.

Этап серийного производства

Планирование оптовых поставок может включать в себя:

• Годовая потребность;

• Прогноз закупок;

• Объем упаковки;

• Спецификации качества;

• Техническая документация;

• Документация по качеству;

• Требования к зарезервированному лоту;

• Ожидания по контролю изменений;

• Планирование страховых запасов.

Официальные спецификации продуктов от нескольких поставщиков включают форматы 2 мл, 10 мл и 100 мл для гранул стрептавидина размером 3 мкм или соседнего размера, что показывает, что масштабируемая упаковка является важным требованием при покупке.

Рекомендации по масштабированию

Лабораторную процедуру загрузки лигандов не следует масштабировать только за счет умножения объемов реагентов.

Повторная проверка:

• Геометрия судна;

• Эффективность смешивания;

• Однородность шарика;

• последовательность присоединения лиганда;

• Инкубационный период;

• Равномерность температуры;

• Магнитная коллекция;

• Эффективность стирки;

• Время удержания процесса;

• Окончательная однородность заполнения.

Услуги по изготовлению магнитных шариков на основе стрептавидина

Индивидуальные требования к продукции могут быть оценены для биотехнологических компаний, исследовательских институтов и производителей иммуноанализа.

Возможные варианты настройки включают в себя:

• Альтернативные размеры частиц;

• Индивидуальное содержание твердых веществ;

• Скорректированная нагрузка стрептавидина;

• Цели связывания биотина по индивидуальному заказу;

• Альтернативные системы блокировки;

• Индивидуальный буфер подвески;

• Альтернативные консерванты;

• pH по указанию клиента;

• Специальные объемы упаковки;

• Опытно-промышленное производство;

• Массовое производство;

• OEM-упаковка;

• Услуги частных торговых марок;

• Тестирование качества по индивидуальному заказу.

Возможность индивидуальной настройки зависит от запрошенной спецификации, предполагаемого применения, требований валидации и количества заказа.

Рекомендации по хранению и обращению

Храните MSA3UM-10 в соответствии с этикеткой продукта, техническими данными и сертификатом анализа для конкретной партии.

Общие рекомендации по обращению включают в себя:

• Тщательно перемешайте перед отбором проб;

• Поддерживать однородность суспензии во время дозирования;

• Используйте чистое и откалиброванное оборудование;

• Не допускайте высыхания магнитных шариков;

• Предотвратить микробное и химическое загрязнение;

• Избегайте замораживания, если это специально не подтверждено;

• Избегайте ненужного воздействия экстремальных температур;

• Перед заменой буфера убедитесь в совместимости буфера;

• Предотвратить загрязнение свободным биотином;

• Запишите номер партии продукта;

• Отдельно оцените стабильность шариков, нагруженных лигандами.

В инструкциях к коммерческим магнитным частицам стрептавидина обычно рекомендуется хранить их в холодильнике, сохранять частицы в жидком состоянии и избегать условий, вызывающих высыхание или агрегацию. Условия для конкретного продукта для MSA3UM-10 должны быть подтверждены с использованием собственной документации.

Часто задаваемые вопросы

Что такое MSA3UM-10?

MSA3UM-10 представляет собой суспензию магнитных шариков с функциональными стрептавидинами размером 3 мкм, поставляемую с содержанием твердых веществ 1% для улавливания биотинилированных биомолекул в исследованиях иммуноанализа, разработке CLIA и серийном производстве.

Что означает 1% сухих веществ?

При выражении в мас./об. 1% твердых веществ соответствует примерно 10 мг магнитных шариков на миллилитр суспензии.

Какие молекулы может захватывать MSA3UM-10?

Гранулы можно оценить на связывание биотинилированных антител, антигенов, белков, пептидов, аптамеров, ДНК, РНК и других молекул, меченных биотином.

Каков принцип обязательности?

Биотин на выбранном лиганде связывается со стрептавидином, иммобилизованным на поверхности магнитных шариков.

Требуется ли для MSA3UM-10 активация EDC или NHS?

Для загрузки правильно биотинилированного лиганда обычно не требуется дополнительная активация гранул EDC/NHS.

Включено ли захватывающее антитело?

№ MSA3UM-10 поставляется в виде исходного материала в виде магнитных шариков стрептавидина. Заказчик выбирает и готовит необходимый биотинилированный лиганд захвата.

Готова ли 1% суспензия к прямому использованию?

Не обязательно. Оптимальная рабочая концентрация зависит от лиганда, целевой концентрации, объема анализа, матрицы образца и анализатора.

Почему стоит выбрать размер частиц 3 мкм?

Формат 3 мкм можно оценить, когда для анализа требуется точный магнитный носитель микрометрового размера с определенным магнитным сбором, многократной промывкой и совместимостью с существующей спецификацией сырья 3 мкм.

В чем разница между шариками 2,8 мкм и 3 мкм?

Разница номинальных размеров небольшая. На эффективность могут сильнее влиять распределение частиц по размерам, магнитная нагрузка, химия поверхности, плотность стрептавидина, блокирующая система и состав суспензии.

В чем разница между шариками размером 1 мкм и 3 мкм?

Эти два размера обычно различаются по количеству частиц на единицу массы, геометрической площади поверхности, седиментации и магнитному сбору. Предпочтительный размер следует выбирать путем параллельного функционального тестирования.

Можно ли использовать MSA3UM-10 для иммунохемилюминесцентных анализов?

Его можно оценить как магнитную твердую фазу при разработке CLIA. Совместимость со всей системой реагентов и анализатором должна быть подтверждена.

Можно ли его оценить с помощью электрохемилюминесцентных анализов?

Да, это может быть оценено в исследовании ECL. Совместимость с электродом, магнитной системой позиционирования, жидкостной и химической схемой сигналов должна быть подтверждена экспериментально.

Можно ли использовать MSA3UM-10 с автоматическими анализаторами?

Его можно оценить для автоматизированных систем. Дозирование, смешивание, магнитный сбор, аспирация, промывка и редиспергирование должны быть проверены на конкретном анализаторе.

Сколько биотинилированных антител следует ввести?

Оптимальное количество зависит от подтвержденной связывающей способности продукта, молекулярной массы антител, степени биотинилирования и требований анализа. Следует сравнить несколько уровней нагрузки.

Всегда ли большее количество антител улучшает чувствительность?

Нет. Чрезмерная нагрузка лигандом может вызвать стерическую скученность, снизить доступность мишени и увеличить неспецифическое связывание.

Может ли свободный биотин мешать загрузке?

Да. Свободный биотин может занимать доступные сайты связывания стрептавидина и снижать нагрузку предполагаемого биотинилированного лиганда.

Как можно измерить эффективность загрузки лигандов?

Сравните начальное количество лиганда с количеством, оставшимся в супернатанте после загрузки. Функциональную активность по захвату цели также следует измерять.

Могут ли небиотинилированные антитела специфически связываться?

Ожидается, что небиотинилированные антитела не будут специфически связываться посредством взаимодействия стрептавидин-биотин. Наблюдаемое связывание может быть результатом неспецифической адсорбции.

Как следует смешивать MSA3UM-10?

Смешайте, используя проверенный метод, такой как переворачивание, перемешивание валками, вращение «конец-в-конец» или контролируемое встряхивание, пока суспензия не станет однородной.

Что следует проверить, если магнитный сбор неполный?

Проверять:

• Сила магнита;

• Время сбора;

• Концентрация шариков;

• Буферная вязкость;

• Агрегация частиц;

• Геометрия судна.

Что следует проверить, если загрузка лиганда низкая?

Оценивать:

• Степень биотинилирования;

• Свободное загрязнение биотином;

• концентрация лигандов;

• Количество бисера;

• Время загрузки;

• Совместимость с буферами;

• Агрегация лигандов.

Что следует проверить, если фон анализа высокий?

Оценивать:

• Блокирующая формулировка;

• Дозировка шариков;

• Плотность загрузки лигандов;

• Эффективность стирки;

• Образец матрицы;

• Неспецифическая адсорбция;

• Концентрация реагента детектирования.

MSA3UM-10 — готовый диагностический реагент?

№ MSA3UM-10 поставляется в качестве сырья для исследований и разработки реагентов. Заказчик несет ответственность за проверку готового реагента, производственного процесса и предполагаемого применения.

Доступны ли оценочные образцы?

Оценочные образцы могут обсуждаться в зависимости от предполагаемого применения, биотинилированного лиганда и необходимого количества тестирования.

Возможна ли оптовая поставка?

Пилотные и оптовые поставки могут быть организованы для квалифицированных научно-исследовательских, опытно-конструкторских и производственных проектов.

Можно ли настроить концентрацию, буфер или упаковку по индивидуальному заказу?

Содержание твердых веществ, загрузка стрептавидина, суспензионный буфер, система блокировки и формат упаковки могут быть оценены в соответствии с требованиями проекта.

Запросить образец или оптовое предложение

Свяжитесь с SHBC, чтобы запросить оценочный образец, техническую информацию или оптовое предложение на магнитные шарики стрептавидина MSA3UM-10 3 мкм.

Пожалуйста, предоставьте:

• Предполагаемое применение иммуноанализа;

• Биотинилированное антитело, антиген или другой лиганд;

• Молекулярная масса лиганда;

• метод биотинилирования;

• Предполагаемая степень биотинилирования;

• Требуемое количество оценки;

• Предполагаемое пилотное количество;

• Ожидаемый годовой спрос;

• Предпочтительный объем упаковки;

• Необходимая техническая документация;

• Необходимые документы качества;

• Целевой график развития;

• Требования к индивидуальной спецификации.

SHBC поддерживает проекты по созданию магнитных шариков стрептавидина: от ранней оценки загрузки лигандов и оптимизации иммуноанализа до пилотного производства и массового производства.