Microesferas Red-Fluo de fluxo 7um RCY7UM-630 0,5%

Microesferas Red-Fluo de Fluxo de 7µm para Citometria de Fluxo

fornece microesferas Red-Fluo de fluxo RCY7UM-630 7µm para pesquisa de citometria de fluxo com laser vermelho, avaliação de canais de fluorescência, desenvolvimento de métodos de instrumentos, pesquisa de ensaios baseados em esferas e produção de reagentes a granel.

As microesferas RCY7UM-630 têm um diâmetro nominal de partícula de 7 µm e são projetadas para excitação a aproximadamente 630 nm. Eles fornecem uma ampla faixa de emissão de fluorescência no vermelho extremo de 665–720 nm.

O produto é fornecido como uma suspensão de 0,5% de sólidos e pode apoiar avaliação laboratorial, desenvolvimento de projetos de citometria de fluxo, testes em escala piloto, produção repetida e compras a granel.

Resposta rápida do produto

RCY7UM-630 é uma suspensão de microesferas fluorescentes de vermelho extremo de 7 µm com 0,5% de sólidos. Ele foi projetado para excitação de aproximadamente 630 nm e emissão de 665–720 nm e pode ser avaliado em pesquisas de citometria de fluxo com laser vermelho, estudos de detecção de fluorescência, desenvolvimento de ensaios baseados em esferas, pesquisa de configuração de instrumentos e produção de reagentes de microesferas fluorescentes.

Destaques do produto

• Nome do produto: Microesferas Red-Fluo de fluxo de 7µm

• Número de catálogo: RCY7UM-630

• Fabricante: Shanghai SanYu Biotecnologia Co., Ltd.

• Diâmetro nominal da partícula: 7µm

• Comprimento de onda de excitação: 630nm

• Comprimento de onda de emissão: 665–720 nm

• Região de fluorescência: Vermelho distante

• Conteúdo de sólidos: 0,5%

• Método de detecção recomendado: citometria de fluxo

• Região de laser recomendada: Laser vermelho

• Capacidade de fornecimento: Amostras, lotes piloto e produção em massa

• Uso pretendido: Somente para uso em pesquisa

O que são microesferas Red-Fluo de fluxo RCY7UM-630?

RCY7UM-630 consiste em microesferas fluorescentes de 7 µm que produzem um sinal de fluorescência vermelho extremo quando excitadas por um laser vermelho compatível.

O diâmetro da partícula de 7 µm está dentro da faixa de tamanho de mícron comumente avaliada em pesquisas convencionais de citometria de fluxo. Em comparação com nanopartículas e esferas submicrométricas, as microesferas de 7 µm podem produzir sinais de dispersão direta e lateral mais fortes, tornando a população de partículas principal mais fácil de localizar e controlar em muitos citômetros de fluxo.

A combinação de tamanho de partícula em escala micrométrica e fluorescência vermelha torna o RCY7UM-630 adequado para pesquisas envolvendo:

• Detecção de fluorescência com laser vermelho

• Avaliação do detector vermelho distante

• Otimização da configuração do citômetro de fluxo

• Desenvolvimento do limiar de fluorescência

• Controle de dispersão e fluorescência

• Estudos de diluição de partículas

• Otimização da taxa de eventos

• Desenvolvimento de método de citometria de fluxo

• Pesquisa de ensaio baseado em contas

• Rastreamento de partículas fluorescentes

• Comparação de instrumentos

• Fabricação de reagentes de pesquisa

O RCY7UM-630 pode ser avaliado por empresas de biotecnologia, laboratórios de citometria de fluxo, universidades, institutos de pesquisa, fabricantes de instrumentos, desenvolvedores de reagentes e organizações que desenvolvem métodos analíticos baseados em partículas.

O produto padrão é fornecido para uso em pesquisa. Não deve ser automaticamente representado como um material de calibração certificado, padrão de contagem absoluta, padrão MESF ou controle de diagnóstico regulamentado, a menos que a qualificação e documentação relevantes sejam especificamente fornecidas.

Especificações Técnicas RCY7UM-630

Os parâmetros específicos do lote devem ser confirmados usando a especificação do produto correspondente ou Certificado de Análise.

Dependendo da especificação do pedido confirmado, as informações de suporte podem incluir:

• Diâmetro nominal das partículas

• Distribuição de tamanho de partícula

• Conteúdo de sólidos

• Aparência de suspensão

• Informações de excitação de fluorescência

• Informações sobre emissão de fluorescência

• Número do lote

• Data de produção

• Recomendações de armazenamento

• Instruções de manuseio

• Certificado de Análise

• Ficha de dados de segurança

A matriz de partículas, a química da superfície, o sistema conservante, o coeficiente de variação do tamanho das partículas, a faixa de intensidade de fluorescência, o prazo de validade, o tamanho da embalagem e o tampão de armazenamento devem ser confirmados antes da publicação, quando esses valores estiverem disponíveis.

Excitação de 630 nm e emissão de vermelho distante de 665–720 nm

O RCY7UM-630 foi projetado para excitação próxima a 630 nm e produz fluorescência na região do vermelho extremo de 665–720 nm.

Comprimentos de onda de laser vermelho potencialmente compatíveis podem incluir:

• 630 nm

• 633 nm

• 635 nm

• 637 nm

• 640 nm

A especificação do produto identifica 630 nm como comprimento de onda de excitação. Instrumentos que utilizam comprimentos de onda de laser vermelho próximos também podem ser adequados, mas a resposta final de fluorescência deve ser confirmada no citômetro de fluxo pretendido.

A faixa de emissão de 665–720 nm pode se sobrepor a várias configurações de detector de vermelho extremo.

As possíveis regiões de filtro do detector podem incluir:

• Aproximadamente 660–680 nm

• Aproximadamente 665–695 nm

• Aproximadamente 670–710 nm

• Aproximadamente 680–720 nm

• Aproximadamente 690–735 nm

Essas faixas são exemplos de compatibilidade geral, e não configurações garantidas do instrumento.

O sinal de fluorescência medido pode ser afetado por:

• Comprimento de onda do laser

• Potência laser

• Alinhamento óptico

• Sensibilidade do detector

• Tensão ou ganho do detector

• Espelhos dicróicos

• Filtros passa-banda

• Concentração da amostra

• Taxa de fluxo

• Limite de disparo

• Tampão de suspensão

• Fundo do instrumento

• Agregação de partículas

Os usuários devem revisar as especificações reais do laser e do filtro do citômetro de fluxo, em vez de confiar apenas nos nomes dos canais, como APC, FL4, vermelho distante, fluorescência vermelha ou canal de laser vermelho.

Por que escolher microesferas fluorescentes de 7µm?

População de partículas de tamanho micron claramente detectável

O diâmetro nominal de partícula de 7 µm pode fornecer uma população distinta de microesferas em muitos citômetros de fluxo convencionais.

Em comparação com partículas submicrométricas, as microesferas de 7 µm podem ser mais fáceis de separar de:

• Ruído eletrônico

• Partículas tampão

• Pequenos detritos

• Fundo do instrumento

• Contaminantes de baixa dispersão

O desempenho real depende da configuração óptica e fluídica do instrumento.

Adequado para citômetros de fluxo convencionais

Pesquisas envolvendo nanopartículas ou vesículas extracelulares podem exigir configurações especializadas de detecção de pequenas partículas.

Por outro lado, uma população de microesferas fluorescentes de 7 µm geralmente pode ser avaliada usando gráficos de dispersão direta, dispersão lateral e fluorescência mais convencionais.

Isso torna o RCY7UM-630 adequado para o desenvolvimento inicial de métodos de citometria de fluxo e projetos de treinamento em laboratório.

Excitação com Laser Vermelho

RCY7UM-630 fornece um sinal de fluorescência vermelho extremo sob excitação de aproximadamente 630 nm.

Pode ser usado quando os pesquisadores precisam de uma população de partículas fluorescentes que possa ser detectada usando um laser vermelho e um detector de vermelho distante compatível.

Modelo de pesquisa de tamanho de célula

O tamanho de partícula de 7 µm está dentro da ampla faixa de tamanho de muitas células biológicas e partículas semelhantes a células.

As microesferas podem, portanto, ser avaliadas quando os pesquisadores necessitam de uma população sintética do tamanho de um mícron para estudos de configuração de instrumentos ou manuseio de partículas.

RCY7UM-630 não reproduz a deformabilidade, índice de refração, densidade, estrutura de superfície, distribuição de fluorescência ou comportamento biológico de um tipo específico de célula. A adequação como substituto de célula deve ser estabelecida para cada aplicação.

Adequado para pesquisas baseadas em contas

O tamanho de partícula em escala micrométrica pode fornecer uma plataforma prática para pesquisas envolvendo detecção baseada em esferas, codificação de partículas, imobilização de biomoléculas e citometria de fluxo multiplex.

Uma superfície funcional adequada é necessária quando anticorpos, antígenos, proteínas ou ácidos nucleicos precisam ser acoplados às partículas.

Apoia o desenvolvimento da pesquisa à produção

O RCY7UM-630 pode ser avaliado em pequenas quantidades durante a pesquisa em estágio inicial e posteriormente transferido para produção piloto ou em massa após a especificação técnica exigida ter sido confirmada.

Principais recursos e benefícios

Diâmetro nominal da partícula de 7µm

O tamanho de partícula em escala micrométrica é adequado para detecção de citometria de fluxo, estudos de gating, rastreamento de partículas e desenvolvimento de métodos baseados em esferas.

Fluorescência Vermelha Extrema

O produto foi projetado para excitação de aproximadamente 630 nm e emissão de 665–720 nm.

Compatibilidade com Laser Vermelho

O RCY7UM-630 pode ser avaliado em citômetros de fluxo equipados com excitação de laser vermelho compatível.

Ampla faixa de emissão

A ampla região de emissão do vermelho extremo oferece flexibilidade na seleção de filtros detectores compatíveis.

Suspensão de 0,5% de Sólidos

A concentração fornecida permite que os usuários preparem diluições de trabalho de acordo com a taxa de eventos necessária, o tempo de aquisição e o projeto experimental.

Separação visível de pequenos detritos

A população de tamanho micrométrico pode ser mais fácil de distinguir das partículas de fundo submicrométricas do que microesferas fluorescentes menores.

Adequado para vários fluxos de trabalho de pesquisa

O RCY7UM-630 pode ser avaliado em citometria de fluxo, microscopia de fluorescência, microfluídica, rastreamento de partículas, desenvolvimento de ensaios e pesquisa de instrumentos.

Fornecimento de amostra para granel

Shanghai SanYu Biotechnology Co., Ltd. oferece suporte à avaliação de amostras de laboratório, desenvolvimento em escala piloto, pedidos repetidos e fabricação em massa.

Suporte ao desenvolvimento personalizado

Tamanhos alternativos, concentrações, intensidades de fluorescência, químicas de superfície, formatos de embalagem e requisitos de controle de qualidade podem ser discutidos de acordo com a viabilidade do projeto.

Aplicações em pesquisa por citometria de fluxo

Detecção de fluorescência com laser vermelho

O RCY7UM-630 pode ser usado para avaliar a excitação do laser vermelho e a detecção de fluorescência no vermelho extremo.

Os pesquisadores podem estudar:

• Intensidade de fluorescência de partículas

• Separação sinal-fundo

• Sensibilidade do detector

• Tensão ou ganho do detector

• Posição do histograma de fluorescência

• Largura de distribuição de fluorescência

• Estabilidade corrida a corrida

• Variação diária do instrumento

Pesquisa de configuração do citômetro de fluxo

As microesferas podem apoiar pesquisas que envolvem configuração consistente do instrumento.

Os procedimentos potenciais incluem:

• Localizando a população de microesferas

• Ajustando as configurações de dispersão direta

• Ajustando as configurações de dispersão lateral

• Selecionando o detector de vermelho extremo

• Estabelecendo um limite de fluorescência

• Definir um gatilho de aquisição

• Criando um portão de partículas

• Comparando diferentes taxas de fluxo

• Avaliando a estabilidade da taxa de eventos

• Verificando o transporte de amostra

O produto padrão não deve ser descrito como um alinhamento certificado ou esfera de calibração, a menos que a atribuição de valor e qualificação apropriadas tenham sido concluídas.

Controle de dispersão e fluorescência

RCY7UM-630 pode ser avaliado usando várias combinações de gráficos:

• Dispersão direta versus dispersão lateral

• Dispersão direta versus fluorescência vermelha distante

• Dispersão lateral versus fluorescência vermelha distante

• Histograma de fluorescência vermelha distante

• Área de pulso versus altura de pulso

• Área de pulso versus largura de pulso

Esses gráficos podem ajudar a distinguir:

• Microesferas individuais

• Possíveis agregados

• Eventos em segundo plano

• Eventos coincidentes

• Partículas anormalmente brilhantes

• Partículas de baixa fluorescência

Desenvolvimento do Limiar de Fluorescência

Um gatilho de fluorescência pode ser útil quando os pesquisadores desejam adquirir apenas eventos que produzem um sinal de fluorescência vermelho extremo.

RCY7UM-630 pode apoiar estudos envolvendo:

• Aquisição desencadeada por fluorescência

• Seleção de limite de gatilho

• Exclusão de eventos em segundo plano

• Comparação de gatilho de dispersão

• Avaliação da sensibilidade de detecção

• Discriminação de eventos de baixa intensidade

Estudos de diluição de partículas

A suspensão de sólidos a 0,5% deve normalmente ser diluída antes do teste de citometria de fluxo.

Uma série de diluições pode ajudar a determinar uma concentração de trabalho que forneça:

• Taxas de eventos estáveis

• Coincidência mínima

• Separação clara da população

• Fluorescência reproduzível

• Tempo de aquisição adequado

• Baixo consumo de amostra

• Contexto aceitável

O fator de diluição apropriado depende do instrumento, vazão, volume da amostra, aplicação e número desejado de eventos registrados.

Avaliação de taxa de eventos e coincidência

Quando muitas microesferas passam através da região de interrogação do laser ao mesmo tempo, duas ou mais partículas podem ser registradas como um evento.

Possíveis indicações de coincidência incluem:

• Aumento da intensidade de fluorescência aparente

• Maior intensidade de dispersão

• Distribuições amplas de partículas

• Populações duplas inesperadas

• Mudanças de sinal dependentes da concentração

• Taxas de eventos instáveis

Testar múltiplas diluições pode ajudar a identificar uma faixa de trabalho apropriada.

Pesquisa de Sistemas Fluídicos

As microesferas fluorescentes também podem apoiar estudos de movimento de amostras através de um citômetro de fluxo ou sistema microfluídico.

As observações potenciais incluem:

• Introdução de amostra

• Estabilidade de fluxo

• Consistência da taxa de eventos

• Recuperação de partículas

• Transferência de amostra

• Reprodutibilidade tubo a tubo

• Eficácia da limpeza

• Bloqueio ou interrupção

• Perda de partículas no caminho fluídico

Microscopia de Fluorescência

O RCY7UM-630 pode ser avaliado usando microscópios de fluorescência equipados com uma fonte de excitação vermelha compatível e um filtro de emissão de vermelho extremo.

Possíveis aplicações de microscopia incluem:

• Localização de partículas

• Estudos de distribuição de partículas

• Imagem microfluídica

• Estudos de filtragem

• Pesquisa de interação de superfície

• Experimentos de absorção de partículas

• Observações de estabilidade de fluorescência

A compatibilidade deve ser confirmada usando o conjunto de filtros do microscópio real.

Lasers vermelhos e canais de detecção compatíveis

Região de excitação recomendada

Recomenda-se um laser vermelho próximo a 630nm.

O RCY7UM-630 não foi projetado principalmente para excitação com lasers de 405 nm, 488 nm ou 561 nm.

O sinal sob comprimentos de onda de excitação alternativos não deve ser assumido, a menos que seja apoiado por testes espectrais.

Detecção de emissões recomendada

Selecione um filtro detector que se sobreponha à faixa de emissão de 665–720 nm.

O filtro deve ser avaliado de acordo com ambos:

• Comprimento de onda central

• Largura de banda

Por exemplo:

• Um filtro 670/30 coleta aproximadamente 655–685 nm.

• Um filtro 680/30 coleta aproximadamente 665–695 nm.

• Um filtro 695/40 coleta aproximadamente 675–715 nm.

• Um filtro 710/50 coleta aproximadamente 685–735 nm.

Estes exemplos descrevem apenas a cobertura do comprimento de onda. Eles não garantem intensidade de fluorescência igual em todos os instrumentos.

Canais associados à APC

A faixa de emissão do RCY7UM-630 pode se sobrepor a certos canais detectores comumente usados ​​para fluoróforos do tipo APC.

Contudo, as microesferas não devem ser descritas como marcadas com APC, a menos que APC seja realmente utilizada no produto.

A compatibilidade deve ser determinada usando o espectro real de excitação e emissão do produto.

Citometria de Fluxo Espectral

O RCY7UM-630 também pode ser avaliado em citômetros de fluxo espectral compatíveis.

Para fluxos de trabalho espectrais, os usuários devem coletar a assinatura completa de fluorescência nas configurações pretendidas do instrumento e construir um espectro de referência apropriado.

O produto deve ser testado de forma independente antes de ser usado para controles espectrais de mistura.

Configuração de instrumento de citometria de fluxo e desenvolvimento de método

RCY7UM-630 pode apoiar o estabelecimento de procedimentos de citometria de fluxo reproduzíveis.

Configuração inicial do instrumento

Confirme se o citômetro de fluxo inclui:

• Um laser vermelho compatível

• Um detector sobreposto a 665–720 nm

• Ganho ou tensão de fluorescência ajustável

• Configurações de dispersão ajustáveis

• Software de aquisição adequado

• Fluídica limpa e estável

Estabelecendo um Portão de Partículas

Um portão preliminar pode ser criado usando dispersão direta e dispersão lateral.

O sinal de fluorescência vermelho extremo pode então ser usado para confirmar a identidade da população de microesferas.

O portão deve excluir:

• Fundo do buffer

• Ruído eletrônico

• Destroços

• Possíveis agregados

• Eventos coincidentes

• Eventos saturados

Otimizando o ganho do detector

Comece com uma configuração de detector relativamente baixa e aumente o ganho ou a tensão gradualmente.

A população principal deve ser posicionada dentro da faixa mensurável sem atingir a saturação do detector.

Registre as configurações finais para testes futuros.

Monitorando a largura de distribuição

Uma distribuição estreita de fluorescência pode indicar uma população medida relativamente uniforme, enquanto uma distribuição ampla pode resultar de:

• Agregação de partículas

• Eventos coincidentes

• Instabilidade do instrumento

• Mistura incompleta

• Concentração de amostra excessivamente alta

• Saturação do detector

• Variação dentro da população de microesferas

Mais investigações são necessárias antes de atribuir a amplitude de distribuição a uma única causa.

Comparando Instrumentos

O mesmo lote de microesferas pode ser avaliado em diferentes citómetros de fluxo.

Para uma comparação significativa, registre:

• Modelo de instrumento

• Comprimento de onda do laser

• Potência laser

• Filtro detector

• Configuração do detector

• Canal de gatilho

• Limite

• Taxa de fluxo de amostra

• Diluição

• Tampão

• Tempo de aquisição

• Número de eventos coletados

Os resultados de diferentes instrumentos podem não ser diretamente comparáveis ​​sem um método de padronização apropriado.

Desenvolvimento de ensaio de citometria de fluxo baseado em esferas

O RCY7UM-630 pode ser considerado uma plataforma de partículas fluorescentes para pesquisa de citometria de fluxo baseada em esferas.

Antes de desenvolver um procedimento de acoplamento, confirme a química real da superfície das partículas.

Possíveis opções de superfície para projetos personalizados podem incluir:

• Superfície lisa

• Superfície funcionalizada com carboxila

• Superfície amino-funcionalizada

• Superfície revestida com estreptavidina

• Superfície revestida de proteína

• Outros grupos funcionais específicos do projeto

A disponibilidade depende da viabilidade técnica.

Biomoléculas Potenciais

Com uma superfície funcional apropriada, as microesferas fluorescentes podem ser avaliadas para imobilização:

• Anticorpos

• Antígenos

• Proteínas

• Peptídeos

• Enzimas

• Oligonucleotídeos

• Sondas de DNA

• Sondas de RNA

• Receptores

• Ligantes

Parâmetros de desenvolvimento de acoplamento

Fatores importantes podem incluir:

• Grupo funcional de superfície

• Química de ativação

• Composição do buffer de acoplamento

• PH tampão

• Concentração de biomoléculas

• Concentração de microesferas

• Hora de ativação

• Tempo de acoplamento

• Método de mistura

• Reagente de bloqueio

• Condições de lavagem

• Buffer de armazenamento

• Conservante

• Matriz de amostra alvo

• Adsorção inespecífica

• Retenção de fluorescência

O processo de acoplamento deve ser otimizado usando a biomolécula e a aplicação reais.

Desenvolvimento de ensaio multiplex

Várias populações de contas podem ser potencialmente distinguidas usando:

• Tamanho de partícula

• Cor de fluorescência

• Intensidade de fluorescência

• Código de fluorescência interna

• Química de superfície

• Fluorescência do repórter

Para pesquisas com ensaios multiplex, cada população de esferas deve permanecer distinguível após:

• Acoplamento de biomoléculas

• Bloqueio

• Lavando

• Armazenar

• Incubação de amostra

• Rotulagem de repórter

• Aquisição de citometria de fluxo

O canal repórter também deve estar suficientemente separado do sinal de fluorescência vermelho extremo RCY7UM-630.

Pesquisa de imunoensaio

Microesferas funcionalizadas de 7 µm podem potencialmente ser avaliadas no desenvolvimento de imunoensaios baseados em esferas.

Um fluxo de trabalho de pesquisa típico pode incluir:

1. Ativação ou revestimento de microesferas.

2. Capture a imobilização da biomolécula.

3. Bloqueio de superfícies que não reagiram.

4. Incubação com a amostra alvo.

5. Adição de um reagente de detecção.

6. Lavando.

7. Aquisição de citometria de fluxo.

8. Análise de dados.

Não se deve presumir que o produto padrão RCY7UM-630 contenha uma superfície pronta para acoplamento, a menos que o grupo funcional seja especificamente confirmado.

Comparação com microesferas fluorescentes de 3µm e 500nm

As microesferas Red-Fluo de fluxo RCY7UM-630, RCY3UM-630 e 500 nm podem atender a diferentes prioridades de pesquisa em citometria de fluxo.

Escolha 7µm RCY7UM-630 quando:

• É preferida uma população fluorescente de tamanho maior em mícrons.

• Uma forte visibilidade de dispersão é importante.

• É necessária uma partícula sintética com tamanho de célula.

• O projeto envolve a configuração do detector de laser vermelho.

• Uma plataforma de ensaio baseada em esferas está sendo desenvolvida.

• É desejada uma separação mais fácil do fundo particulado pequeno.

• Uma superfície de partícula maior é preferida para um projeto de acoplamento personalizado.

Escolha 3µm RCY3UM-630 quando:

• É preferível uma esfera de tamanho menor em mícron.

• O projeto requer um equilíbrio entre detecção de dispersão e tamanho de partícula menor.

• Uma plataforma compacta de citometria de fluxo baseada em esferas está sendo considerada.

• É preferido um comportamento de sedimentação inferior ao de esferas maiores.

Escolha microesferas de 500 nm quando:

• O projeto se concentra na detecção de partículas submicrométricas.

• A citometria de fluxo de pequenas partículas é o objetivo principal.

• A aquisição desencadeada por fluorescência está sendo desenvolvida.

• O instrumento possui capacidade de detecção submícron adequada.

• Pesquisas de métodos relacionados a vesículas extracelulares estão sendo realizadas.

O tamanho final da partícula deve ser selecionado de acordo com a capacidade do instrumento, o design do ensaio, a área superficial desejada, o comportamento da suspensão e a aplicação alvo.

Fluxo de trabalho recomendado de preparação e teste

O fluxo de trabalho a seguir é um ponto de partida geral e deve ser otimizado para o citômetro de fluxo pretendido e para a aplicação de pesquisa.

1. Prepare o instrumento

Limpe e prepare o citômetro de fluxo de acordo com as instruções do fabricante.

Confirme isso:

• O sistema fluídico é estável.

• O laser vermelho está operando.

• O detector vermelho distante está disponível.

• Os sistemas de resíduos e bainhas estão prontos.

• A linha de amostra está livre de carryover.

2. Prepare um buffer em branco

Use o mesmo tampão que será usado para diluir o RCY7UM-630.

Execute o buffer em branco antes das microesferas e registre:

• Fundo de dispersão frontal

• Fundo de dispersão lateral

• Fundo de fluorescência vermelho distante

• Taxa total de eventos

• Qualquer população particulada anormal

3. Ressuspender RCY7UM-630

Microesferas de tamanho micrométrico podem assentar durante o armazenamento.

Antes da amostragem:

1. Deixe o frasco atingir a temperatura de manuseio recomendada.

2. Inverta suavemente o recipiente várias vezes.

3. Aplique vórtice controlado quando necessário.

4. Confirme se a suspensão parece homogênea.

5. Evite produzir espuma excessiva.

A sonicação breve e suave do banho pode ser avaliada se a documentação do produto permitir e a mistura normal não fornecer redispersão suficiente.

4. Prepare diluições de trabalho

Não comece com a suspensão não diluída de 0,5%.

Prepare várias diluições de trabalho usando um tampão limpo e compatível.

Uma série de diluições graduais ou dez vezes maiores pode ajudar a determinar a faixa adequada de taxa de eventos.

5. Comece com uma taxa de fluxo baixa

Use uma taxa de fluxo de amostra baixa durante o teste inicial.

Uma taxa de fluxo mais baixa pode melhorar a resolução da população e reduzir a coincidência.

Taxas de fluxo mais altas podem ser avaliadas após terem sido estabelecidas configurações adequadas.

6. Localize a população da microesfera

Use dispersão direta e dispersão lateral para localizar a população de partículas de tamanho micron.

Confirme a identidade das partículas usando o canal de fluorescência vermelho distante.

7. Otimize o detector Far-Red

Selecione um detector que se sobreponha a 665–720 nm.

Ajuste o ganho ou tensão do detector para que a população:

• Está claramente separado do espaço em branco

• Permanece dentro da faixa mensurável

• Não atinge a saturação

• Pode ser fechado de forma consistente

8. Exclua agregados e dupletos

Avalie a geometria do pulso usando parâmetros apropriados, como:

• Área

• Altura

• Largura

Possíveis agregados podem apresentar dispersão, fluorescência ou largura de pulso aumentadas.

9. Avalie Múltiplas Diluições

Compare as distribuições de fluorescência e dispersão de diversas diluições.

Uma diluição de trabalho adequada deverá produzir medições estáveis ​​sem coincidência excessiva.

10. Registre o método completo

Para reprodutibilidade, registre:

• Número de catálogo do produto

• Número de lote do produto

• Modelo de citômetro de fluxo

• Comprimento de onda do laser

• Filtro detector

• Tensão ou ganho do detector

• Configurações de dispersão

• Canal de gatilho

• Limite

• Taxa de fluxo de amostra

• Fator de diluição

• Composição do buffer

• Procedimento de mistura

• Tempo de aquisição

• Número de eventos coletados

• Portão de análise

Controle de qualidade e consistência entre lotes

As organizações de pesquisa que compram microesferas fluorescentes a granel geralmente exigem especificações de produto definidas e repetíveis.

Os parâmetros potenciais de controle de qualidade podem incluir:

• Diâmetro nominal das partículas

• Distribuição de tamanho de partícula

• Coeficiente de variação do tamanho das partículas

• Aparência de suspensão

• Conteúdo de sólidos

• Desempenho de dispersão

• Nível agregado

• Características de excitação

• Características de emissão

• Intensidade relativa de fluorescência

• Distribuição de fluorescência

• Posição do histograma de citometria de fluxo

• Comparação lote a lote

• Estabilidade de armazenamento

• Integridade da embalagem

• Controle microbiano

Nem todos os parâmetros estão necessariamente incluídos em uma especificação padrão de produto.

Os testes de liberação e limites de aceitação necessários devem ser acordados antes da produção piloto ou em massa.

Avaliação de desempenho por citometria de fluxo

Um método de controle de qualidade por citometria de fluxo pode avaliar:

• Posição da população principal de microesferas

• Intensidade de fluorescência mediana ou média

• Largura de distribuição de fluorescência

• Porcentagem de eventos dentro do portão principal

• Distribuição de dispersão

• População agregada

• Separação em branco

• Repetibilidade entre execuções

As mesmas configurações de instrumento e aquisição devem ser usadas ao comparar lotes de produção.

Consistência lote a lote

Para produção repetida, os clientes podem solicitar o controle de:

• Diâmetro da partícula

• Distribuição de tamanho de partícula

• Intensidade de fluorescência

• Distribuição de fluorescência

• Conteúdo de sólidos

• Composição do buffer

• Estabilidade da suspensão

• Configuração de embalagem

pode discutir os requisitos de qualidade específicos do projeto antes da fabricação.

Reivindicações de calibração e certificação

O padrão RCY7UM-630 não deve ser automaticamente representado como:

• Um padrão de tamanho rastreável pelo NIST

• Um padrão de fluorescência certificado

• Uma conta atribuída pelo MESF

• Um material de referência atribuído pela ERF

• Uma conta de contagem absoluta

• Uma esfera de calibração de citômetro de fluxo certificada

• Um controle de diagnóstico regulamentado

Essas aplicações exigem atribuição de valores específicos, testes, análise de incertezas, rastreabilidade e documentação de apoio.

Fabricação em massa e personalização

apoia projetos de microesferas fluorescentes, desde a avaliação laboratorial até a produção em massa.

Avaliação de amostra de pesquisa

Pequenas quantidades podem ser avaliadas para:

• Compatibilidade com laser vermelho

• Compatibilidade do detector vermelho distante

• Dispersão de partículas

• Detecção de dispersão

• Intensidade de fluorescência

• Otimização da taxa de eventos

• Viabilidade do ensaio

• Compatibilidade do instrumento

Produção em escala piloto

Os lotes piloto podem suportar:

• Otimização de método

• Estudos iniciais de estabilidade

• Avaliação de embalagens

• Desenvolvimento de controle de qualidade

• Viabilidade de acoplamento

• Verificação do cliente

• Transferência de processo

Produção em massa

Após a confirmação das especificações técnicas, a produção em massa pode ser organizada de acordo com o plano de compras e a previsão anual do cliente.

As informações do projeto devem incluir:

• Quantidade necessária

• Demanda anual esperada

• Tamanho de pacote preferido

• Aplicação pretendida

• Configuração do citômetro de fluxo

• Nível de fluorescência necessário

• Química de superfície

• Requisitos de buffer

• Especificações de qualidade

• Requisitos de documentação

• Cronograma de entrega

• Destino de entrega

Tamanho de partícula personalizado

Diâmetros alternativos de microesferas fluorescentes podem ser discutidos para projetos qualificados.

As possíveis direções de desenvolvimento incluem:

• Partículas em escala nanométrica

• Partículas submicrométricas

• Contas pequenas de tamanho mícron

• Microesferas de tamanho de célula

• Microesferas fluorescentes maiores

Fluorescência Personalizada

Dependendo da viabilidade, a personalização pode incluir:

• Comprimentos de onda de excitação alternativos

• Comprimentos de onda de emissão alternativos

• Diferentes cores de fluorescência

• Intensidade de fluorescência ajustada

• Vários níveis de intensidade de fluorescência

• Vários códigos fluorescentes

Química de Superfície Personalizada

Possíveis opções de superfície específicas do projeto podem incluir:

• Microesferas simples

• Microesferas de carboxila

• Microesferas de aminoácidos

• Microesferas revestidas com estreptavidina

• Microesferas revestidas com proteínas

• Outras superfícies funcionais

Concentração e embalagem personalizadas

Concentrações alternativas de sólidos e formatos de embalagem poderão ser discutidos de acordo com a quantidade do pedido e viabilidade técnica.

As opções disponíveis podem incluir:

• Embalagem de amostras de laboratório

• Embalagem em escala piloto

• Contentores a granel

• Volumes de preenchimento específicos do cliente

• Rotulagem OEM

• Códigos de produto específicos do cliente

Recomendações de manuseio e armazenamento

Siga a etiqueta do produto, ficha técnica e Certificado de Análise fornecido com o pedido.

As recomendações gerais de manuseio incluem:

• Armazenar protegido da luz.

• O armazenamento refrigerado entre 2 e 8°C é geralmente recomendado, salvo especificação em contrário.

• Não congele a menos que a estabilidade do congelamento-descongelamento tenha sido confirmada.

• Mantenha o recipiente bem fechado.

• Armazene o frasco na vertical.

• Misture bem antes da amostragem.

• Use pontas de pipeta e tubos de amostra limpos.

• Evite contaminar a suspensão original.

• Minimize a exposição prolongada à luz forte.

• Evite mudanças repetidas e desnecessárias de temperatura.

• Não deixe as microesferas secarem.

• Não devolva o material diluído ao frasco original.

Liquidação e Ressuspensão

Como o RCY7UM-630 contém partículas de 7 µm, pode ocorrer sedimentação durante o armazenamento.

A acomodação por si só não indica necessariamente falha do produto.

Antes de usar:

1. Inverta suavemente o recipiente.

2. Aplique vórtice controlado quando necessário.

3. Confirme se a suspensão é homogênea.

4. Inspecione quanto a agregados irreversíveis.

5. Teste uma pequena diluição de trabalho antes do experimento completo.

Evitando agregação

A agregação pode ser afetada por:

• Buffers incompatíveis

• Altas concentrações de sal

• pH extremo

• Congelamento e descongelamento repetidos

• Secagem

• Contaminação microbiana

• Armazenamento prolongado após diluição

• Proteínas ou aditivos incompatíveis

Avalie a compatibilidade do buffer ao desenvolver um novo aplicativo.

Proteção contra luz

Mantenha o produto original e as diluições de trabalho protegidas da exposição desnecessária à luz.

Prepare diluições de trabalho pouco antes de usar, quando possível.

Perguntas frequentes

O que é RCY7UM-630?

RCY7UM-630 é uma suspensão de microesferas fluorescentes de vermelho extremo de 7 µm desenvolvida para pesquisas em citometria de fluxo. Possui excitação de aproximadamente 630 nm, emissão de 665–720 nm e 0,5% de sólidos.

Quem fabrica o RCY7UM-630?

RCY7UM-630 é fornecido pela Shanghai SanYu Biotechnology Co., Ltd.

Qual é o diâmetro nominal da partícula?

O diâmetro nominal da partícula é de 7 µm.

As informações específicas sobre o tamanho do lote devem ser confirmadas usando a especificação do produto relevante ou o Certificado de Análise.

Qual é o comprimento de onda de excitação?

O comprimento de onda de excitação especificado é 630 nm.

Qual é o comprimento de onda da emissão?

A faixa de emissão de fluorescência especificada é 665–720 nm.

Qual laser de citometria de fluxo deve ser usado?

Recomenda-se um laser vermelho compatível próximo a 630nm.

Lasers vermelhos em 633, 635, 637 ou 640 nm também podem ser avaliados, mas a resposta de fluorescência deve ser confirmada experimentalmente.

Qual detector deve ser selecionado?

Selecione um detector de vermelho extremo cujo filtro óptico se sobreponha à faixa de emissão de 665–720 nm.

Revise o filtro passa-banda real em vez de confiar apenas no nome do canal do detector.

Pode ser detectado usando um canal APC?

A faixa de emissão pode se sobrepor a certas configurações de detectores associados à APC.

No entanto, o RCY7UM-630 não deve ser descrito como rotulado pela APC, a menos que a APC seja realmente utilizada no produto.

Pode ser excitado por um laser de 488nm?

RCY7UM-630 é especificado para excitação de aproximadamente 630 nm.

A excitação adequada em 488 nm não deve ser assumida sem suporte de dados espectrais.

O produto é adequado para citômetros de fluxo convencionais?

O diâmetro de partícula de 7 µm pode ser avaliado em muitos citômetros de fluxo convencionais com excitação de laser vermelho compatível e detecção de vermelho distante.

O desempenho real depende da configuração do instrumento.

Por que usar microesferas de 7µm?

As partículas maiores de tamanho micrométrico podem fornecer sinais de dispersão mais fortes e separação mais fácil de pequenas partículas de fundo do que microesferas submicrométricas.

Eles também podem ser adequados para estudos de partículas de tamanho de célula e desenvolvimento de ensaios baseados em esferas.

As microesferas são equivalentes a células biológicas?

Não.

Embora o diâmetro das partículas possa estar dentro da ampla faixa de tamanho de algumas células, as microesferas sintéticas não reproduzem todas as propriedades físicas e biológicas das células.

O RCY7UM-630 pode ser usado para alinhamento do citômetro de fluxo?

Pode ser avaliado em pesquisas de configuração de instrumentos e alinhamento comparativo.

Não deve ser representado como um padrão de alinhamento certificado sem a qualificação e documentação exigidas.

O RCY7UM-630 é um cordão de calibração?

O produto padrão é uma microesfera fluorescente para pesquisa.

As aplicações formais de calibração exigem atribuição de valores apropriados, rastreabilidade, limites de aceitação e documentação de apoio.

Pode ser usado para contagem absoluta?

O valor de 0,5% de sólidos não estabelece um número verificado de partículas por mililitro.

Não use RCY7UM-630 como padrão de contagem absoluta, a menos que uma concentração de número de partículas validada tenha sido fornecida.

As microesferas podem ser usadas para compensação?

O produto pode ser avaliado durante a pesquisa de canais de fluorescência.

Os controlos formais de compensação devem corresponder ao máximo possível às características do fluoróforo e da coloração do ensaio. A adequação deve ser validada experimentalmente.

Os anticorpos podem ser acoplados às partículas?

O acoplamento de anticorpos requer uma superfície funcional apropriada.

Confirme se é necessária uma superfície de acoplamento carboxila, amino, estreptavidina ou outra superfície de acoplamento.

O RCY7UM-630 pode ser usado para imunoensaios baseados em esferas?

Uma versão adequadamente funcionalizada pode ser avaliada para pesquisas de imunoensaios baseados em esferas.

A química da superfície, o método de acoplamento, as condições de bloqueio, o canal repórter e a matriz de ensaio devem ser otimizados.

Pode ser usado em citometria de fluxo multiplex?

Sim, o RCY7UM-630 pode ser avaliado como uma população de partículas em um sistema de pesquisa multiplex.

O sinal de identificação vermelho extremo deve permanecer distinguível das outras populações de microesferas e da fluorescência repórter.

Qual é o conteúdo de sólidos fornecido?

RCY7UM-630 é fornecido com 0,5% de sólidos.

O produto deve ser diluído antes da citometria de fluxo?

Sim. Uma diluição de trabalho normalmente deve ser preparada antes da aquisição.

Recomenda-se testar diversas diluições para determinar uma taxa de eventos adequada e minimizar a coincidência.

Por que as partículas assentam?

Partículas de tamanho micrométrico podem assentar durante o armazenamento devido ao seu tamanho e densidade.

Misture bem a suspensão antes da amostragem.

Como o produto deve ser misturado?

A inversão suave seguida de vórtice controlado pode ser usada para redispersar as microesferas.

Evite formação excessiva de espuma e tratamento severo prolongado.

O produto pode ser congelado?

O congelamento geralmente não é recomendado, a menos que a documentação fornecida confirme especificamente a estabilidade do congelamento-descongelamento.

Como o RCY7UM-630 deve ser armazenado?

Armazenar protegido da luz e seguir as instruções de armazenamento específicas do produto.

O armazenamento refrigerado é geralmente recomendado, a menos que especificado de outra forma.

A produção em massa está disponível?

Sim. Shanghai SanYu Biotechnology Co., Ltd. oferece suporte à avaliação de amostras, produção piloto, pedidos repetidos e fabricação em massa.

A concentração pode ser personalizada?

Concentrações alternativas podem ser discutidas de acordo com os requisitos do projeto, viabilidade técnica e quantidade do pedido.

A intensidade da fluorescência pode ser personalizada?

Diferentes níveis de intensidade de fluorescência podem ser discutidos para projetos de desenvolvimento qualificados.

A superfície da partícula pode ser personalizada?

Superfícies lisas, carboxila, amino, revestidas com estreptavidina ou outras superfícies funcionais podem ser discutidas de acordo com a aplicação e viabilidade técnica.

Quais informações são necessárias para uma cotação?

Forneça:

• Número de catálogo do produto

• Quantidade necessária

• Demanda anual esperada

• Tamanho de pacote preferido

• Modelo de citômetro de fluxo

• Comprimento de onda do laser vermelho

• Filtro detector vermelho distante

• Aplicação pretendida

• Química de superfície necessária

• Intensidade de fluorescência necessária

• Requisitos de controle de qualidade

• Requisitos de documentação

• Destino de entrega

Solicite uma amostra ou cotação em massa

As microesferas Red-Fluo de fluxo RCY7UM-630 de 7 µm fornecem uma solução de partículas fluorescentes vermelhas de tamanho micrométrico para pesquisa de citometria de fluxo com laser vermelho, estudos de configuração de instrumentos, avaliação de canais de fluorescência, desenvolvimento de ensaios baseados em esferas, rastreamento de partículas e fabricação de reagentes de pesquisa.

O produto fornece:

• Diâmetro nominal de partícula de 7 µm

• Excitação de aproximadamente 630 nm

• Emissão vermelha distante de 665–720 nm

• 0,5% de sólidos

• Avaliação de compatibilidade com citômetros de fluxo com laser vermelho

• Fornecimento de amostra e piloto

• Capacidade de produção em massa

• Suporte ao desenvolvimento personalizado

Para avaliação de amostras ou compra a granel, forneça a aplicação pretendida, a configuração do citômetro de fluxo, a quantidade necessária, a química da superfície, o formato da embalagem e os requisitos de controle de qualidade.

Nome do produto: Microesferas Red-Fluo de fluxo de 7 µm
Número de catálogo: RCY7UM-630
Fabricante: Shanghai SanYu Biotechnology Co., Ltd.
Diâmetro nominal da partícula: 7 µm
Comprimento de onda de excitação: 630 nm
Comprimento de onda de emissão: 665–720 nm
Conteúdo de sólidos: 0,5%
Aplicação primária: Citometria de fluxo
Capacidade de fornecimento de pesquisa: Amostras, lotes piloto e produção em massa
Uso pretendido: Uso em pesquisa Apenas. Não para uso diagnóstico ou terapêutico.