Microesferas de estreptavidina de 1um SAPS1UM-10 1%

Microesferas de estreptavidina de 1 µm para citometría de flujo

Shanghai SanYu Biotechnology Co., Ltd. suministra microesferas de estreptavidina SAPS1UM-10 de 1 µm para el desarrollo de ensayos de citometría de flujo, inmovilización de biomoléculas biotiniladas, inmunoensayos basados ​​en partículas, investigación de captura por afinidad y fabricación de reactivos a granel.

Las microesferas SAPS1UM-10 tienen un diámetro de partícula nominal de 1 µm y se suministran como una suspensión de 1 % de sólidos. La superficie de las microesferas está recubierta con estreptavidina, lo que permite que las partículas capturen anticuerpos, antígenos, proteínas, péptidos, oligonucleótidos, ADN, ARN y otras moléculas que contienen biotina biotinilados.

El producto puede respaldar estudios de viabilidad de laboratorio, optimización de ensayos de perlas, desarrollo a escala piloto, producción repetida y compras al por mayor por parte de empresas de biotecnología y organizaciones de investigación.

Respuesta rápida del producto

SAPS1UM-10 es una suspensión de microesferas recubiertas de estreptavidina de 1 µm con 1 % de sólidos. Está diseñado para inmovilizar biomoléculas biotiniladas para ensayos de perlas de citometría de flujo, investigación de inmunoensayos, captura de ácidos nucleicos, estudios de unión por afinidad y desarrollo de métodos analíticos basados ​​en partículas.

Productos destacados

• Nombre del producto: Microesferas de estreptavidina de 1 µm

• Número de catálogo: SAPS1UM-10

• Fabricante: Shanghai SanYu Biotechnology Co., Ltd.

• Diámetro nominal de partícula: 1 µm

• Recubrimiento superficial: estreptavidina

• Contenido de sólidos: 1%

• Forma física: Suspensión acuosa de microesferas.

• Aplicación principal: investigación en citometría de flujo.

• Principio de unión: afinidad estreptavidina-biotina

• Capacidad de suministro: muestras, lotes piloto y producción a granel.

• Personalización: Disponible según viabilidad del proyecto.

• Uso previsto: uso exclusivo en investigación

¿Qué son las microesferas de estreptavidina SAPS1UM-10?

SAPS1UM-10 consta de microesferas de polímero del tamaño de una micra con estreptavidina inmovilizada en la superficie de la partícula.

Las microesferas recubiertas de estreptavidina proporcionan un soporte sólido conveniente para unir biomoléculas biotiniladas sin necesidad de que el usuario final realice un acoplamiento covalente directo a la superficie de la partícula.

Una molécula biotinilada puede incubarse con las microesferas y capturarse mediante la interacción de alta afinidad estreptavidina-biotina. Las microesferas preparadas se pueden utilizar luego en ensayos de unión basados ​​en partículas, análisis de citometría de flujo, captura de objetivos, inmovilización de biomoléculas e investigación de desarrollo de ensayos.

Las posibles moléculas de captura biotiniladas incluyen:

• Anticuerpos

• Antígenos

• Proteínas recombinantes

• Péptidos

• enzimas

• Lectinas

• Receptores

• Ligandos

• Oligonucleótidos

• sondas de ADN

• sondas de ARN

• aptámeros

• Pequeñas moléculas biotiniladas.

El tamaño de partícula de 1 µm proporciona un número de partículas relativamente alto por unidad de masa al tiempo que mantiene una superficie física adecuada para la inmovilización de biomoléculas.

Debido a que las partículas de 1 µm están cerca del rango de detección inferior de algunos citómetros de flujo convencionales, la compatibilidad del instrumento y los ajustes de adquisición deben evaluarse durante el desarrollo del método.

SAPS1UM-10 Especificaciones técnicas

Los siguientes parámetros deben confirmarse utilizando la especificación técnica final o el Certificado de Análisis específico del lote:

• matriz de partículas

• Diámetro de partícula medido

• Distribución del tamaño de partículas

• Coeficiente de variación del tamaño de partícula.

• Nivel de recubrimiento de estreptavidina

• Capacidad de unión a biotina

• Tampón de suspensión

• Estabilizador

• tensioactivo

• Preservativo

• Concentración del número de partículas

• Volumen de embalaje

• Duración

• Condiciones de almacenamiento

La capacidad de unión debe informarse utilizando el método de prueba real y los resultados específicos del lote en lugar de estimarse a partir del tamaño de las partículas o el contenido de sólidos.

Cómo funciona la unión estreptavidina-biotina

La estreptavidina es una proteína de unión a biotina con múltiples sitios de unión. Cuando un anticuerpo, proteína, péptido o ácido nucleico biotinilado se mezcla con SAPS1UM-10, el grupo biotina interactúa con el recubrimiento de estreptavidina en la superficie de la microesfera.

Esto crea un método rápido y estable para inmovilizar una amplia gama de biomoléculas.

Una estructura típica es:

Superficie de microesferas – Estreptavidina – Biotina – Molécula de captura

Por ejemplo:

Microesfera – Estreptavidina – Anticuerpo biotinilado

El anticuerpo inmovilizado puede posteriormente capturar su antígeno correspondiente. Luego se puede introducir un anticuerpo de detección marcado con fluorescencia y la fluorescencia asociada a las microesferas resultante se puede medir mediante citometría de flujo.

Ventajas de la inmovilización con estreptavidina y biotina

• Accesorio de biomolécula simple

• No se requiere activación directa de la microesfera por parte del usuario final.

• Compatible con muchas biomoléculas biotiniladas.

• Orientación flexible de la molécula de captura

• Adecuado para el desarrollo de ensayos modulares

• Reemplazo conveniente de un ligando biotinilado por otro

• Compatible con flujos de trabajo de inmunoensayos y ácidos nucleicos

• Adecuado para investigación de analito único y múltiple

El rendimiento de unión final depende del nivel de biotinilación, el tamaño molecular, las condiciones de incubación, la accesibilidad de la superficie, la composición del tampón y los efectos estéricos.

¿Por qué elegir microesferas recubiertas de estreptavidina de 1 µm?

Alto número de partículas por unidad de volumen

En comparación con microesferas más grandes con el mismo contenido de sólidos, las microesferas de 1 µm proporcionan una mayor cantidad de partículas individuales.

Esto puede resultar útil cuando un ensayo requiere:

• Una gran cantidad de eventos vinculantes independientes.

• Bajo consumo de microesferas por prueba.

• Formatos de reacción de alto rendimiento

• Pequeños volúmenes de muestra

• Flujos de trabajo basados ​​en microplacas

• Numerosos eventos de citometría de flujo.

La concentración real del número de partículas debe determinarse a partir del diámetro de partícula medido, la densidad de partícula, el contenido de sólidos y la caracterización específica del lote.

Gran superficie colectiva

Una suspensión que contiene muchas microesferas pequeñas puede proporcionar una superficie total sustancial para la inmovilización de biomoléculas.

Sin embargo, la capacidad de unión utilizable está determinada por algo más que el área superficial de las partículas. La densidad de estreptavidina, la actividad del recubrimiento, la accesibilidad estérica, el tamaño del ligando y el nivel de biotinilación también afectan el resultado final.

Diseño de ensayo modular

Una plataforma de microesferas recubiertas de estreptavidina se puede combinar con diferentes moléculas de captura biotiniladas.

Esto permite a los investigadores desarrollar múltiples ensayos sin producir un conjugado de partículas covalentes separado para cada anticuerpo, proteína o sonda de ácido nucleico.

Adecuado para detección basada en fluorescencia

No es necesario que SAPS1UM-10 sea intrínsecamente fluorescente para admitir un ensayo de citometría de flujo.

Se puede introducir una señal de fluorescencia a través de:

• Un ligando biotinilado marcado fluorescentemente

• Una molécula diana fluorescente

• Un anticuerpo de detección fluorescente

• Un anticuerpo secundario fluorescente

• Una sonda de ácido nucleico fluorescente

• Un conjugado de reportero fluorescente.

La fluorescencia informadora identifica eventos de unión asociados con la población de microesferas.

Adecuado para el desarrollo de la investigación a la producción

SAPS1UM-10 puede soportar pruebas de viabilidad tempranas seguidas de fabricación a escala piloto y a granel después de que se hayan confirmado los requisitos técnicos.

Características clave del producto

Diámetro nominal de partícula de 1 µm

El tamaño de partícula a escala micrométrica es adecuado para estudios de unión basados ​​en partículas y flujos de trabajo de citometría de flujo optimizados.

Superficie recubierta de estreptavidina

La superficie de la partícula está diseñada para capturar biomoléculas biotiniladas mediante afinidad estreptavidina-biotina.

Suspensión de sólidos al 1%

El producto se suministra con un 1 % de sólidos y se puede diluir según la cantidad requerida de microesferas, el volumen de ensayo y la tasa de eventos de citometría de flujo.

Inmovilización de biomoléculas flexibles

La misma plataforma de microesferas se puede utilizar con diferentes anticuerpos, proteínas, péptidos o sondas de ácido nucleico biotinilados.

No se requiere activación de carbodiimida por parte del usuario final

Cuando se dispone de una molécula biotinilada adecuada, se puede inmovilizar sin realizar la activación EDC/NHS de los grupos carboxilo.

Compatible con ensayos de reportero fluorescente

Las microesferas se pueden combinar con reactivos de detección basados ​​en fluorescencia para análisis de citometría de flujo.

Adecuado para investigación Singleplex y Multiplex

Durante el desarrollo del ensayo multiplex se pueden evaluar diferentes poblaciones de microesferas, ligandos de captura o códigos de fluorescencia.

Capacidad de fabricación a granel

Shanghai SanYu Biotechnology Co., Ltd. respalda la evaluación de muestras, la producción piloto, los pedidos repetidos, los proyectos OEM y el suministro a granel.

Aplicaciones en citometría de flujo

Desarrollo de inmunoensayos basados ​​en perlas

SAPS1UM-10 se puede utilizar como soporte de fase sólida en ensayos de investigación para detectar:

• Proteínas

• Anticuerpos

• Antígenos

• Citoquinas

• hormonas

• Biomarcadores

• Objetivos asociados a patógenos

• Moléculas derivadas de células

• Analitos ambientales

• Compuestos de investigación

Un ensayo sándwich típico a base de cuentas utiliza:

1. Un anticuerpo de captura biotinilado inmovilizado en la microesfera.

2. Un analito objetivo capturado de la muestra.

3. Un anticuerpo de detección fluorescente unido al objetivo capturado.

4. Citometría de flujo para medir la fluorescencia asociada a microesferas.

Inmovilización de anticuerpos biotinilados

Los anticuerpos biotinilados se pueden unir a SAPS1UM-10 sin activación química directa de la microesfera.

Las posibles aplicaciones de investigación incluyen:

• Detección de antígenos

• Detección de anticuerpos

• Detección de hibridomas

• Análisis de interacción de proteínas.

• Pruebas de viabilidad del ensayo.

• Comparación de anticuerpos de captura

• Optimización de reactivos de detección

Estudios de unión a proteínas y péptidos

Las proteínas y péptidos biotinilados pueden inmovilizarse para:

• Estudios de unión a anticuerpos.

• Estudios de interacción receptor-ligando.

• Investigación de la interacción proteína-proteína.

• Detección de epítopos

• Investigación de biomarcadores

• Ensayos de descubrimiento de fármacos

Captura de ácido nucleico

Se pueden unir oligonucleótidos biotinilados, ADN, ARN y aptámeros a la superficie de la microesfera.

Las aplicaciones potenciales incluyen:

• Ensayos de hibridación

• Investigación de detección de mutaciones

• Desarrollo de métodos de genotipado.

• Captura específica de secuencia

• Estudios de unión de ácidos nucleicos.

• Detección basada en aptámeros

• Investigación de diagnóstico molecular.

• Captura de productos de PCR

Investigación de unión a la superficie celular

Cuando se recubre con un ligando biotinilado adecuado, se puede evaluar la unión de SAPS1UM-10 a receptores específicos de la superficie celular.

La interacción entre las partículas y las células debe optimizarse cuidadosamente porque la concentración de microesferas, la densidad del ligando, el tiempo de incubación, la temperatura, el estado celular y los procedimientos de lavado pueden afectar el resultado.

Investigación de citometría de flujo múltiplex

SAPS1UM-10 se puede incorporar a una plataforma multiplex cuando se pueda distinguir de otras poblaciones de microesferas.

Las posibles estrategias de diferenciación incluyen:

• Diferentes tamaños de partículas

• Diferentes códigos de fluorescencia internos.

• Diferentes intensidades de fluorescencia

• Diferentes colores visibles

• Diferentes canales de reporteros.

• Diferentes moléculas de captura de superficie.

No se debe asumir que el producto estándar SAPS1UM-10 contiene un código de fluorescencia interna a menos que así se indique en las especificaciones del producto.

Moléculas biotiniladas compatibles con SAPS1UM-10

SAPS1UM-10 se puede evaluar con muchos tipos de moléculas biotiniladas.

Anticuerpos biotinilados

Los formatos aplicables pueden incluir:

• IgG de longitud completa

• Fragmentos fabulosos

• Fragmentos F(ab′)₂

• Anticuerpos recombinantes

• Anticuerpos de dominio único

• Otros formatos de anticuerpos diseñados

El número y la ubicación de los grupos de biotina pueden afectar la orientación de los anticuerpos y la actividad de unión al antígeno.

Proteínas biotiniladas

Los ejemplos potenciales incluyen:

• Antígenos

• enzimas

• Receptores

• Citoquinas

• Factores de crecimiento

• Proteínas de unión

• Proteínas de fusión recombinantes

Péptidos biotinilados

Los péptidos biotinilados pueden favorecer:

• Mapeo de epítopos

• Detección de anticuerpos

• Estudios de unión a receptores

• Investigación de sustratos enzimáticos

• Detección de descubrimiento de fármacos

Ácidos nucleicos biotinilados

Los formatos potenciales incluyen:

• ADN monocatenario

• ADN bicatenario

• ARN

• Productos de PCR

• Sondas de oligonucleótidos

• aptámeros

• Análogos de ácidos nucleicos modificados.

Moléculas pequeñas biotiniladas

Se pueden unir pequeños compuestos biotinilados cuando el grupo biotina permanece accesible a la superficie de la estreptavidina.

Un espaciador adecuado puede reducir el impedimento estérico entre la superficie de la microesfera y la molécula objetivo.

Flujo de trabajo recomendado para la inmovilización del ligando biotinilado

El siguiente protocolo es un punto de partida del desarrollo general. Las condiciones finales deben optimizarse según la molécula biotinilada y el ensayo previsto.

1. Resuspender las microesferas

Deje que la suspensión de microesferas alcance la temperatura de manipulación recomendada.

Mezcle bien el vial mediante inversión suave, rotación o agitación controlada con vórtex hasta que la suspensión sea homogénea.

Evite la formación excesiva de espuma.

2. Calcule la cantidad de microesferas requerida

Determine la cantidad de SAPS1UM-10 requerida según:

• Número de pruebas

• Microesferas por prueba

• Volumen de ensayo

• Capacidad de encuadernación requerida

• Concentración de muestra esperada

• Recuento de eventos de citometría de flujo deseado

No calcule la carga de ligando únicamente a partir del contenido de sólidos. Utilice capacidad de encuadernación específica del lote cuando esté disponible.

3. Lavar las Microesferas

Transfiera la suspensión de microesferas requerida a un tubo limpio y de baja unión.

Lave las partículas utilizando un tampón de unión compatible para eliminar los aditivos de almacenamiento que puedan interferir con el ensayo.

Los posibles enfoques de separación incluyen:

• Centrifugación

• Filtración por membrana

• Filtración de flujo tangencial

• Otros métodos validados de recuperación de partículas.

El método apropiado depende de la matriz de microesferas, la densidad, el tamaño de las partículas, la formulación y el volumen de procesamiento.

4. preparar el ligando biotinilado

Diluir el anticuerpo, proteína, péptido o ácido nucleico biotinilado en un tampón compatible.

El tampón no debe contener excesiva biotina libre u otras sustancias que compitan por los sitios de unión de estreptavidina.

5. Incubar las microesferas con el ligando.

Combine las microesferas lavadas con el ligando biotinilado.

Incubar mezclando suavemente para mantener las partículas suspendidas y promover una exposición uniforme al ligando.

Los parámetros que requieren optimización incluyen:

• Concentración de ligando

• Concentración de microesferas

• tiempo de incubación

• Temperatura

• Composición del búfer

• pH del tampón

• Velocidad de mezcla

• Volumen total de reacción

6. Eliminar el ligando libre

Separe y lave las microesferas para eliminar las moléculas biotiniladas no unidas.

Un lavado insuficiente puede aumentar la señal de fondo, mientras que un lavado excesivo o brusco puede reducir la recuperación.

7. Bloquee la superficie de la microesfera

Utilice un reactivo de bloqueo compatible con la aplicación para reducir la adsorción no específica.

Los posibles bloqueadores pueden incluir:

• Albúmina sérica bovina

• Caseína

• gelatina de pescado

• Inmunoglobulina no inmune

• Polímeros bloqueantes sintéticos

• Tampones comerciales de bloqueo de partículas

El agente bloqueador debe seleccionarse de acuerdo con la matriz de ensayo y el sistema de detección.

8. resuspender y almacenar las microesferas recubiertas

Resuspender las microesferas preparadas en un tampón de almacenamiento o ensayo adecuado.

Evaluar:

• Estabilidad de dispersión

• Retención de ligando

• Actividad vinculante

• Unión no específica

• Estabilidad microbiana

• Fondo de fluorescencia

• Estabilidad de almacenamiento a corto y largo plazo.

Flujo de trabajo de desarrollo del ensayo de perlas de citometría de flujo

1. preparar microesferas de captura

Inmovilizar la molécula de captura biotinilada seleccionada en SAPS1UM-10.

Lave y bloquee las microesferas recubiertas antes de analizar las muestras.

2. preparar controles experimentales

Los controles recomendados pueden incluir:

• Búfer en blanco

• Control de microesferas sin recubrimiento

• Microesferas de estreptavidina sin ligando biotinilado

• Microesferas recubiertas de ligando biotinilado sin muestra

• muestra negativa

• muestra positiva

• Control exclusivo para reporteros

• Control de isotipo cuando sea apropiado

• Controles de un solo color para experimentos multicolores.

3. Incubar con la muestra

Combine las microesferas preparadas con la muestra de prueba.

Optimizar:

• Volumen de muestra

• Concentración de microesferas

• tiempo de incubación

• Temperatura

• Mezclando

• Condiciones de lavado

• Dilución de muestra

• Compatibilidad matricial

4. Agregue el reportero fluorescente

Agregue un anticuerpo de detección fluorescente, un anticuerpo secundario, una sonda o una molécula informadora.

El fluoróforo informador debe ser compatible con los láseres y detectores disponibles en el citómetro de flujo.

5. Lavar las microesferas

Retire el reportero fluorescente no unido para reducir la fluorescencia de fondo.

Mantenga una recuperación adecuada de las microesferas durante todo el procedimiento de lavado.

6. resuspender para citometría de flujo

Resuspender el pellet de microesferas final en un tampón de adquisición limpio y compatible.

Filtre el buffer cuando se requiera un fondo bajo en partículas.

7. Adquirir las microesferas

Utilice parámetros de dispersión y fluorescencia para identificar la población de microesferas.

Las posibles tramas incluyen:

• Dispersión hacia adelante versus dispersión lateral

• Dispersión versus fluorescencia reportera

• Histograma de fluorescencia del reportero

• Área de fluorescencia versus altura de fluorescencia

• Área de dispersión versus ancho de dispersión

8. Analizar los resultados

Los posibles resultados analíticos incluyen:

• Intensidad de fluorescencia media

• Intensidad media de fluorescencia

• Porcentaje de microesferas positivas

• Ancho de distribución de fluorescencia

• Relación señal-fondo

• Curva dosis-respuesta

• Investigación de límite de detección

• Repetibilidad

• Recuperación

• Especificidad

• Reactividad cruzada

El umbral que define una población de microesferas positivas debe establecerse utilizando controles negativos apropiados.

Detección de microesferas de 1 µm mediante citometría de flujo

La capacidad de detectar microesferas de 1 µm depende del citómetro de flujo.

Los factores importantes del instrumento incluyen:

• Longitud de onda láser

• potencia del láser

• Óptica de dispersión frontal

• Óptica de dispersión lateral

• Sensibilidad del detector

• Configuración del filtro óptico

• Canal de disparo

• Umbral de activación

• Diseño de celda de flujo

• Caudal de muestra

• Ruido electrónico

• Limpieza del fluido envolvente

Detección de dispersión

Algunos citómetros de flujo convencionales pueden identificar microesferas de polímero de 1 µm mediante dispersión frontal y lateral, mientras que otros instrumentos pueden requerir configuraciones optimizadas para partículas pequeñas.

La señal de dispersión medida también depende del índice de refracción de las microesferas y de la configuración óptica del instrumento.

Detección basada en fluorescencia

Cuando la separación por dispersión es insuficiente, la fluorescencia asociada con un indicador unido puede proporcionar un método más selectivo para identificar eventos de microesferas.

Las posibles estrategias desencadenantes incluyen:

• Activación de dispersión hacia adelante

• Activación por dispersión lateral

• Activación de fluorescencia

• Puerta combinada de dispersión y fluorescencia

Comience con una serie de diluciones

Una serie de diluciones ayuda a identificar una concentración de microesferas que proporciona:

• Tasas de eventos estables

• Eventos mínimos coincidentes

• Fluorescencia reproducible

• Separación clara del fondo

• Tiempo de adquisición adecuado

• Recuento de eventos adecuado

Las microesferas excesivamente concentradas pueden producir detección de enjambres o coincidencia, lo que hace que se registren múltiples partículas como un solo evento.

Utilice tampones y tubos limpios

Para el análisis de partículas de 1 µm, la contaminación por partículas de tampones, tubos, puntas de pipetas y fluidos de instrumentos puede interferir con la población de microesferas.

Ejecute un blanco de tampón antes de adquirir la muestra.

Grabar ajustes del instrumento

Para reproducibilidad, documente:

• Modelo de citómetro de flujo

• Configuración láser

• Filtros detectores

• Configuración de dispersión

• Configuraciones de fluorescencia

• Parámetro de activación

• Umbral de activación

• Caudal de muestra

• Dilución de microesferas

• tiempo de adquisición

• Número de eventos recopilados

• Puertas de análisis

Bloqueo y reducción de vinculaciones no específicas

La adsorción no específica puede aumentar la fluorescencia de fondo y reducir la sensibilidad del ensayo.

Las posibles causas incluyen:

• Bloqueo inadecuado

• Exceso de ligando de captura

• Exceso de reportero fluorescente

• Búfer incompatible

• Componentes de muestra hidrofóbicos

• Alta concentración de proteínas

• Anticuerpos agregados

• Lavado insuficiente

• Agregación de microesferas

• Interferencia muestra-matriz

Optimice el reactivo de bloqueo

Compare varias formulaciones de bloqueo en lugar de asumir que un bloqueador funcionará para cada ensayo.

Evaluar ambos:

• Reducción de la fluorescencia de muestras negativas.

• Retención de señal de muestra positiva.

Optimice los niveles de sal y detergente

Pequeñas cantidades de detergente compatible pueden mejorar la estabilidad de la suspensión y reducir la adsorción no específica.

El exceso de detergente puede afectar las interacciones de las biomoléculas o el rendimiento del ensayo posterior.

Titular el ligando de captura

La aplicación de más ligando biotinilado del necesario puede aumentar el consumo de reactivos y contribuir al apiñamiento estérico.

Pruebe varias concentraciones de ligando y seleccione el nivel más bajo que mantenga un rendimiento adecuado del ensayo.

Valorar al reportero

Una concentración excesiva del reportero fluorescente puede aumentar el fondo.

La titulación del indicador debe realizarse utilizando muestras positivas y negativas.

Incluir controles apropiados

Los controles ayudan a distinguir la verdadera vinculación al objetivo de:

• Autofluorescencia de microesferas

• Adsorción de reportero

• Antecedentes relacionados con la estreptavidina

• Efectos de matriz de muestra

• Interacciones de anticuerpos no específicos

Control de calidad y coherencia entre lotes

Para el desarrollo de reactivos de citometría de flujo y la compra al por mayor, la consistencia del producto debe evaluarse utilizando especificaciones acordadas.

Los posibles parámetros de control de calidad incluyen:

• Diámetro nominal de partículas

• Distribución del tamaño de partículas

• Coeficiente de variación del tamaño de partícula.

• Aspecto de la suspensión

• Contenido de sólidos

• Consistencia del recubrimiento de estreptavidina

• Capacidad de unión a biotina

• Rendimiento de dispersión

• Nivel agregado

• Fluorescencia de fondo

• Recuperación de partículas

• control microbiano

• Integridad del embalaje

• Estabilidad de almacenamiento

Capacidad de unión a biotina

La capacidad de unión se puede medir usando una sonda biotinilada definida.

El valor informado depende de:

• Tipo de sonda

• tamaño molecular

• Número de grupos de biotina

• Búfer de prueba

• tiempo de incubación

• Método de detección

• Base de cálculo

El método de prueba debe indicarse al comparar productos o lotes de producción.

Control de calidad de citometría de flujo

Un procedimiento de control de calidad basado en citometría de flujo puede evaluar:

• Posición de la población de microesferas.

• Fluorescencia reportera después de unir una sonda estándar

• Ancho de distribución

• Porcentaje de eventos positivos

• Separación de fondo

• Repetibilidad

• Población agregada

Se deben utilizar el mismo instrumento y configuración de adquisición al comparar lotes.

Documentación específica del lote

La documentación disponible puede incluir:

• Certificado de Análisis

• Especificación del producto

• Resultados del tamaño de partícula

• Resultados del contenido de sólidos

• Resultados de capacidad de unión

• Ficha de datos de seguridad

• Instrucciones de manejo

• Recomendaciones de almacenamiento

• Número de lote y fecha de producción.

Las pruebas requeridas y los límites de aceptación deben acordarse antes de la producción a granel.

Fabricación a granel y personalización

Shanghai SanYu Biotechnology Co., Ltd. apoya proyectos de microesferas de estreptavidina, desde la evaluación de la investigación hasta la fabricación a granel.

Evaluación de muestras de investigación

Se pueden utilizar muestras para evaluar:

• Detección de microesferas

• Actividad de estreptavidina

• Unión de ligando biotinilado

• Dispersión de partículas

• Unión no específica

• Compatibilidad con citometría de flujo

• Viabilidad del ensayo

Producción a escala piloto

Los lotes piloto pueden admitir:

• Optimización de la carga de ligandos

• Desarrollo de ensayos

• Pruebas de estabilidad

• Evaluación de embalaje

• Desarrollo de métodos de control de calidad.

• Verificación del cliente

• Transferencia de proceso

Producción a granel

La producción a granel se puede organizar una vez que se hayan confirmado las especificaciones del producto y los requisitos de calidad.

La información requerida para la evaluación del proyecto puede incluir:

• Cantidad requerida

• Demanda anual esperada

• Tamaño de paquete preferido

• Aplicación prevista

• Diámetro de partícula requerido

• Contenido de sólidos requerido

• Capacidad de encuadernación requerida

• Requisitos del amortiguador de suspensión

• Restricciones conservantes

• Requisitos de control de calidad

• Requisitos de documentación

• Calendario de entrega

• Destino de entrega

Tamaños de partículas personalizados

Se pueden discutir diámetros de partículas alternativos para proyectos calificados.

El tamaño de las partículas afecta:

• Número de partícula

• Superficie colectiva

• Comportamiento de asentamiento

• Detección por citometría de flujo

• Lavado y recuperación

• Cinética del ensayo

• Carga de biomoléculas

Carga personalizada de estreptavidina

Se pueden evaluar diferentes niveles de recubrimiento de estreptavidina o especificaciones de capacidad de unión según los requisitos del proyecto y la viabilidad técnica.

Codificación de fluorescencia personalizada

Para proyectos de citometría de flujo múltiple, se pueden analizar microesferas de estreptavidina internamente fluorescentes o codificadas por colores.

Las posibles direcciones de personalización incluyen:

• Diferentes colores de fluorescencia

• Diferentes intensidades de fluorescencia

• Múltiples códigos internos

• Longitudes de onda alternativas de excitación y emisión.

Concentración y embalaje personalizados

Las posibles opciones pueden incluir:

• Concentraciones de sólidos alternativas

• Tamaños de muestra de laboratorio

• Paquetes a escala piloto

• Contenedores a granel

• Volúmenes de llenado específicos del cliente

• Etiquetas OEM

• Números de catálogo específicos del cliente

Recomendaciones de manipulación y almacenamiento

Siga las condiciones de almacenamiento indicadas en la etiqueta del producto final, la ficha técnica y el Certificado de Análisis.

Las recomendaciones generales incluyen:

• Almacenar refrigerado cuando se especifique.

• No congelar a menos que se haya validado la estabilidad de congelación y descongelación.

• Mantener el recipiente bien cerrado.

• Guarde el vial en posición vertical.

• Proteja las microesferas recubiertas de proteínas de la contaminación.

• Mezclar bien antes de tomar la muestra.

• Evite dejar que las partículas se sequen.

• Utilice puntas de pipeta limpias y tubos de baja unión.

• No devuelva el material diluido a la botella original.

• Evite el almacenamiento prolongado de diluciones de trabajo preparadas.

• Registre el número de lote y la fecha de apertura.

Resuspensión

Las microesferas pueden sedimentarse durante el almacenamiento.

Antes de usar:

1. Deje que el vial alcance la temperatura de manipulación recomendada.

2. Invierta o gire suavemente el vial.

3. Aplique agitación controlada cuando esté permitido.

4. Confirmar que la suspensión sea homogénea.

5. Inspeccione si hay agregados visibles o irreversibles.

Evite la congelación

La congelación puede provocar agregación de microesferas y reducir la actividad de unión de estreptavidina.

El producto congelado debe evaluarse antes de su uso y no se debe asumir que cumple con las especificaciones originales.

Evite la contaminación por biotina libre

Los tampones, los reactivos de bloqueo, las muestras o los suplementos que contienen biotina libre pueden ocupar los sitios de unión de la estreptavidina.

Revise todos los componentes del ensayo cuando se observe una unión de ligando inesperadamente baja.

Preguntas frecuentes

¿Qué es SAPS1UM-10?

SAPS1UM-10 es una suspensión de microesferas recubiertas de estreptavidina de 1 µm con 1 % de sólidos, desarrollada para unir moléculas biotiniladas en citometría de flujo e investigación de ensayos basados ​​en perlas.

¿Quién fabrica SAPS1UM-10?

SAPS1UM-10 es suministrado por Shanghai SanYu Biotechnology Co., Ltd.

¿Cuál es el diámetro de las partículas?

El diámetro nominal de las partículas es de 1 µm.

El diámetro medido y la distribución del tamaño de las partículas deben confirmarse utilizando la documentación específica del lote.

¿Cuál es el contenido de sólidos?

SAPS1UM-10 se suministra con 1% de sólidos.

¿Las microesferas son magnéticas?

No se debe asumir que SAPS1UM-10 es magnético a menos que las propiedades magnéticas se indiquen específicamente en la especificación del producto.

Los procedimientos de separación y lavado deben seleccionarse de acuerdo con la matriz de partículas confirmada.

¿Las microesferas son fluorescentes?

No se debe asumir que el producto estándar SAPS1UM-10 contiene un tinte fluorescente interno a menos que la fluorescencia esté específicamente incluida en la especificación.

La detección por citometría de flujo puede utilizar dispersión o fluorescencia de un reportero vinculado.

¿Qué moléculas pueden unirse a las microesferas?

La superficie de estreptavidina se puede utilizar para capturar anticuerpos, proteínas, péptidos, oligonucleótidos, ADN, ARN, aptámeros y otras moléculas que contienen biotina biotinilados.

¿Se pueden unir anticuerpos directamente?

Se puede unir un anticuerpo biotinilado mediante la interacción estreptavidina-biotina.

Un anticuerpo no modificado no se unirá específicamente a través de este mecanismo a menos que primero se biotinile o se conecte mediante otro reactivo compatible.

¿Se requiere la activación de EDC/NHS?

Generalmente no se requiere la activación de EDC/NHS cuando se une una molécula biotinilada a una microesfera recubierta de estreptavidina.

¿Cuál es la capacidad vinculante?

La capacidad vinculante debe confirmarse utilizando el Certificado de Análisis o la especificación técnica específica del lote.

No debe calcularse únicamente a partir del contenido de sólidos.

¿Se puede utilizar SAPS1UM-10 en citometría de flujo?

Sí. Puede evaluarse en ensayos de perlas de citometría de flujo, siempre que el instrumento pueda detectar la población de partículas de 1 µm o la señal indicadora fluorescente asociada.

¿Puede un citómetro de flujo convencional detectar microesferas de 1 µm?

La detección depende del instrumento.

Algunos citómetros de flujo convencionales pueden resolver partículas de 1 µm utilizando configuraciones de dispersión optimizadas, mientras que otros pueden requerir detección activada por fluorescencia o una plataforma de citometría de flujo de partículas pequeñas.

¿Se puede utilizar SAPS1UM-10 en un inmunoensayo tipo sándwich?

Sí. Se puede inmovilizar un anticuerpo de captura biotinilado en la microesfera, seguido de la captura del objetivo y la detección con un anticuerpo indicador fluorescente.

Todas las condiciones del ensayo deben optimizarse experimentalmente.

¿Se puede utilizar el producto para ensayos de ácidos nucleicos?

Sí. Se pueden evaluar oligonucleótidos biotinilados, ADN, ARN, productos de PCR y aptámeros para determinar su inmovilización o captura del objetivo.

¿Se puede utilizar SAPS1UM-10 en ensayos multiplex?

Puede incorporarse a un sistema múltiplex cuando la población de partículas se puede distinguir de otras poblaciones de microesferas.

Es posible que se requiera una estrategia de codificación fluorescente personalizada.

¿Cómo se deben lavar las microesferas?

El método de lavado depende de la matriz de las partículas, la densidad, el tampón y el volumen de procesamiento.

Se pueden evaluar y validar métodos de centrifugación o basados ​​en membranas para la recuperación.

¿Por qué la recuperación de las microesferas es baja después del lavado?

Las posibles causas incluyen:

• Fuerza centrífuga inadecuada

• Corto tiempo de centrifugación

• Pérdida durante la eliminación del sobrenadante.

• Adhesión de partículas a tubos.

• Retención de membrana

• Agregación

• Método incorrecto de separación de partículas

¿Cómo se puede reducir la unión no específica?

Optimice el agente bloqueador, las condiciones de lavado, el nivel de detergente, la concentración del ligando de captura, la concentración del indicador, el tiempo de incubación y la dilución de la muestra.

¿Se pueden utilizar tampones que contengan biotina libre?

La biotina libre puede competir con la molécula de captura biotinilada por los sitios de unión de estreptavidina y, en general, debe evitarse durante la inmovilización del ligando.

¿Se debe diluir el producto antes de su uso?

Sí. La concentración de trabajo debe seleccionarse de acuerdo con la cantidad requerida de partículas, el volumen del ensayo, la tasa de eventos y la capacidad de unión.

¿Cómo se debe mezclar SAPS1UM-10?

Invierta, gire o utilice un vórtice controlado con cuidado hasta que la suspensión sea homogénea.

Evite la formación excesiva de espuma y el tratamiento agresivo.

¿Se puede congelar el producto?

Generalmente no se recomienda la congelación porque puede causar agregación irreversible y pérdida de actividad funcional.

¿Está disponible la producción a granel?

Sí. Shanghai SanYu Biotechnology Co., Ltd. admite la evaluación de muestras, lotes piloto, pedidos repetidos y fabricación a granel.

¿Se puede personalizar el tamaño o la concentración de las partículas?

Según la viabilidad técnica, se pueden discutir tamaños de partículas, concentraciones de sólidos, tamaños de paquetes, niveles de recubrimiento de estreptavidina y opciones de codificación de fluorescencia alternativos.

¿Qué información se requiere para una cotización?

Por favor proporcione:

• Número de catálogo del producto

• Cantidad requerida

• Demanda anual esperada

• Tamaño de paquete preferido

• Aplicación prevista

• Modelo de citómetro de flujo

• Número de partículas requerido por prueba

• Tipo de molécula biotinilada

• Capacidad de encuadernación requerida

• Restricciones de búfer

• Restricciones conservantes

• Requisitos de control de calidad

• Requisitos de documentación

• Destino de entrega

Solicite una muestra o una cotización al por mayor

Las microesferas de estreptavidina SAPS1UM-10 de 1 µm proporcionan una plataforma de partículas flexible para la inmovilización de biomoléculas biotiniladas, ensayos de perlas de citometría de flujo, investigación de inmunoensayos, estudios de unión de proteínas, captura de ácidos nucleicos y producción de reactivos de investigación.

El producto ofrece:

• Diámetro nominal de partícula de 1 µm

• Superficie recubierta de estreptavidina

• suspensión al 1% de sólidos

• Captura de biomoléculas biotiniladas.

• Compatibilidad con ensayos de indicadores de fluorescencia.

• Suministro de muestras y lotes piloto.

• Capacidad de fabricación a granel

• Soporte de desarrollo de productos personalizado

Para la evaluación de muestras o la compra al por mayor, proporcione la aplicación prevista, la cantidad requerida, la molécula biotinilada, la capacidad de unión deseada, la configuración del citómetro de flujo, los requisitos de embalaje y las especificaciones de control de calidad.

Nombre del producto: Microesferas de estreptavidina de 1 µm
Número de catálogo: SAPS1UM-10
Fabricante: Shanghai SanYu Biotechnology Co., Ltd.
Diámetro nominal de partícula: 1 µm
Modificación de la superficie: Estreptavidina
Contenido de sólidos: 1 %
Aplicación principal: Citometría de flujo y ensayo de perlas
Capacidad de suministro para investigación: Muestras, lotes piloto y producción a granel
Uso previsto: Solo para uso en investigación. No para uso diagnóstico o terapéutico.