Microsfere di streptavidina 1um SAPS1UM-10 1%

Microsfere di streptavidina da 1 µm per citometria a flusso

Shanghai SanYu Biotechnology Co., Ltd. fornisce microsfere di streptavidina SAPS1UM-10 da 1 µm per lo sviluppo di test di citometria a flusso, l'immobilizzazione di biomolecole biotinilate, test immunologici basati su particelle, ricerca sulla cattura di affinità e produzione di reagenti in massa.

Le microsfere SAPS1UM-10 hanno un diametro nominale delle particelle di 1 µm e vengono fornite come sospensione di solidi all'1%. La superficie della microsfera è rivestita di streptavidina, consentendo alle particelle di catturare anticorpi, antigeni, proteine, peptidi, oligonucleotidi, DNA, RNA e altre molecole contenenti biotina biotinilati.

Il prodotto può supportare studi di fattibilità di laboratorio, ottimizzazione dei test con microsfere, sviluppo su scala pilota, produzione ripetuta e acquisti in grandi quantità da parte di aziende biotecnologiche e organizzazioni di ricerca.

Risposta rapida sul prodotto

SAPS1UM-10 è una sospensione di microsfere rivestite di streptavidina da 1 µm con l'1% di solidi. È progettato per immobilizzare biomolecole biotinilate per saggi di citometria a flusso, ricerca su immunodosaggi, cattura di acidi nucleici, studi di legame di affinità e sviluppo di metodi analitici basati su particelle.

Caratteristiche salienti del prodotto

• Nome del prodotto: microsfere di streptavidina da 1 µm

• Numero di catalogo: SAPS1UM-10

• Produttore: Shanghai SanYu Biotechnology Co., Ltd.

• Diametro nominale delle particelle: 1 µm

• Rivestimento superficiale: streptavidina

• Contenuto solido: 1%

• Forma fisica: Sospensione acquosa di microsfere

• Applicazione primaria: ricerca sulla citometria a flusso

• Principio legante: affinità streptavidina-biotina

• Capacità di fornitura: campioni, lotti pilota e produzione in serie

• Personalizzazione: Disponibile in base alla fattibilità del progetto

• Destinazione d'uso: Solo per uso di ricerca

Cosa sono le microsfere di streptavidina SAPS1UM-10?

SAPS1UM-10 è costituito da microsfere polimeriche di dimensioni micron con streptavidina immobilizzata sulla superficie delle particelle.

Le microsfere rivestite di streptavidina forniscono un comodo supporto solido per attaccare le biomolecole biotinilate senza richiedere all'utente finale di eseguire l'accoppiamento covalente diretto alla superficie delle particelle.

Una molecola biotinilata può essere incubata con le microsfere e catturata attraverso l’interazione streptavidina-biotina ad alta affinità. Le microsfere preparate possono quindi essere utilizzate in test di legame basati su particelle, analisi di citometria a flusso, cattura di target, immobilizzazione di biomolecole e ricerca per lo sviluppo di test.

Le potenziali molecole di cattura biotinilate includono:

• Anticorpi

• Antigeni

• Proteine ​​ricombinanti

• Peptidi

• Enzimi

• Lectine

• Recettori

• Leganti

• Oligonucleotidi

• Sonde del DNA

• Sonde di RNA

• Aptameri

• Piccole molecole biotinilate

La dimensione delle particelle di 1 µm fornisce un numero di particelle relativamente elevato per unità di massa pur mantenendo una superficie fisica adatta all'immobilizzazione della biomolecola.

Poiché le particelle da 1 µm sono vicine all'intervallo di rilevamento inferiore di alcuni citometri a flusso convenzionali, la compatibilità dello strumento e le impostazioni di acquisizione dovrebbero essere valutate durante lo sviluppo del metodo.

SAPS1UM-10 Specifiche tecniche

I seguenti parametri devono essere confermati utilizzando la specifica tecnica finale o il certificato di analisi specifico del lotto:

• Matrice delle particelle

• Diametro delle particelle misurate

• Distribuzione granulometrica

• Coefficiente di variazione della dimensione delle particelle

• Livello di rivestimento della streptavidina

• Capacità di legare la biotina

• Tampone di sospensione

• Stabilizzatore

• Tensioattivo

• Conservante

• Concentrazione del numero di particelle

• Volume dell'imballaggio

• Durata di conservazione

• Condizioni di conservazione

La capacità legante deve essere riportata utilizzando il metodo di prova effettivo e i risultati specifici del lotto anziché stimarla in base alla dimensione delle particelle o al contenuto di solidi.

Come funziona il legame streptavidina-biotina

La streptavidina è una proteina legante la biotina con più siti di legame. Quando un anticorpo, una proteina, un peptide o un acido nucleico biotinilato viene miscelato con SAPS1UM-10, il gruppo biotina interagisce con il rivestimento di streptavidina sulla superficie della microsfera.

Ciò crea un metodo rapido e stabile per immobilizzare un'ampia gamma di biomolecole.

Una struttura tipica è:

Superficie della microsfera – Streptavidina – Biotina – Molecola di cattura

Per esempio:

Microsfera – Streptavidina – Anticorpo biotinilato

L'anticorpo immobilizzato può successivamente catturare il suo antigene corrispondente. È quindi possibile introdurre un anticorpo di rilevamento marcato in modo fluorescente e la fluorescenza associata alla microsfera risultante può essere misurata mediante citometria a flusso.

Vantaggi dell'immobilizzazione con streptavidina-biotina

• Semplice attacco di biomolecola

• Nessuna attivazione diretta della microsfera richiesta dall'utente finale

• Compatibile con molte biomolecole biotinilate

• Orientamento flessibile della molecola di cattura

• Adatto per lo sviluppo di test modulari

• Comoda sostituzione di un ligando biotinilato con un altro

• Compatibile con i flussi di lavoro di test immunologici e acidi nucleici

• Adatto per la ricerca su singolo analita e multiplex

Le prestazioni di legame finali dipendono dal livello di biotinilazione, dalle dimensioni molecolari, dalle condizioni di incubazione, dall'accessibilità superficiale, dalla composizione del tampone e dagli effetti sterici.

Perché scegliere le microsfere rivestite con streptavidina da 1 µm?

Elevato numero di particelle per volume unitario

Rispetto alle microsfere più grandi con lo stesso contenuto di solidi, le microsfere da 1 µm forniscono un numero maggiore di particelle individuali.

Ciò può essere utile quando un test richiede:

• Un gran numero di eventi vincolanti indipendenti

• Basso consumo di microsfere per test

• Formati di reazione ad alto rendimento

• Piccoli volumi di campioni

• Flussi di lavoro basati su micropiastre

• Numerosi eventi di citometria a flusso

La concentrazione effettiva del numero di particelle deve essere determinata dal diametro delle particelle misurate, dalla densità delle particelle, dal contenuto di solidi e dalla caratterizzazione specifica del lotto.

Ampia Superficie Collettiva

Una sospensione contenente molte piccole microsfere può fornire una superficie totale sostanziale per l'immobilizzazione della biomolecola.

Tuttavia, la capacità legante utilizzabile è determinata da qualcosa di più dell'area superficiale delle particelle. Anche la densità della streptavidina, l'attività di rivestimento, l'accessibilità sterica, la dimensione del ligando e il livello di biotinilazione influiscono sul risultato finale.

Progettazione di test modulari

Una piattaforma di microsfere rivestite di streptavidina può essere combinata con diverse molecole di cattura biotinilate.

Ciò consente ai ricercatori di sviluppare test multipli senza produrre un coniugato di particelle covalenti separato per ogni sonda di anticorpo, proteina o acido nucleico.

Adatto per il rilevamento basato sulla fluorescenza

Non è necessario che SAPS1UM-10 sia intrinsecamente fluorescente per supportare un test di citometria a flusso.

Un segnale di fluorescenza può essere introdotto attraverso:

• Un ligando biotinilato marcato in modo fluorescente

• Una molecola bersaglio fluorescente

• Un anticorpo di rilevamento fluorescente

• Un anticorpo secondario fluorescente

• Una sonda fluorescente per l'acido nucleico

• Un coniugato reporter fluorescente

La fluorescenza reporter identifica gli eventi di legame associati alla popolazione delle microsfere.

Adatto per lo sviluppo dalla ricerca alla produzione

SAPS1UM-10 può supportare i primi test di fattibilità seguiti dalla produzione su scala pilota e in serie dopo che i requisiti tecnici sono stati confermati.

Caratteristiche principali del prodotto

Diametro nominale delle particelle di 1 µm

La dimensione delle particelle su scala micron è adatta per studi di legame basati su particelle e flussi di lavoro di citometria a flusso ottimizzati.

Superficie rivestita di streptavidina

La superficie delle particelle è progettata per catturare biomolecole biotinilate attraverso l'affinità streptavidina-biotina.

Sospensione di solidi all'1%.

Il prodotto viene fornito all'1% di solidi e può essere diluito in base al numero richiesto di microsfere, al volume del test e alla frequenza degli eventi della citometria a flusso.

Immobilizzazione flessibile della biomolecola

La stessa piattaforma di microsfere può essere utilizzata con diversi anticorpi biotinilati, proteine, peptidi o sonde di acido nucleico.

Non è richiesta l'attivazione della carbodiimmide da parte dell'utente finale

Quando è disponibile una molecola biotinilata adatta, può essere immobilizzata senza eseguire l'attivazione EDC/NHS dei gruppi carbossilici.

Compatibile con i test reporter fluorescenti

Le microsfere possono essere combinate con reagenti di rilevamento basati sulla fluorescenza per l'analisi di citometria a flusso.

Adatto per la ricerca singleplex e multiplex

Durante lo sviluppo del test multiplex è possibile valutare diverse popolazioni di microsfere, ligandi di cattura o codici di fluorescenza.

Capacità di produzione in serie

Shanghai SanYu Biotechnology Co., Ltd. supporta la valutazione dei campioni, la produzione pilota, gli ordini ripetuti, i progetti OEM e la fornitura all'ingrosso.

Applicazioni in citometria a flusso

Sviluppo di test immunologici basati su microsfere

SAPS1UM-10 può essere utilizzato come supporto in fase solida nei test di ricerca per rilevare:

• Proteine

• Anticorpi

• Antigeni

• Citochine

• Ormoni

• Biomarcatori

• Obiettivi associati agli agenti patogeni

• Molecole derivate dalle cellule

• Analiti ambientali

• Composti di ricerca

Un tipico test sandwich basato su microsfere utilizza:

1. Un anticorpo di cattura biotinilato immobilizzato sulla microsfera.

2. Un analita target catturato dal campione.

3. Un anticorpo di rilevamento fluorescente legato al bersaglio catturato.

4. Citometria a flusso per misurare la fluorescenza associata alle microsfere.

Immobilizzazione degli anticorpi biotinilati

Gli anticorpi biotinilati possono essere attaccati a SAPS1UM-10 senza l'attivazione chimica diretta della microsfera.

Le potenziali applicazioni di ricerca includono:

• Rilevazione dell'antigene

• Screening degli anticorpi

• Screening dell'ibridoma

• Analisi dell'interazione delle proteine

• Test di fattibilità del test

• Confronto cattura-anticorpo

• Ottimizzazione dei reagenti di rilevamento

Studi sul legame di proteine ​​e peptidi

Le proteine ​​e i peptidi biotinilati possono essere immobilizzati per:

• Studi sul legame degli anticorpi

• Studi sull'interazione recettore-ligando

• Ricerca sull'interazione proteina-proteina

• Screening degli epitopi

• Ricerca sui biomarcatori

• Saggi di scoperta di farmaci

Cattura dell'acido nucleico

Oligonucleotidi biotinilati, DNA, RNA e aptameri possono essere attaccati alla superficie della microsfera.

Le potenziali applicazioni includono:

• Saggi di ibridazione

• Ricerca sul rilevamento di mutazioni

• Sviluppo di metodi di genotipizzazione

• Acquisizione specifica della sequenza

• Studi sul legame degli acidi nucleici

• Rilevamento basato su aptameri

• Ricerca diagnostica molecolare

• Cattura del prodotto PCR

Ricerca sul legame della superficie cellulare

Quando rivestito con un ligando biotinilato adatto, SAPS1UM-10 può essere valutato per il legame con specifici recettori della superficie cellulare.

L'interazione tra le particelle e le cellule deve essere attentamente ottimizzata poiché la concentrazione delle microsfere, la densità del ligando, il tempo di incubazione, la temperatura, le condizioni delle cellule e le procedure di lavaggio possono influenzare il risultato.

Ricerca sulla citometria a flusso multiplex

SAPS1UM-10 può essere incorporato in una piattaforma multiplex quando può essere distinto da altre popolazioni di microsfere.

Le potenziali strategie di differenziazione includono:

• Diverse dimensioni delle particelle

• Diversi codici di fluorescenza interna

• Diverse intensità di fluorescenza

• Diversi colori visibili

• Diversi canali giornalistici

• Diverse molecole di cattura superficiale

Non si deve presumere che il prodotto standard SAPS1UM-10 contenga un codice di fluorescenza interno a meno che ciò non sia indicato nelle specifiche del prodotto.

Molecole biotinilate compatibili con SAPS1UM-10

SAPS1UM-10 può essere valutato con molti tipi di molecole biotinilate.

Anticorpi biotinilati

I formati applicabili possono includere:

• IgG a lunghezza intera

• Frammenti favolosi

• Frammenti F(ab′)₂

• Anticorpi ricombinanti

• Anticorpi a dominio singolo

• Altri formati di anticorpi ingegnerizzati

Il numero e la posizione dei gruppi di biotina possono influenzare l'orientamento degli anticorpi e l'attività di legame con l'antigene.

Proteine ​​biotinilate

I potenziali esempi includono:

• Antigeni

• Enzimi

• Recettori

• Citochine

• Fattori di crescita

• Legame delle proteine

• Proteine ​​di fusione ricombinanti

Peptidi biotinilati

I peptidi biotinilati possono supportare:

• Mappatura degli epitopi

• Screening degli anticorpi

• Studi sul legame dei recettori

• Ricerca sul substrato enzimatico

• Screening per la scoperta di farmaci

Acidi nucleici biotinilati

I formati potenziali includono:

• DNA a filamento singolo

• DNA a doppio filamento

• RNA

• Prodotti PCR

• Sonde oligonucleotidiche

• Aptameri

• Analoghi degli acidi nucleici modificati

Piccole molecole biotinilate

Piccoli composti biotinilati possono attaccarsi quando il gruppo biotina rimane accessibile alla superficie della streptavidina.

Un distanziatore adatto può ridurre l'ingombro sterico tra la superficie della microsfera e la molecola bersaglio.

Flusso di lavoro consigliato per l'immobilizzazione del ligando biotinilato

Il seguente protocollo è un punto di partenza generale dello sviluppo. Le condizioni finali dovrebbero essere ottimizzate in base alla molecola biotinilata e al test previsto.

1. Risospendere le microsfere

Lasciare che la sospensione di microsfere raggiunga la temperatura di manipolazione consigliata.

Miscelare accuratamente la fiala capovolgendola delicatamente, ruotandola o agitandola su vortex controllata fino a quando la sospensione risulta omogenea.

Evitare un'eccessiva formazione di schiuma.

2. Calcolare la quantità di microsfere richiesta

Determinare la quantità di SAPS1UM-10 richiesta in base a:

• Numero di test

• Microsfere per test

• Volume del test

• Capacità vincolante richiesta

• Concentrazione prevista del campione

• Conteggio degli eventi desiderati della citometria a flusso

Non calcolare il carico del ligando solo dal contenuto di solidi. Utilizzare la capacità di rilegatura specifica del lotto quando disponibile.

3. Lavare le microsfere

Trasferire la sospensione di microsfere necessaria in una provetta pulita a basso legame.

Lavare le particelle utilizzando un tampone legante compatibile per rimuovere gli additivi di conservazione che potrebbero interferire con il test.

I possibili approcci di separazione includono:

• Centrifugazione

• Filtrazione su membrana

• Filtrazione a flusso tangenziale

• Altri metodi validati di recupero delle particelle

Il metodo appropriato dipende dalla matrice delle microsfere, dalla densità, dalle dimensioni delle particelle, dalla formulazione e dal volume di lavorazione.

4. Preparare il ligando biotinilato

Diluire l'anticorpo, la proteina, il peptide o l'acido nucleico biotinilato in un tampone compatibile.

Il tampone non deve contenere una quantità eccessiva di biotina libera o altre sostanze che competono per i siti di legame della streptavidina.

5. Incubare le microsfere con il ligando

Unire le microsfere lavate con il ligando biotinilato.

Incubare mescolando delicatamente per mantenere le particelle sospese e favorire un'esposizione uniforme del ligando.

I parametri che richiedono l'ottimizzazione includono:

• Concentrazione del ligando

• Concentrazione della microsfera

• Tempo di incubazione

• Temperatura

• Composizione del tampone

• pH tampone

• Velocità di miscelazione

• Volume totale di reazione

6. Rimuovere il ligando non legato

Separare e lavare le microsfere per rimuovere le molecole biotinilate non legate.

Un lavaggio insufficiente può aumentare il segnale di fondo, mentre un lavaggio eccessivo o violento può ridurre il recupero.

7. Bloccare la superficie della microsfera

Utilizzare un reagente bloccante compatibile con l'applicazione per ridurre l'adsorbimento non specifico.

I potenziali bloccanti possono includere:

• Albumina sierica bovina

• Caseina

• Gelatina di pesce

• Immunoglobulina non immune

• Polimeri bloccanti sintetici

• Tamponi commerciali per il blocco delle particelle

L'agente bloccante deve essere selezionato in base alla matrice del test e al sistema di rilevamento.

8. Risospendere e conservare le microsfere rivestite

Risospendere le microsfere preparate in un idoneo tampone di conservazione o di analisi.

Valutare:

• Stabilità della dispersione

• Ritenzione del ligando

• Attività vincolante

• Legame non specifico

• Stabilità microbica

• Sfondo di fluorescenza

• Stabilità di conservazione a breve e lungo termine

Flusso di lavoro di sviluppo del test con microsfere per citometria a flusso

1. Preparare le microsfere di cattura

Immobilizzare la molecola di cattura biotinilata selezionata su SAPS1UM-10.

Lavare e bloccare le microsfere rivestite prima di testare i campioni.

2. Preparare i controlli sperimentali

I controlli consigliati possono includere:

• Buffer vuoto

• Controllo delle microsfere non rivestite

• Microsfera di streptavidina senza ligando biotinilato

• Microsfera rivestita con ligando biotinilato senza campione

• Campione negativo

• Campione positivo

• Controllo riservato al reporter

• Controllo degli isotipi quando appropriato

• Controlli monocolore per esperimenti multicolori

3. Incubare con il campione

Combinare le microsfere preparate con il campione da testare.

Ottimizzare:

• Volume del campione

• Concentrazione della microsfera

• Tempo di incubazione

• Temperatura

• Miscelazione

• Condizioni di lavaggio

• Diluizione del campione

• Compatibilità della matrice

4. Aggiungere il reporter fluorescente

Aggiungere un anticorpo di rilevamento fluorescente, un anticorpo secondario, una sonda o una molecola reporter.

Il fluoroforo reporter deve essere compatibile con i laser e i rilevatori disponibili sul citometro a flusso.

5. Lavare le microsfere

Rimuovere il reporter fluorescente non legato per ridurre la fluorescenza di fondo.

Mantenere un adeguato recupero delle microsfere durante tutta la procedura di lavaggio.

6. Risospendere per la citometria a flusso

Risospendere il pellet di microsfere finale in un buffer di acquisizione pulito e compatibile.

Filtrare il buffer quando è richiesto un fondo a basso particolato.

7. Acquisisci le microsfere

Utilizzare i parametri di dispersione e fluorescenza per identificare la popolazione di microsfere.

Trame possibili includono:

• Scattering in avanti contro scattering laterale

• Fluorescenza scatter rispetto a quella reporter

• Istogramma di fluorescenza reporter

• Area di fluorescenza rispetto all'altezza di fluorescenza

• Area di dispersione rispetto alla larghezza di dispersione

8. Analizzare i risultati

I possibili output analitici includono:

• Intensità mediana della fluorescenza

• Intensità media della fluorescenza

• Percentuale di microsfere positive

• Ampiezza di distribuzione della fluorescenza

• Rapporto segnale/fondo

• Curva dose-risposta

• Ricerca sui limiti di rilevamento

• Ripetibilità

• Recupero

• Specificità

• Reattività crociata

La soglia che definisce una popolazione di microsfere positiva deve essere stabilita utilizzando controlli negativi appropriati.

Rilevazione di microsfere da 1 µm mediante citometria a flusso

La capacità di rilevare microsfere da 1 µm dipende dal citometro a flusso.

Importanti fattori strumentali includono:

• Lunghezza d'onda del laser

• Potenza del laser

• Ottica a diffusione diretta

• Ottica a diffusione laterale

• Sensibilità del rilevatore

• Configurazione del filtro ottico

• Canale di attivazione

• Soglia di attivazione

• Design della cella a flusso

• Portata del campione

• Rumore elettronico

• Pulizia del fluido della guaina

Rilevamento della dispersione

Alcuni citometri a flusso convenzionali possono identificare microsfere polimeriche da 1 µm utilizzando la diffusione frontale e laterale, mentre altri strumenti possono richiedere impostazioni ottimizzate per le piccole particelle.

Il segnale di dispersione misurato dipende anche dall'indice di rifrazione della microsfera e dalla configurazione ottica dello strumento.

Rilevamento basato sulla fluorescenza

Quando la separazione dello scatter è insufficiente, la fluorescenza associata a un reporter legato può fornire un metodo più selettivo per identificare gli eventi delle microsfere.

Le possibili strategie di attivazione includono:

• Trigger con diffusione in avanti

• Attivazione della diffusione laterale

• Innesco della fluorescenza

• Gate combinato di diffusione e fluorescenza

Inizia con una serie di diluizioni

Una serie di diluizioni aiuta a identificare una concentrazione di microsfere che fornisce:

• Tassi di eventi stabili

• Eventi coincidenti minimi

• Fluorescenza riproducibile

• Chiara separazione dello sfondo

• Tempo di acquisizione adeguato

• Conteggio degli eventi adeguato

Microsfere eccessivamente concentrate possono produrre il rilevamento di uno sciame o una coincidenza, causando la registrazione di più particelle come un unico evento.

Utilizzare tamponi e provette puliti

Per l'analisi delle particelle da 1 µm, la contaminazione delle particelle da tamponi, provette, puntali di pipette e fluidi dello strumento può interferire con la popolazione di microsfere.

Eseguire un buffer vuoto prima di acquisire il campione.

Registra le impostazioni dello strumento

Per la riproducibilità, documentare:

• Modello di citometro a flusso

• Configurazione laser

• Filtri rilevatori

• Impostazioni di dispersione

• Impostazioni della fluorescenza

• Parametro di attivazione

• Soglia di attivazione

• Portata del campione

• Diluizione delle microsfere

• Tempo di acquisizione

• Numero di eventi raccolti

• Porte di analisi

Blocco e riduzione del legame non specifico

L'adsorbimento non specifico può aumentare la fluorescenza di fondo e ridurre la sensibilità del test.

Le potenziali cause includono:

• Blocco inadeguato

• Legante di cattura in eccesso

• Reporter fluorescente in eccesso

• Buffer incompatibile

• Componenti del campione idrofobo

• Alta concentrazione proteica

• Anticorpi aggregati

• Lavaggio insufficiente

• Aggregazione delle microsfere

• Interferenza matrice-campione

Ottimizzare il reagente bloccante

Confrontare diverse formulazioni bloccanti anziché dare per scontato che un bloccante funzionerà per ogni analisi.

Valutali entrambi:

• Riduzione della fluorescenza del campione negativo

• Conservazione del segnale del campione positivo

Ottimizza i livelli di sale e detersivo

Piccole quantità di detergente compatibile possono migliorare la stabilità della sospensione e ridurre l'adsorbimento non specifico.

Una quantità eccessiva di detergente può influenzare le interazioni delle biomolecole o le prestazioni del test a valle.

Titolare il ligando di cattura

L'applicazione di più ligando biotinilato del necessario può aumentare il consumo di reagente e può contribuire all'affollamento sterico.

Testare diverse concentrazioni di ligando e selezionare il livello più basso che mantenga prestazioni adeguate del test.

Titolare il Reporter

Una concentrazione eccessiva di reporter fluorescente può aumentare lo sfondo.

La titolazione del reporter deve essere eseguita utilizzando campioni positivi e negativi.

Includere controlli appropriati

I controlli aiutano a distinguere il vero legame del target da:

• Autofluorescenza delle microsfere

• Adsorbimento del reporter

• Background correlato alla streptavidina

• Effetti della matrice campione

• Interazioni anticorpali non specifiche

Controllo di qualità e coerenza tra lotti

Per lo sviluppo di reagenti per citometria a flusso e l'acquisto in grandi quantità, la consistenza del prodotto deve essere valutata utilizzando le specifiche concordate.

I potenziali parametri di controllo della qualità includono:

• Diametro nominale delle particelle

• Distribuzione granulometrica

• Coefficiente di variazione della dimensione delle particelle

• Aspetto della sospensione

• Contenuto di solidi

• Consistenza del rivestimento di streptavidina

• Capacità di legare la biotina

• Prestazioni di dispersione

• Livello aggregato

• Fluorescenza di fondo

• Recupero delle particelle

• Controllo microbico

• Integrità dell'imballaggio

• Stabilità di stoccaggio

Capacità di legare la biotina

La capacità di legame può essere misurata utilizzando una sonda biotinilata definita.

Il valore riportato dipende da:

• Tipo di sonda

• Dimensione molecolare

• Numero di gruppi di biotina

• Tampone di prova

• Tempo di incubazione

• Metodo di rilevamento

• Base di calcolo

Il metodo di prova dovrebbe essere indicato quando si confrontano prodotti o lotti di produzione.

QC della citometria a flusso

Una procedura di QC basata sulla citometria a flusso può valutare:

• Posizione della popolazione della microsfera

• Fluorescenza reporter dopo aver legato una sonda standard

• Larghezza di distribuzione

• Percentuale di eventi positivi

• Separazione dello sfondo

• Ripetibilità

• Popolazione aggregata

È necessario utilizzare le stesse impostazioni dello strumento e dell'acquisizione quando si confrontano i lotti.

Documentazione specifica del lotto

La documentazione disponibile può includere:

• Certificato di analisi

• Specifiche del prodotto

• Risultati relativi alla dimensione delle particelle

• Risultati del contenuto di solidi

• Risultati sulla capacità di legame

• Scheda dati di sicurezza

• Istruzioni per la manipolazione

• Consigli per la conservazione

• Numero di lotto e data di produzione

I test richiesti e i limiti di accettazione dovrebbero essere concordati prima della produzione in serie.

Produzione in serie e personalizzazione

Shanghai SanYu Biotechnology Co., Ltd. supporta progetti relativi alle microsfere di streptavidina, dalla valutazione della ricerca alla produzione in serie.

Valutazione del campione di ricerca

I campioni possono essere utilizzati per valutare:

• Rilevazione di microsfere

• Attività della streptavidina

• Legame del ligando biotinilato

• Dispersione delle particelle

• Legame non specifico

• Compatibilità con citometria a flusso

• Fattibilità del test

Produzione su scala pilota

I lotti pilota possono supportare:

• Ottimizzazione del caricamento dei ligandi

• Sviluppo del test

• Test di stabilità

• Valutazione dell'imballaggio

• Sviluppo di metodi di controllo qualità

• Verifica del cliente

• Trasferimento del processo

Produzione in serie

La produzione in serie può essere organizzata dopo che le specifiche del prodotto e i requisiti di qualità sono stati confermati.

Le informazioni richieste per la valutazione del progetto possono includere:

• Quantità richiesta

• Domanda annua prevista

• Dimensione del pacchetto preferita

• Applicazione prevista

• Diametro delle particelle richiesto

• Contenuto di solidi richiesto

• Capacità vincolante richiesta

• Requisiti del buffer di sospensione

• Restrizioni conservative

• Requisiti di controllo della qualità

• Requisiti di documentazione

• Programma di consegna

• Destinazione di consegna

Dimensioni delle particelle personalizzate

Diametri alternativi delle particelle possono essere discussi per progetti qualificati.

La dimensione delle particelle influisce:

• Numero di particelle

• Superficie collettiva

• Comportamento di assestamento

• Rilevazione mediante citometria a flusso

• Lavaggio e recupero

• Cinetica del saggio

• Caricamento di biomolecole

Caricamento personalizzato della streptavidina

Diversi livelli di rivestimento di streptavidina o specifiche di capacità legante possono essere valutati in base ai requisiti del progetto e alla fattibilità tecnica.

Codifica personalizzata della fluorescenza

Per i progetti di citometria a flusso multiplex, possono essere discusse microsfere di streptavidina fluorescenti internamente o codificate a colori.

Le possibili indicazioni di personalizzazione includono:

• Diversi colori di fluorescenza

• Diverse intensità di fluorescenza

• Codici interni multipli

• Lunghezze d'onda alternative di eccitazione ed emissione

Concentrazione e confezionamento personalizzati

Le opzioni possibili possono includere:

• Concentrazioni di solidi alternative

• Dimensioni del campione di laboratorio

• Pacchetti su scala pilota

• Contenitori sfusi

• Volumi di riempimento specifici del cliente

• Etichette OEM

• Numeri di catalogo specifici del cliente

Raccomandazioni per la manipolazione e lo stoccaggio

Seguire le condizioni di conservazione indicate sull'etichetta del prodotto finale, sulla scheda tecnica e sul Certificato di analisi.

Le raccomandazioni generali includono:

• Conservare in frigorifero quando specificato.

• Non congelare a meno che non sia stata convalidata la stabilità al congelamento-scongelamento.

• Tenere il contenitore ben chiuso.

• Conservare la fiala in posizione verticale.

• Proteggere le microsfere rivestite di proteine ​​dalla contaminazione.

• Mescolare accuratamente prima del campionamento.

• Evitare che le particelle si asciughino.

• Utilizzare puntali per pipette puliti e provette a basso legame.

• Non rimettere il materiale diluito nel flacone originale.

• Evitare la conservazione prolungata delle diluizioni di lavoro preparate.

• Registrare il numero di lotto e la data di apertura.

Risospensione

Le microsfere possono depositarsi durante la conservazione.

Prima dell'uso:

1. Lasciare che la fiala raggiunga la temperatura di manipolazione consigliata.

2. Capovolgere o ruotare delicatamente la fiala.

3. Applicare il vortex controllato quando consentito.

4. Confermare che la sospensione sia omogenea.

5. Ispezionare eventuali aggregati visibili o irreversibili.

Evitare il congelamento

Il congelamento può causare l'aggregazione delle microsfere e può ridurre l'attività legante della streptavidina.

Il prodotto congelato deve essere valutato prima dell'uso e non si deve presumere che soddisfi le specifiche originali.

Evitare la contaminazione da biotina libera

Tamponi, reagenti bloccanti, campioni o integratori contenenti biotina libera possono occupare siti di legame della streptavidina.

Esaminare tutti i componenti del test quando si osserva un legame inaspettatamente basso con il ligando.

Domande frequenti

Cos'è SAPS1UM-10?

SAPS1UM-10 è una sospensione di microsfere rivestite di streptavidina da 1 µm con l'1% di solidi, sviluppata per legare molecole biotinilate nella citometria a flusso e nella ricerca con test basati su microsfere.

Chi produce SAPS1UM-10?

SAPS1UM-10 è fornito da Shanghai SanYu Biotechnology Co., Ltd.

Qual è il diametro delle particelle?

Il diametro nominale delle particelle è 1 µm.

Il diametro misurato e la distribuzione granulometrica devono essere confermati utilizzando la documentazione specifica del lotto.

Qual è il contenuto di solidi?

SAPS1UM-10 viene fornito all'1% di solidi.

Le microsfere sono magnetiche?

Non si deve presumere che SAPS1UM-10 sia magnetico a meno che le proprietà magnetiche non siano specificatamente indicate nelle specifiche del prodotto.

Le procedure di separazione e lavaggio devono essere selezionate in base alla matrice delle particelle confermata.

Le microsfere sono fluorescenti?

Non si deve presumere che il prodotto standard SAPS1UM-10 contenga un colorante fluorescente interno a meno che la fluorescenza non sia specificatamente elencata nelle specifiche.

Il rilevamento tramite citometria a flusso può utilizzare la dispersione o la fluorescenza da un reporter legato.

Quali molecole possono legarsi alle microsfere?

La superficie della streptavidina può essere utilizzata per catturare anticorpi biotinilati, proteine, peptidi, oligonucleotidi, DNA, RNA, aptameri e altre molecole contenenti biotina.

Gli anticorpi possono essere attaccati direttamente?

Un anticorpo biotinilato può essere attaccato attraverso l'interazione streptavidina-biotina.

Un anticorpo non modificato non si legherà specificamente attraverso questo meccanismo a meno che non venga prima biotinilato o collegato tramite un altro reagente compatibile.

È necessaria l'attivazione dell'EDC/NHS?

L'attivazione dell'EDC/NHS generalmente non è necessaria quando si collega una molecola biotinilata a una microsfera rivestita di streptavidina.

Qual è la capacità legante?

La capacità legante deve essere confermata utilizzando il certificato di analisi specifico del lotto o la specifica tecnica.

Non dovrebbe essere calcolato solo dal contenuto di solidi.

SAPS1UM-10 può essere utilizzato nella citometria a flusso?

SÌ. Può essere valutato nei test con microsfere di citometria a flusso, a condizione che lo strumento sia in grado di rilevare la popolazione di particelle da 1 µm o il segnale reporter fluorescente associato.

Un citometro a flusso convenzionale può rilevare microsfere da 1 µm?

Il rilevamento dipende dallo strumento.

Alcuni citometri a flusso convenzionali possono risolvere particelle da 1 µm utilizzando impostazioni di dispersione ottimizzate, mentre altri possono richiedere il rilevamento attivato dalla fluorescenza o una piattaforma di citometria a flusso di piccole particelle.

È possibile utilizzare SAPS1UM-10 in un test immunologico sandwich?

SÌ. Un anticorpo di cattura biotinilato può essere immobilizzato sulla microsfera, seguito dalla cattura e dal rilevamento del bersaglio con un anticorpo reporter fluorescente.

Tutte le condizioni del test devono essere ottimizzate sperimentalmente.

Il prodotto può essere utilizzato per analisi degli acidi nucleici?

SÌ. Oligonucleotidi biotinilati, DNA, RNA, prodotti della PCR e aptameri possono essere valutati per l'immobilizzazione o la cattura del bersaglio.

È possibile utilizzare SAPS1UM-10 nei test multiplex?

Può essere incorporato in un sistema multiplex quando la popolazione di particelle può essere distinta da altre popolazioni di microsfere.

Potrebbe essere necessaria una strategia di codifica fluorescente personalizzata.

Come si lavano le microsfere?

Il metodo di lavaggio dipende dalla matrice delle particelle, dalla densità, dal tampone e dal volume di lavorazione.

La centrifugazione o i metodi basati su membrana possono essere valutati e convalidati per il recupero.

Perché il recupero delle microsfere è basso dopo il lavaggio?

Le possibili cause includono:

• Forza centrifuga inadeguata

• Breve tempo di centrifugazione

• Perdita durante la rimozione del surnatante

• Adesione delle particelle ai tubi

• Ritenzione della membrana

• Aggregazione

• Metodo di separazione delle particelle errato

Come si può ridurre il legame non specifico?

Ottimizza l'agente bloccante, le condizioni di lavaggio, il livello del detergente, la concentrazione del ligando di cattura, la concentrazione del reporter, il tempo di incubazione e la diluizione del campione.

È possibile utilizzare tamponi contenenti biotina libera?

La biotina libera può competere con la molecola di cattura biotinilata per i siti di legame della streptavidina e dovrebbe generalmente essere evitata durante l’immobilizzazione del ligando.

Il prodotto deve essere diluito prima dell'uso?

SÌ. La concentrazione di lavoro deve essere selezionata in base al numero richiesto di particelle, al volume del test, al tasso di eventi e alla capacità legante.

Come dovrebbe essere miscelato SAPS1UM-10?

Capovolgere, ruotare o utilizzare delicatamente il vortex controllato finché la sospensione non risulta omogenea.

Evitare un'eccessiva formazione di schiuma e trattamenti aggressivi.

Il prodotto può essere congelato?

Il congelamento è generalmente sconsigliato perché potrebbe causare aggregazione irreversibile e perdita di attività funzionale.

È disponibile la produzione in serie?

SÌ. Shanghai SanYu Biotechnology Co., Ltd. supporta la valutazione di campioni, lotti pilota, ordini ripetuti e produzione di massa.

È possibile personalizzare la dimensione o la concentrazione delle particelle?

Dimensioni alternative delle particelle, concentrazioni di solidi, dimensioni delle confezioni, livelli di rivestimento di streptavidina e opzioni di codifica della fluorescenza possono essere discusse in base alla fattibilità tecnica.

Quali informazioni sono necessarie per un preventivo?

Si prega di fornire:

• Numero di catalogo del prodotto

• Quantità richiesta

• Domanda annua prevista

• Dimensione del pacchetto preferita

• Applicazione prevista

• Modello di citometro a flusso

• Numero di particelle richiesto per test

• Tipo di molecola biotinilata

• Capacità vincolante richiesta

• Restrizioni del buffer

• Restrizioni conservative

• Requisiti di controllo della qualità

• Requisiti di documentazione

• Destinazione di consegna

Richiedi un campione o un preventivo in blocco

Le microsfere di streptavidina SAPS1UM-10 da 1 µm forniscono una piattaforma flessibile di particelle per l'immobilizzazione di biomolecole biotinilate, test con microsfere di citometria a flusso, ricerca su immunodosaggi, studi di legame proteico, cattura di acidi nucleici e produzione di reagenti di ricerca.

Il prodotto offre:

• Diametro nominale delle particelle 1 µm

• Superficie rivestita di streptavidina

• Sospensione di solidi all'1%.

• Cattura di biomolecole biotinilate

• Compatibilità con i test reporter di fluorescenza

• Fornitura di campioni e lotti pilota

• Capacità di produzione in serie

• Supporto per lo sviluppo di prodotti personalizzati

Per la valutazione del campione o l'acquisto di grandi quantità, fornire l'applicazione prevista, la quantità richiesta, la molecola biotinilata, la capacità legante desiderata, la configurazione del citometro a flusso, i requisiti di imballaggio e le specifiche del controllo di qualità.

Nome del prodotto: Microsfere di streptavidina da 1 µm
Numero di catalogo: SAPS1UM-10
Produttore: Shanghai SanYu Biotechnology Co., Ltd.
Diametro nominale delle particelle: 1 µm
Modificazione della superficie: di streptavidina :
Contenuto di solidi 1%
Applicazione primaria: Citometria a flusso e analisi di microsfere
Capacità di fornitura: Campioni, lotti pilota e produzione in serie
Uso previsto: Solo per uso di ricerca. Non per uso diagnostico o terapeutico.