Microesferas de estreptavidina 1um SAPS1UM-10 1%

Microesferas de estreptavidina de 1µm para citometria de fluxo

fornece microesferas de estreptavidina SAPS1UM-10 1µm para desenvolvimento de ensaios de citometria de fluxo, imobilização de biomoléculas biotiniladas, imunoensaios baseados em partículas, pesquisa de captura de afinidade e fabricação de reagentes a granel.

As microesferas SAPS1UM-10 têm diâmetro nominal de partícula de 1 µm e são fornecidas como uma suspensão de 1% de sólidos. A superfície da microesfera é revestida com estreptavidina, permitindo que as partículas capturem anticorpos biotinilados, antígenos, proteínas, peptídeos, oligonucleotídeos, DNA, RNA e outras moléculas contendo biotina.

O produto pode apoiar estudos de viabilidade laboratorial, otimização de ensaios de esferas, desenvolvimento em escala piloto, produção repetida e compras em massa por empresas de biotecnologia e organizações de pesquisa.

Resposta rápida do produto

SAPS1UM-10 é uma suspensão de microesferas revestidas com estreptavidina de 1 µm com 1% de sólidos. Ele foi projetado para imobilizar biomoléculas biotiniladas para ensaios de citometria de fluxo, pesquisa de imunoensaio, captura de ácido nucleico, estudos de ligação de afinidade e desenvolvimento de métodos analíticos baseados em partículas.

Destaques do produto

• Nome do produto: Microesferas de Estreptavidina de 1µm

• Número de catálogo: SAPS1UM-10

• Fabricante: Shanghai SanYu Biotecnologia Co., Ltd.

• Diâmetro nominal da partícula: 1µm

• Revestimento de superfície: Estreptavidina

• Conteúdo de sólidos: 1%

• Forma física: Suspensão aquosa de microesferas

• Aplicação primária: pesquisa por citometria de fluxo

• Princípio de ligação: afinidade estreptavidina-biotina

• Capacidade de fornecimento: Amostras, lotes piloto e produção em massa

• Personalização: Disponível conforme viabilidade do projeto

• Uso pretendido: Somente para uso em pesquisa

O que são microesferas de estreptavidina SAPS1UM-10?

SAPS1UM-10 consiste em microesferas de polímero de tamanho micrométrico com estreptavidina imobilizada na superfície da partícula.

As microesferas revestidas com estreptavidina fornecem um suporte sólido conveniente para fixar biomoléculas biotiniladas sem exigir que o usuário final realize acoplamento covalente direto à superfície da partícula.

Uma molécula biotinilada pode ser incubada com as microesferas e capturada através da interação estreptavidina-biotina de alta afinidade. As microesferas preparadas podem então ser usadas em ensaios de ligação baseados em partículas, análise de citometria de fluxo, captura de alvo, imobilização de biomoléculas e pesquisa de desenvolvimento de ensaios.

Moléculas de captura biotiniladas potenciais incluem:

• Anticorpos

• Antígenos

• Proteínas recombinantes

• Peptídeos

• Enzimas

• Lectinas

• Receptores

• Ligantes

• Oligonucleotídeos

• Sondas de DNA

• Sondas de RNA

• Aptâmeros

• Pequenas moléculas biotiniladas

O tamanho de partícula de 1 µm fornece um número de partículas relativamente alto por unidade de massa, mantendo uma superfície física adequada para imobilização de biomoléculas.

Como as partículas de 1 µm estão próximas da faixa de detecção inferior de alguns citômetros de fluxo convencionais, a compatibilidade do instrumento e as configurações de aquisição devem ser avaliadas durante o desenvolvimento do método.

Especificações Técnicas SAPS1UM-10

Os seguintes parâmetros devem ser confirmados através da especificação técnica final ou do Certificado de Análise específico do lote:

• Matriz de partículas

• Diâmetro de partícula medido

• Distribuição de tamanho de partícula

• Coeficiente de variação do tamanho das partículas

• Nível de revestimento de estreptavidina

• Capacidade de ligação à biotina

• Tampão de suspensão

• Estabilizador

• Surfactante

• Conservante

• Concentração do número de partículas

• Volume de embalagem

• Prazo de validade

• Condições de armazenamento

A capacidade de ligação deve ser relatada usando o método de teste real e os resultados específicos do lote, em vez de ser estimada a partir do tamanho das partículas ou do conteúdo de sólidos.

Como funciona a ligação estreptavidina-biotina

A estreptavidina é uma proteína de ligação à biotina com múltiplos locais de ligação. Quando um anticorpo, proteína, peptídeo ou ácido nucleico biotinilado é misturado com SAPS1UM-10, o grupo biotina interage com o revestimento de estreptavidina na superfície da microesfera.

Isto cria um método rápido e estável para imobilizar uma ampla gama de biomoléculas.

Uma estrutura típica é:

Superfície da Microesfera – Estreptavidina – Biotina – Molécula de Captura

Por exemplo:

Microesfera – Estreptavidina – Anticorpo Biotinilado

O anticorpo imobilizado pode subsequentemente capturar o seu antígeno correspondente. Um anticorpo de detecção marcado com fluorescência pode então ser introduzido e a fluorescência associada à microesfera resultante pode ser medida por citometria de fluxo.

Vantagens da imobilização com estreptavidina-biotina

• Acessório simples de biomolécula

• Nenhuma ativação direta da microesfera exigida pelo usuário final

• Compatível com muitas biomoléculas biotiniladas

• Orientação flexível da molécula de captura

• Adequado para desenvolvimento de ensaios modulares

• Substituição conveniente de um ligante biotinilado por outro

• Compatível com fluxos de trabalho de imunoensaio e ácido nucleico

• Adequado para pesquisa de analito único e multiplex

O desempenho final da ligação depende do nível de biotinilação, tamanho molecular, condições de incubação, acessibilidade à superfície, composição do tampão e efeitos estéricos.

Por que escolher microesferas revestidas com estreptavidina de 1 µm?

Alto número de partículas por unidade de volume

Em comparação com microesferas maiores com o mesmo teor de sólidos, as microesferas de 1 µm fornecem um número maior de partículas individuais.

Isto pode ser útil quando um ensaio requer:

• Um grande número de eventos de ligação independentes

• Baixo consumo de microesferas por teste

• Formatos de reação de alto rendimento

• Pequenos volumes de amostra

• Fluxos de trabalho baseados em microplacas

• Numerosos eventos de citometria de fluxo

A concentração real do número de partículas deve ser determinada a partir do diâmetro medido das partículas, da densidade das partículas, do conteúdo de sólidos e da caracterização específica do lote.

Grande área de superfície coletiva

Uma suspensão contendo muitas microesferas pequenas pode fornecer uma área superficial total substancial para imobilização de biomoléculas.

Contudo, a capacidade de ligação utilizável é determinada por mais do que a área superficial da partícula. A densidade da estreptavidina, a atividade de revestimento, a acessibilidade estérica, o tamanho do ligante e o nível de biotinilação também afetam o resultado final.

Projeto de ensaio modular

Uma plataforma de microesferas revestidas com estreptavidina pode ser combinada com diferentes moléculas de captura biotiniladas.

Isso permite que os pesquisadores desenvolvam vários ensaios sem produzir um conjugado de partícula covalente separado para cada sonda de anticorpo, proteína ou ácido nucleico.

Adequado para detecção baseada em fluorescência

SAPS1UM-10 não precisa ser intrinsecamente fluorescente para suportar um ensaio de citometria de fluxo.

Um sinal de fluorescência pode ser introduzido através de:

• Um ligante biotinilado marcado com fluorescência

• Uma molécula alvo fluorescente

• Um anticorpo de detecção fluorescente

• Um anticorpo secundário fluorescente

• Uma sonda de ácido nucleico fluorescente

• Um conjugado repórter fluorescente

A fluorescência repórter identifica eventos de ligação associados à população de microesferas.

Adequado para desenvolvimento de pesquisa para produção

O SAPS1UM-10 pode suportar testes de viabilidade iniciais seguidos de fabricação em escala piloto e em massa após a confirmação dos requisitos técnicos.

Principais recursos do produto

Diâmetro nominal da partícula de 1µm

O tamanho de partícula em escala micrométrica é adequado para estudos de ligação baseados em partículas e fluxos de trabalho otimizados de citometria de fluxo.

Superfície revestida com estreptavidina

A superfície da partícula é projetada para capturar biomoléculas biotiniladas através da afinidade estreptavidina-biotina.

Suspensão de Sólidos a 1%

O produto é fornecido com 1% de sólidos e pode ser diluído de acordo com o número necessário de microesferas, volume de ensaio e taxa de eventos de citometria de fluxo.

Imobilização Flexível de Biomoléculas

A mesma plataforma de microesferas pode ser usada com diferentes anticorpos, proteínas, peptídeos ou sondas de ácido nucleico biotinilados.

Não é necessária ativação de carbodiimida pelo usuário final

Quando uma molécula biotinilada adequada está disponível, ela pode ser imobilizada sem realizar a ativação de grupos carboxila por EDC/NHS.

Compatível com ensaios de repórter fluorescente

As microesferas podem ser combinadas com reagentes de detecção baseados em fluorescência para análise de citometria de fluxo.

Adequado para pesquisas Singleplex e Multiplex

Diferentes populações de microesferas, ligantes de captura ou códigos de fluorescência podem ser avaliados durante o desenvolvimento do ensaio multiplex.

Capacidade de fabricação em massa

Shanghai SanYu Biotechnology Co., Ltd. oferece suporte à avaliação de amostras, produção piloto, pedidos repetidos, projetos OEM e fornecimento em massa.

Aplicações em Citometria de Fluxo

Desenvolvimento de imunoensaio baseado em esferas

SAPS1UM-10 pode ser usado como suporte de fase sólida em ensaios de pesquisa para detecção de:

• Proteínas

• Anticorpos

• Antígenos

• Citocinas

• Hormônios

• Biomarcadores

• Alvos associados a patógenos

• Moléculas derivadas de células

• Analitos ambientais

• Compostos de pesquisa

Um ensaio típico de sanduíche à base de esferas usa:

1. Um anticorpo de captura biotinilado imobilizado na microesfera.

2. Um analito alvo capturado da amostra.

3. Um anticorpo de detecção fluorescente ligado ao alvo capturado.

4. Citometria de fluxo para medir a fluorescência associada a microesferas.

Imobilização de Anticorpos Biotinilados

Os anticorpos biotinilados podem ser ligados ao SAPS1UM-10 sem ativação química direta da microesfera.

As possíveis aplicações de pesquisa incluem:

• Detecção de antígeno

• Triagem de anticorpos

• Triagem de hibridoma

• Análise de interação proteica

• Teste de viabilidade de ensaio

• Comparação de captura-anticorpo

• Otimização de reagentes de detecção

Estudos de ligação de proteínas e peptídeos

Proteínas e peptídeos biotinilados podem ser imobilizados para:

• Estudos de ligação de anticorpos

• Estudos de interação receptor-ligante

• Pesquisa de interação proteína-proteína

• Triagem de epítopos

• Pesquisa de biomarcadores

• Ensaios de descoberta de drogas

Captura de Ácido Nucleico

Oligonucleotídeos biotinilados, DNA, RNA e aptâmeros podem ser ligados à superfície da microesfera.

As aplicações potenciais incluem:

• Ensaios de hibridização

• Pesquisa de detecção de mutação

• Desenvolvimento de método de genotipagem

• Captura específica de sequência

• Estudos de ligação de ácidos nucleicos

• Detecção baseada em aptâmero

• Pesquisa de diagnóstico molecular

• Captura de produto PCR

Pesquisa de ligação à superfície celular

Quando revestido com um ligante biotinilado adequado, o SAPS1UM-10 pode ser avaliado quanto à ligação a receptores específicos da superfície celular.

A interação entre as partículas e as células deve ser cuidadosamente otimizada porque a concentração de microesferas, a densidade do ligante, o tempo de incubação, a temperatura, a condição celular e os procedimentos de lavagem podem afetar o resultado.

Pesquisa de citometria de fluxo multiplex

SAPS1UM-10 pode ser incorporado em uma plataforma multiplex quando puder ser distinguido de outras populações de microesferas.

As estratégias de diferenciação potenciais incluem:

• Diferentes tamanhos de partículas

• Diferentes códigos de fluorescência interna

• Diferentes intensidades de fluorescência

• Diferentes cores visíveis

• Diferentes canais de repórteres

• Diferentes moléculas de captura de superfície

Não se deve presumir que o produto SAPS1UM-10 padrão contém um código de fluorescência interno, a menos que isso seja indicado na especificação do produto.

Moléculas biotiniladas compatíveis com SAPS1UM-10

SAPS1UM-10 pode ser avaliado com muitos tipos de moléculas biotiniladas.

Anticorpos Biotinilados

Os formatos aplicáveis ​​podem incluir:

• IgG completo

• Fragmentos fabulosos

• Fragmentos F(ab′)₂

• Anticorpos recombinantes

• Anticorpos de domínio único

• Outros formatos de anticorpos projetados

O número e a localização dos grupos de biotina podem afetar a orientação dos anticorpos e a atividade de ligação ao antígeno.

Proteínas Biotiniladas

Exemplos potenciais incluem:

• Antígenos

• Enzimas

• Receptores

• Citocinas

• Fatores de crescimento

• Proteínas de ligação

• Proteínas de fusão recombinantes

Peptídeos Biotinilados

Os peptídeos biotinilados podem suportar:

• Mapeamento de epítopos

• Triagem de anticorpos

• Estudos de ligação ao receptor

• Pesquisa de substrato enzimático

• Triagem para descoberta de drogas

Ácidos Nucleicos Biotinilados

Os formatos potenciais incluem:

• DNA de fita simples

• DNA de fita dupla

• ARN

• Produtos PCR

• Sondas oligonucleotídicas

• Aptâmeros

• Análogos de ácidos nucleicos modificados

Moléculas Pequenas Biotiniladas

Pequenos compostos biotinilados podem ser ligados quando o grupo biotina permanece acessível à superfície da estreptavidina.

Um espaçador adequado pode reduzir o impedimento estérico entre a superfície da microesfera e a molécula alvo.

Fluxo de trabalho recomendado de imobilização de ligante biotinilado

O protocolo a seguir é um ponto de partida geral para o desenvolvimento. As condições finais devem ser otimizadas de acordo com a molécula biotinilada e o ensaio pretendido.

1. Ressuspender as microesferas

Deixe a suspensão de microesferas atingir a temperatura de manuseio recomendada.

Misture bem o frasco usando inversão suave, rotação ou vórtice controlado até que a suspensão fique homogênea.

Evite espuma excessiva.

2. Calcule a quantidade necessária de microesferas

Determine a quantidade de SAPS1UM-10 necessária de acordo com:

• Número de testes

• Microesferas por teste

• Volume de ensaio

• Capacidade de ligação necessária

• Concentração amostral esperada

• Contagem de eventos de citometria de fluxo desejada

Não calcule a carga de ligante apenas a partir do conteúdo de sólidos. Use capacidade de ligação específica do lote, quando disponível.

3. Lave as microesferas

Transfira a suspensão de microesferas necessária para um tubo limpo e de baixa ligação.

Lave as partículas usando um tampão de ligação compatível para remover aditivos de armazenamento que possam interferir no ensaio.

Possíveis abordagens de separação incluem:

• Centrifugação

• Filtração por membrana

• Filtração de fluxo tangencial

• Outros métodos validados de recuperação de partículas

O método apropriado depende da matriz da microesfera, densidade, tamanho de partícula, formulação e volume de processamento.

4. Prepare o ligante biotinilado

Diluir o anticorpo biotinilado, proteína, peptídeo ou ácido nucleico em um tampão compatível.

O tampão não deve conter excesso de biotina livre ou outras substâncias que competem pelos locais de ligação da estreptavidina.

5. Incubar as microesferas com o ligante

Combine as microesferas lavadas com o ligante biotinilado.

Incubar com mistura suave para manter as partículas suspensas e promover a exposição uniforme do ligante.

Os parâmetros que requerem otimização incluem:

• Concentração de ligante

• Concentração de microesferas

• Tempo de incubação

• Temperatura

• Composição do buffer

• PH tampão

• Velocidade de mistura

• Volume total de reação

6. Remover ligante não ligado

Separe e lave as microesferas para remover moléculas biotiniladas não ligadas.

A lavagem insuficiente pode aumentar o sinal de fundo, enquanto a lavagem excessiva ou brusca pode reduzir a recuperação.

7. Bloqueie a superfície da microesfera

Use um reagente de bloqueio compatível com a aplicação para reduzir a adsorção não específica.

Os bloqueadores potenciais podem incluir:

• Albumina sérica bovina

• Caseína

• Gelatina de peixe

• Imunoglobulina não imune

• Polímeros bloqueadores sintéticos

• Tampões comerciais de bloqueio de partículas

O agente bloqueador deve ser selecionado de acordo com a matriz do ensaio e o sistema de detecção.

8. Ressuspender e armazenar as microesferas revestidas

Ressuspender as microesferas preparadas num tampão de armazenamento ou ensaio adequado.

Avaliar:

• Estabilidade de dispersão

• Retenção de ligante

• Atividade de vinculação

• Ligação não específica

• Estabilidade microbiana

• Fundo de fluorescência

• Estabilidade de armazenamento a curto e longo prazo

Fluxo de trabalho de desenvolvimento de ensaio de citometria de fluxo

1. Preparar Microesferas de Captura

Imobilize a molécula de captura biotinilada selecionada em SAPS1UM-10.

Lave e bloqueie as microesferas revestidas antes de testar as amostras.

2. Preparar controles experimentais

Os controles recomendados podem incluir:

• Buffer em branco

• Controle de microesferas não revestidas

• Microesfera de estreptavidina sem ligante biotinilado

• Microesfera revestida com ligante biotinilado sem amostra

• Amostra negativa

• Amostra positiva

• Controle apenas para repórteres

• Controle de isótipo quando apropriado

• Controles de cor única para experimentos multicoloridos

3. Incubar com a amostra

Combine as microesferas preparadas com a amostra de teste.

Otimizar:

• Volume de amostra

• Concentração de microesferas

• Tempo de incubação

• Temperatura

• Misturando

• Condições de lavagem

• Diluição da amostra

• Compatibilidade de matriz

4. Adicione o repórter fluorescente

Adicione um anticorpo de detecção fluorescente, anticorpo secundário, sonda ou molécula repórter.

O fluoróforo repórter deve ser compatível com os lasers e detectores disponíveis no citômetro de fluxo.

5. Lave as microesferas

Remova o repórter fluorescente não ligado para reduzir a fluorescência de fundo.

Mantenha a recuperação adequada das microesferas durante todo o procedimento de lavagem.

6. Ressuspender para Citometria de Fluxo

Ressuspender o pellet de microesferas final em um tampão de aquisição limpo e compatível.

Filtre o buffer quando for necessário um fundo com baixo teor de partículas.

7. Adquira as Microesferas

Use parâmetros de dispersão e fluorescência para identificar a população de microesferas.

Os possíveis gráficos incluem:

• Dispersão direta versus dispersão lateral

• Dispersão versus fluorescência repórter

• Histograma de fluorescência do repórter

• Área de fluorescência versus altura de fluorescência

• Área de dispersão versus largura de dispersão

8. Analise os resultados

Os possíveis resultados analíticos incluem:

• Intensidade mediana de fluorescência

• Intensidade média de fluorescência

• Porcentagem de microesferas positivas

• Largura de distribuição de fluorescência

• Relação sinal-fundo

• Curva dose-resposta

• Pesquisa de limite de detecção

• Repetibilidade

• Recuperação

• Especificidade

• Reatividade cruzada

O limiar que define uma população de microesferas positivas deve ser estabelecido utilizando controlos negativos apropriados.

Detecção de Microesferas de 1µm por Citometria de Fluxo

A capacidade de detectar microesferas de 1 µm depende do citômetro de fluxo.

Fatores importantes do instrumento incluem:

• Comprimento de onda do laser

• Potência laser

• Óptica de dispersão frontal

• Óptica de dispersão lateral

• Sensibilidade do detector

• Configuração do filtro óptico

• Canal de gatilho

• Limite de disparo

• Projeto de célula de fluxo

• Taxa de fluxo de amostra

• Ruído eletrônico

• Limpeza de fluido de bainha

Detecção de dispersão

Alguns citômetros de fluxo convencionais podem identificar microesferas de polímero de 1 µm usando dispersão frontal e lateral, enquanto outros instrumentos podem exigir configurações otimizadas de partículas pequenas.

O sinal de dispersão medido também depende do índice de refração da microesfera e da configuração óptica do instrumento.

Detecção Baseada em Fluorescência

Quando a separação por dispersão é insuficiente, a fluorescência associada a um repórter ligado pode fornecer um método mais seletivo para identificar eventos de microesferas.

Possíveis estratégias de desencadeamento incluem:

• Acionamento de dispersão direta

• Acionamento de dispersão lateral

• Acionamento de fluorescência

• Dispersão combinada e controle de fluorescência

Comece com uma série de diluição

Uma série de diluições ajuda a identificar uma concentração de microesferas que fornece:

• Taxas de eventos estáveis

• Eventos coincidentes mínimos

• Fluorescência reproduzível

• Limpar separação de fundo

• Tempo de aquisição adequado

• Contagens adequadas de eventos

Microesferas excessivamente concentradas podem produzir detecção de enxame ou coincidência, fazendo com que múltiplas partículas sejam registradas como um evento.

Use tampões e tubos limpos

Para análise de partículas de 1 µm, a contaminação por partículas de tampões, tubos, pontas de pipetas e fluidos de instrumentos pode interferir na população de microesferas.

Execute um buffer em branco antes de adquirir a amostra.

Gravar configurações do instrumento

Para reprodutibilidade, documente:

• Modelo de citômetro de fluxo

• Configuração do laser

• Filtros detectores

• Configurações de dispersão

• Configurações de fluorescência

• Parâmetro de gatilho

• Limite de disparo

• Taxa de fluxo de amostra

• Diluição de microesferas

• Tempo de aquisição

• Número de eventos coletados

• Portões de análise

Bloqueio e redução de vinculação não específica

A adsorção não específica pode aumentar a fluorescência de fundo e reduzir a sensibilidade do ensaio.

As possíveis causas incluem:

• Bloqueio inadequado

• Excesso de ligante de captura

• Excesso de repórter fluorescente

• Buffer incompatível

• Componentes de amostra hidrofóbicos

• Alta concentração de proteínas

• Anticorpos agregados

• Lavagem insuficiente

• Agregação de microesferas

• Interferência amostra-matriz

Otimize o reagente de bloqueio

Compare várias formulações de bloqueio em vez de presumir que um bloqueador funcionará para cada ensaio.

Avalie ambos:

• Redução na fluorescência da amostra negativa

• Retenção de sinal de amostra positiva

Otimize os níveis de sal e detergente

Pequenas quantidades de detergente compatível podem melhorar a estabilidade da suspensão e reduzir a adsorção inespecífica.

O excesso de detergente pode afetar as interações entre biomoléculas ou o desempenho do ensaio a jusante.

Titule o Ligante de Captura

A aplicação de mais ligante biotinilado do que o necessário pode aumentar o consumo de reagentes e pode contribuir para o apinhamento estérico.

Teste diversas concentrações de ligantes e selecione o nível mais baixo que mantenha o desempenho adequado do ensaio.

Titule o Repórter

Uma concentração excessiva de repórter fluorescente pode aumentar o fundo.

A titulação do repórter deve ser realizada utilizando amostras positivas e negativas.

Incluir controles apropriados

Os controles ajudam a distinguir a verdadeira ligação de destino de:

• Autofluorescência de microesferas

• Adsorção de repórter

• Antecedentes relacionados à estreptavidina

• Efeitos de matriz de amostra

• Interações de anticorpos não específicos

Controle de qualidade e consistência lote a lote

Para o desenvolvimento de reagentes para citometria de fluxo e para a compra a granel, a consistência do produto deve ser avaliada utilizando especificações acordadas.

Os parâmetros potenciais de controle de qualidade incluem:

• Diâmetro nominal das partículas

• Distribuição de tamanho de partícula

• Coeficiente de variação do tamanho das partículas

• Aparência de suspensão

• Conteúdo de sólidos

• Consistência do revestimento de estreptavidina

• Capacidade de ligação à biotina

• Desempenho de dispersão

• Nível agregado

• Fluorescência de fundo

• Recuperação de partículas

• Controle microbiano

• Integridade da embalagem

• Estabilidade de armazenamento

Capacidade de ligação à biotina

A capacidade de ligação pode ser medida utilizando uma sonda biotinilada definida.

O valor informado depende de:

• Tipo de sonda

• Tamanho molecular

• Número de grupos de biotina

• Buffer de teste

• Tempo de incubação

• Método de detecção

• Base de cálculo

O método de teste deve ser indicado ao comparar produtos ou lotes de produção.

CQ de citometria de fluxo

Um procedimento de CQ baseado em citometria de fluxo pode avaliar:

• Posição da população de microesferas

• Fluorescência do repórter após ligação de uma sonda padrão

• Largura de distribuição

• Porcentagem de eventos positivos

• Separação de fundo

• Repetibilidade

• População agregada

As mesmas configurações de instrumento e aquisição devem ser usadas ao comparar lotes.

Documentação Específica do Lote

A documentação disponível pode incluir:

• Certificado de Análise

• Especificação do produto

• Resultados de tamanho de partícula

• Resultados de conteúdo de sólidos

• Resultados de capacidade de ligação

• Ficha de dados de segurança

• Instruções de manuseio

• Recomendações de armazenamento

• Número do lote e data de produção

Os testes necessários e os limites de aceitação devem ser acordados antes da produção em massa.

Fabricação em massa e personalização

apoia projetos de microesferas de estreptavidina, desde avaliação de pesquisa até fabricação em massa.

Avaliação de amostra de pesquisa

Amostras podem ser usadas para avaliar:

• Detecção de microesferas

• Atividade de estreptavidina

• Ligação de ligante biotinilado

• Dispersão de partículas

• Ligação não específica

• Compatibilidade com citometria de fluxo

• Viabilidade do ensaio

Produção em escala piloto

Os lotes piloto podem suportar:

• Otimização de carregamento de ligante

• Desenvolvimento de ensaio

• Teste de estabilidade

• Avaliação de embalagens

• Desenvolvimento de método de controle de qualidade

• Verificação do cliente

• Transferência de processo

Produção em massa

A produção em massa pode ser organizada após a confirmação das especificações do produto e dos requisitos de qualidade.

As informações necessárias para avaliação do projeto podem incluir:

• Quantidade necessária

• Demanda anual esperada

• Tamanho de pacote preferido

• Aplicação pretendida

• Diâmetro de partícula necessário

• Conteúdo de sólidos necessário

• Capacidade de ligação necessária

• Requisitos de buffer de suspensão

• Restrições preservativas

• Requisitos de controle de qualidade

• Requisitos de documentação

• Cronograma de entrega

• Destino de entrega

Tamanhos de partículas personalizados

Diâmetros de partículas alternativos podem ser discutidos para projetos qualificados.

O tamanho das partículas afeta:

• Número de partícula

• Superfície coletiva

• Comportamento de acomodação

• Detecção de citometria de fluxo

• Lavagem e recuperação

• Cinética do ensaio

• Carregamento de biomoléculas

Carregamento personalizado de estreptavidina

Diferentes níveis de revestimento de estreptavidina ou especificações de capacidade de ligação podem ser avaliados de acordo com os requisitos do projeto e viabilidade técnica.

Codificação de fluorescência personalizada

Para projetos de citometria de fluxo multiplex, microesferas de estreptavidina internamente fluorescentes ou codificadas por cores podem ser discutidas.

As possíveis direções de personalização incluem:

• Diferentes cores de fluorescência

• Diferentes intensidades de fluorescência

• Vários códigos internos

• Comprimentos de onda alternativos de excitação e emissão

Concentração e embalagem personalizadas

As opções possíveis podem incluir:

• Concentrações alternativas de sólidos

• Tamanhos de amostras de laboratório

• Pacotes em escala piloto

• Contentores a granel

• Volumes de preenchimento específicos do cliente

• Etiquetas OEM

• Números de catálogo específicos do cliente

Recomendações de manuseio e armazenamento

Seguir as condições de armazenamento indicadas no rótulo do produto final, ficha técnica e Certificado de Análise.

As recomendações gerais incluem:

• Armazene refrigerado quando especificado.

• Não congele a menos que a estabilidade do congelamento-descongelamento tenha sido validada.

• Mantenha o recipiente bem fechado.

• Armazene o frasco na vertical.

• Proteja as microesferas revestidas de proteína contra contaminação.

• Misture bem antes da amostragem.

• Evite permitir que as partículas sequem.

• Use pontas de pipeta limpas e tubos de baixa ligação.

• Não devolva o material diluído ao frasco original.

• Evite o armazenamento prolongado das diluições de trabalho preparadas.

• Registre o número do lote e a data de abertura.

Resuspensão

As microesferas podem assentar durante o armazenamento.

Antes de usar:

1. Deixe o frasco atingir a temperatura de manuseio recomendada.

2. Inverta ou gire suavemente o frasco.

3. Aplique vórtice controlado quando permitido.

4. Confirme se a suspensão é homogênea.

5. Inspecione quanto a agregados visíveis ou irreversíveis.

Evite congelar

O congelamento pode causar agregação de microesferas e reduzir a atividade de ligação da estreptavidina.

O produto congelado deve ser avaliado antes do uso e não deve ser considerado que atenda às especificações originais.

Evite a contaminação gratuita por biotina

Tampões, reagentes de bloqueio, amostras ou suplementos contendo biotina livre podem ocupar locais de ligação à estreptavidina.

Revise todos os componentes do ensaio quando for observada uma ligação inesperadamente baixa do ligante.

Perguntas frequentes

O que é SAPS1UM-10?

SAPS1UM-10 é uma suspensão de microesferas revestidas com estreptavidina de 1 µm com 1% de sólidos, desenvolvida para ligação de moléculas biotiniladas em citometria de fluxo e pesquisa de ensaios baseados em esferas.

Quem fabrica SAPS1UM-10?

SAPS1UM-10 é fornecido pela Shanghai SanYu Biotechnology Co., Ltd.

Qual é o diâmetro da partícula?

O diâmetro nominal da partícula é de 1 µm.

O diâmetro medido e a distribuição granulométrica devem ser confirmados através da documentação específica do lote.

Qual é o conteúdo de sólidos?

SAPS1UM-10 é fornecido com 1% de sólidos.

As microesferas são magnéticas?

SAPS1UM-10 não deve ser considerado magnético, a menos que as propriedades magnéticas sejam especificamente declaradas na especificação do produto.

Os procedimentos de separação e lavagem devem ser selecionados de acordo com a matriz de partículas confirmada.

As microesferas são fluorescentes?

Não se deve presumir que o produto SAPS1UM-10 padrão contém um corante fluorescente interno, a menos que a fluorescência esteja especificamente listada na especificação.

A detecção por citometria de fluxo pode usar dispersão ou fluorescência de um repórter ligado.

Quais moléculas podem se ligar às microesferas?

A superfície da estreptavidina pode ser usada para capturar anticorpos biotinilados, proteínas, peptídeos, oligonucleotídeos, DNA, RNA, aptâmeros e outras moléculas contendo biotina.

Os anticorpos podem ser anexados diretamente?

Um anticorpo biotinilado pode ser ligado através da interação estreptavidina-biotina.

Um anticorpo não modificado não se ligará especificamente através deste mecanismo, a menos que seja primeiro biotinilado ou ligado através de outro reagente compatível.

A ativação do EDC/NHS é necessária?

A ativação de EDC/NHS geralmente não é necessária ao anexar uma molécula biotinilada a uma microesfera revestida com estreptavidina.

Qual é a capacidade de ligação?

A capacidade de encadernação deve ser confirmada utilizando o Certificado de Análise específico do lote ou especificação técnica.

Não deve ser calculado apenas com base no conteúdo de sólidos.

O SAPS1UM-10 pode ser usado em citometria de fluxo?

Sim. Pode ser avaliado em ensaios de citometria de fluxo, desde que o instrumento possa detectar a população de partículas de 1 µm ou o sinal repórter fluorescente associado.

Um citômetro de fluxo convencional pode detectar microesferas de 1 µm?

A detecção depende do instrumento.

Alguns citômetros de fluxo convencionais podem resolver partículas de 1 µm usando configurações de dispersão otimizadas, enquanto outros podem exigir detecção desencadeada por fluorescência ou uma plataforma de citometria de fluxo de partículas pequenas.

O SAPS1UM-10 pode ser usado em um imunoensaio sanduíche?

Sim. Um anticorpo de captura biotinilado pode ser imobilizado na microesfera, seguido de captura e detecção do alvo com um anticorpo repórter fluorescente.

Todas as condições de ensaio devem ser otimizadas experimentalmente.

O produto pode ser usado para ensaios de ácidos nucleicos?

Sim. Oligonucleotídeos biotinilados, DNA, RNA, produtos de PCR e aptâmeros podem ser avaliados quanto à imobilização ou captura de alvo.

O SAPS1UM-10 pode ser usado em ensaios multiplex?

Pode ser incorporado num sistema multiplex quando a população de partículas pode ser distinguida de outras populações de microesferas.

Pode ser necessária uma estratégia de codificação fluorescente personalizada.

Como as microesferas devem ser lavadas?

O método de lavagem depende da matriz da partícula, densidade, tampão e volume de processamento.

A centrifugação ou métodos baseados em membrana podem ser avaliados e validados para recuperação.

Por que a recuperação de microesferas é baixa após a lavagem?

As possíveis causas incluem:

• Força centrífuga inadequada

• Tempo de centrifugação curto

• Perda durante a remoção do sobrenadante

• Adesão de partículas aos tubos

• Retenção de membrana

• Agregação

• Método incorreto de separação de partículas

Como a ligação não específica pode ser reduzida?

Otimize o agente bloqueador, as condições de lavagem, o nível de detergente, a concentração do ligante de captura, a concentração do repórter, o tempo de incubação e a diluição da amostra.

Podem ser usados ​​tampões contendo biotina livre?

A biotina livre pode competir com a molécula de captura biotinilada pelos locais de ligação à estreptavidina e geralmente deve ser evitada durante a imobilização do ligante.

O produto deve ser diluído antes do uso?

Sim. A concentração de trabalho deve ser selecionada de acordo com o número necessário de partículas, volume de ensaio, taxa de eventos e capacidade de ligação.

Como o SAPS1UM-10 deve ser misturado?

Inverta, gire suavemente ou use vórtice controlado até que a suspensão fique homogênea.

Evite espuma excessiva e tratamento agressivo.

O produto pode ser congelado?

O congelamento geralmente não é recomendado porque pode causar agregação irreversível e perda de atividade funcional.

A produção em massa está disponível?

Sim. Shanghai SanYu Biotechnology Co., Ltd. oferece suporte à avaliação de amostras, lotes piloto, pedidos repetidos e fabricação em massa.

O tamanho ou a concentração das partículas podem ser personalizados?

Tamanhos alternativos de partículas, concentrações de sólidos, tamanhos de embalagens, níveis de revestimento de estreptavidina e opções de codificação de fluorescência podem ser discutidos de acordo com a viabilidade técnica.

Quais informações são necessárias para uma cotação?

Forneça:

• Número de catálogo do produto

• Quantidade necessária

• Demanda anual esperada

• Tamanho de pacote preferido

• Aplicação pretendida

• Modelo de citômetro de fluxo

• Número de partículas necessário por teste

• Tipo de molécula biotinilada

• Capacidade de ligação necessária

• Restrições de buffer

• Restrições preservativas

• Requisitos de controle de qualidade

• Requisitos de documentação

• Destino de entrega

Solicite uma amostra ou cotação em massa

As microesferas de estreptavidina SAPS1UM-10 1µm fornecem uma plataforma de partículas flexível para imobilização de biomoléculas biotiniladas, ensaios de citometria de fluxo, pesquisa de imunoensaio, estudos de ligação de proteínas, captura de ácido nucleico e produção de reagentes de pesquisa.

O produto oferece:

• Diâmetro nominal de partícula de 1 µm

• Superfície revestida com estreptavidina

• Suspensão de sólidos a 1%

• Captura de biomoléculas biotiniladas

• Compatibilidade com ensaios de repórter de fluorescência

• Fornecimento de amostra e lote piloto

• Capacidade de fabricação em massa

• Suporte ao desenvolvimento de produtos personalizados

Para avaliação de amostras ou compra a granel, forneça a aplicação pretendida, a quantidade necessária, a molécula biotinilada, a capacidade de ligação desejada, a configuração do citômetro de fluxo, os requisitos de embalagem e as especificações de controle de qualidade.

Nome do produto: Microesferas de estreptavidina de 1 µm
Número de catálogo: SAPS1UM-10
Fabricante: Shanghai SanYu Biotechnology Co., Ltd.
Diâmetro nominal da partícula: 1 µm
Modificação da superfície: de estreptavidina :
Conteúdo de sólidos 1%
Aplicação primária: Citometria de fluxo e ensaio de esferas
Capacidade de fornecimento de pesquisa: Amostras, lotes piloto e produção em massa
Uso pretendido: somente para uso em pesquisa. Não para uso diagnóstico ou terapêutico.